TCALAS91-2020實(shí)驗(yàn)動(dòng)物仙臺(tái)病毒逆轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（RTLAMP）檢測(cè)方法_第1頁(yè)
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ICSBT/CALAS91— Laboratoryanimal-detectionofSendaivirusbyreversetranscriptionloop-mediatedisothermalamplificationassay2020-12- 發(fā) 2021-01- 實(shí)中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì) GB/T1.1—2020給出的規(guī)則編寫(xiě)。本文件由全國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（SAC/TC281）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物仙臺(tái)病毒逆轉(zhuǎn)錄-環(huán)介導(dǎo)等溫本文件規(guī)定了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物仙臺(tái)病毒（SV）RT-LAMP檢測(cè)的原理、方法和結(jié)果判定。環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法DNAAMV逆轉(zhuǎn)錄酶的混合溶液1h內(nèi)完成核酸擴(kuò)增反應(yīng)DNA65℃左右處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，利用可以產(chǎn)生環(huán)狀結(jié)構(gòu)的引物和酶溶液（BstDNAAMV逆轉(zhuǎn)錄酶的混合溶液聚合酶鏈置換合成的活性，在靶序列兩端引物結(jié)合處不斷循環(huán)產(chǎn)生環(huán)狀單鏈結(jié)構(gòu)，達(dá)到高效擴(kuò)增靶基因的目的，檢測(cè)樣品中SV病毒，并通過(guò)核酸擴(kuò)增過(guò)程中產(chǎn)生焦磷酸鎂沉淀與熒光染料結(jié)合產(chǎn)生的綠色熒光判定反應(yīng)結(jié)果。RNA實(shí)驗(yàn)動(dòng)物仙臺(tái)病毒逆轉(zhuǎn)錄-環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（RT-LAMP）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物仙臺(tái)病毒逆轉(zhuǎn)錄-環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（RT-LAMP）DEPCSVRNASVRNAF3：5′-CATCTTAATAACGGGTGCTG-3′FIP：5′-TGTGATTTCCAAATCCAAAGTGGATATAATGGAATCTCCACAGGA-3′BIP：5′-ACAAATTGATCTATGATCCCGATCCGACATCTCTGACCTTGCTAA-3′1.0g2mL0.1mol/LpH7.2～7.6的磷酸鹽緩沖液（PBS），12000r/min5min，取25μL11RT-LAMP 12.5FIP引 40pmol（1BIP引 40pmol（1F3引 5pmol（1B3引 5pmol（1 1DEPC去離子 1.5 5 16360min周潔,趙麗娟,陶凌云,等

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