天津市pcr上崗證考試題及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的中文名稱是（）A.聚合酶鏈反應(yīng)B.核酸內(nèi)切酶反應(yīng)C.連接酶反應(yīng)答案：A2.PCR反應(yīng)中，哪種物質(zhì)提供了合成新鏈的模板（）A.dNTPB.引物C.模板DNA答案：C3.以下哪種酶是PCR反應(yīng)所必需的（）A.逆轉(zhuǎn)錄酶B.Taq酶C.限制酶答案：B4.PCR反應(yīng)的變性溫度一般為（）A.90-95℃B.50-60℃C.70-75℃答案：A5.在PCR反應(yīng)中，引物的作用是（）A.提供起始合成的3'-OH末端B.提供起始合成的5'-OH末端C.與模板結(jié)合進(jìn)行修復(fù)答案：A6.PCR產(chǎn)物的特異性主要取決于（）A.引物的特異性B.Taq酶的活性C.dNTP的濃度答案：A7.以下哪種物質(zhì)不是PCR反應(yīng)體系的成分（）A.Mg2+B.乙醇C.緩沖液答案：B8.如果PCR擴(kuò)增沒(méi)有得到預(yù)期產(chǎn)物，可能的原因不包括（）A.引物設(shè)計(jì)錯(cuò)誤B.模板量過(guò)多C.退火溫度過(guò)高答案：B9.實(shí)時(shí)熒光定量PCR主要用于（）A.基因表達(dá)定量分析B.基因克隆C.基因測(cè)序答案：A10.PCR反應(yīng)中，退火過(guò)程是（）A.引物與模板結(jié)合B.模板變性C.新鏈延伸答案：A二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)體系包括以下哪些成分（）A.模板DNAB.引物C.Taq酶D.dNTPE.緩沖液答案：ABCDE2.影響PCR擴(kuò)增效率的因素有（）A.引物長(zhǎng)度B.退火溫度C.模板純度D.Taq酶活性E.dNTP濃度答案：ABCDE3.以下哪些情況可能導(dǎo)致PCR出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果（）A.引物二聚體形成B.實(shí)驗(yàn)室污染C.氣溶膠污染D.交叉污染E.樣本中存在抑制物答案：BCD4.實(shí)時(shí)熒光定量PCR中，常用的熒光染料有（）A.SYBRGreenIB.溴化乙錠C.TaqMan探針D.熒光素E.羅丹明答案：AC5.在PCR引物設(shè)計(jì)時(shí)，需要考慮的因素有（）A.引物長(zhǎng)度B.引物特異性C.引物的GC含量D.引物的二級(jí)結(jié)構(gòu)E.引物與模板的互補(bǔ)性答案：ABCDE6.PCR技術(shù)在以下哪些領(lǐng)域有應(yīng)用（）A.醫(yī)學(xué)診斷B.法醫(yī)學(xué)鑒定C.基因工程D.疾病研究E.食品檢測(cè)答案：ABCDE7.以下關(guān)于Taq酶的說(shuō)法正確的是（）A.具有熱穩(wěn)定性B.是一種DNA聚合酶C.催化dNTP合成DNAD.最佳作用溫度為72℃左右E.來(lái)源于嗜熱微生物答案：ABCDE8.為避免PCR污染，可以采取的措施有（）A.嚴(yán)格分區(qū)操作B.使用一次性耗材C.定期清潔實(shí)驗(yàn)室D.實(shí)驗(yàn)后紫外線照射E.合理設(shè)計(jì)引物答案：ABCD9.PCR產(chǎn)物的分析方法有（）A.瓊脂糖凝膠電泳B.聚丙烯酰胺凝膠電泳C.測(cè)序D.酶切分析E.雜交分析答案：ABCDE10.以下哪些是PCR技術(shù)的特點(diǎn)（）A.特異性強(qiáng)B.靈敏度高C.簡(jiǎn)便快捷D.可定量分析E.對(duì)模板要求低答案：ABCDE三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)中，dNTP可以隨機(jī)合成新的DNA鏈。（）答案：錯(cuò)誤2.引物越長(zhǎng)，PCR特異性越好。（）答案：錯(cuò)誤3.Taq酶在PCR反應(yīng)中可以反復(fù)使用。（）答案：正確4.只要有模板DNA，PCR就能成功擴(kuò)增。（）答案：錯(cuò)誤5.實(shí)時(shí)熒光定量PCR只能檢測(cè)DNA。（）答案：錯(cuò)誤6.引物二聚體的形成會(huì)影響PCR擴(kuò)增效率。（）答案：正確7.PCR反應(yīng)不需要緩沖液來(lái)維持合適的pH值。（）答案：錯(cuò)誤8.所有的DNA聚合酶都可以用于PCR反應(yīng)。（）答案：錯(cuò)誤9.瓊脂糖凝膠電泳只能檢測(cè)PCR產(chǎn)物的大小，不能判斷其純度。（）答案：錯(cuò)誤10.提高退火溫度一定能提高PCR特異性。（）答案：錯(cuò)誤四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共4題）1.簡(jiǎn)述PCR的基本原理。答案：PCR是一種體外擴(kuò)增DNA的技術(shù)。以DNA為模板，在Taq酶的作用下，以四種dNTP為原料，利用引物與模板特異性結(jié)合，經(jīng)過(guò)變性（使模板DNA雙鏈解開(kāi)）、退火（引物與模板結(jié)合）、延伸（合成新的DNA鏈）三個(gè)步驟的多次循環(huán)，使目的DNA片段得到大量擴(kuò)增。2.簡(jiǎn)述引物設(shè)計(jì)的基本原則。答案：引物設(shè)計(jì)原則包括合適的長(zhǎng)度（一般18-30bp）、合適的GC含量（40%-60%）、避免引物內(nèi)部二級(jí)結(jié)構(gòu)、引物間避免互補(bǔ)形成二聚體、具有高度特異性、與模板有良好互補(bǔ)性等。3.簡(jiǎn)述PCR污染的來(lái)源及預(yù)防措施。答案：污染來(lái)源有樣本間交叉污染、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境（如氣溶膠）污染、試劑污染等。預(yù)防措施包括嚴(yán)格分區(qū)操作、使用一次性耗材、實(shí)驗(yàn)前后清潔消毒、合理設(shè)計(jì)引物避免非特異性擴(kuò)增等。4.簡(jiǎn)述實(shí)時(shí)熒光定量PCR的原理。答案：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析。熒光信號(hào)的產(chǎn)生機(jī)制包括熒光染料結(jié)合雙鏈DNA或熒光標(biāo)記探針特異性識(shí)別模板等。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論P(yáng)CR技術(shù)在新冠病毒檢測(cè)中的重要性。答案：PCR技術(shù)在新冠病毒檢測(cè)中至關(guān)重要。它能特異性地?cái)U(kuò)增新冠病毒核酸片段，靈敏度高，可檢測(cè)出極低含量的病毒核酸，是確診新冠感染的重要依據(jù)，有助于疫情的防控，如病例的早發(fā)現(xiàn)、隔離和治療等。2.討論如何提高PCR擴(kuò)增的特異性。答案：可從引物設(shè)計(jì)入手，保證引物特異性高且避免二聚體。合適的退火溫度很關(guān)鍵，避免過(guò)高或過(guò)低。保證模板純度，避免雜質(zhì)抑制或引發(fā)非特異性反應(yīng)。還可優(yōu)化反應(yīng)體系各成分濃度等。3.討論P(yáng)CR反應(yīng)中Taq酶的作用及其重要性。答案：Taq酶是一種熱穩(wěn)定的DNA聚合酶。在PCR反應(yīng)中，它以dNTP為原料，以引物與模板結(jié)合后的3'-OH為起點(diǎn)合成新的DNA鏈。其重要性在于能在高溫環(huán)境下穩(wěn)定工作，使得PCR反應(yīng)的循環(huán)得以進(jìn)行，