一、實驗方案

實驗序號2實驗項目微生物的分離、純化、接種和鑒定

實驗時間2012.3.31實驗室生化樓327小組成員

1.實驗?zāi)康?/p>

①了解微生物分離與純化的原理；

②掌握常用的分離與純化微生物的方法；

③學習并掌握微生物的幾種接種技術(shù)；

④建立無菌操作的概念，掌握稀釋菌液、倒平板等無菌操作技術(shù)。

2.實驗原理、實驗流程或裝置示意圖

土壤是微生物生活的大本營，土壤中所含的微生物在數(shù)量和種類上都是極其豐富的。因此

土壤是微生物多樣性的重要場所，是發(fā)掘微生物資源的重要基地，可以從中分離和純化得到許

多有價值的菌株.本實驗將采用從土壤中分離得到的微生物。

分離純化技術(shù)是微生物學中重要的基本技術(shù)之一。從混雜微生物群體中獲得只含有某?種

或某一株微生物的過程稱為微生物的分離與純化。從食品或其他樣品中中分離微牛.物的H的是

為了查找與污染有關(guān)的微生物，或找出能應(yīng)用于食品加工的微生物，這對于食品生產(chǎn)和研究很

有價值。所以，在分離時應(yīng)掌握原則，以便指導檢出微生物，避免漏杳誤杳。

微生物在固體培養(yǎng)基上生長形成的單個菌落，通常是由一個細胞繁殖而成的集合體。因此

可以通過挑取單一菌落而獲得一種純培養(yǎng)。本次實驗采取平板劃線法完成。

將微生物的培養(yǎng)物或含有微生物的樣品移植到培養(yǎng)基上的操作技術(shù)稱為接種。接種是微生

物實驗及科學研究中的一項最基本的操作技術(shù)。無論微生物的分離、培養(yǎng)、純化或鑒定以及有

關(guān)微生物的形態(tài)觀察及生理研究都必須進行接種。接種的關(guān)健是要嚴格地進行無菌操作，如果

操作不慎引起污染，則會導致實驗結(jié)果不可匏，繼而會影響下一步工作的進行。

根據(jù)菌落的生長特征，在一定程度上可以鑒定是何種微生物。

實驗步驟：稱取土樣1.0g—?溶解于99mL生理鹽水中一?充分攪拌一~?移取上一個

試管中1ml的溶液，放入下一個已裝有9mL生理鹽水的試管中一?試管分別標號10,10,

10\10弋I。--?標號io,10弋I。，I。，的試管分別再用培養(yǎng)基培養(yǎng)，每種培養(yǎng)基倒

三皿——?用牛皮紙包好恒溫培養(yǎng)，24h后觀察

己滅菌的接種環(huán)從平板培養(yǎng)基上挑取分離的單個菌落一?接種到培養(yǎng)皿（平板劃線）和

斜面培養(yǎng)基上一?用牛皮線包好恒溫培養(yǎng)，24h后觀察一?根據(jù)根據(jù)菌落的生長特征，鑒

定是何種微生物。

3.實驗設(shè)備及材料

照相設(shè)備、烘箱、顯微鏡、天平、乳膠頭、橡皮圈、牛皮紙、接種環(huán)、無菌培養(yǎng)皿、盛9mL

生理鹽水的試管（帶有試管塞）、99mL生理鹽水并帶有瓶塞的三角瓶、移液管、洗耳球、燒杯、

玻璃棒、試管架、電爐、手套、酒精燈、打火機、生理鹽水（0.85%NaCl）、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、

棉繩等

4.實驗方法步驟及注意事項

1、采土樣：選擇校園內(nèi)肥沃（微生物較多）的土壤，去表層土，挖5cm深度的土壤約10g,裝入

潔凈的小燒杯中，封好口，帶回實驗室。

2、制備土壤稀釋液：用天平稱取上樣1.0g,放入盛99ml生理鹽水的三角瓶中，充分攪拌振蕩

lOmin使土壤均勻分散成為土壤懸液。用1mL移液管從中吸取1mL土壤懸液，注入事先有標號

為IO"裝有9mL生理鹽水的試管中，吹吸3次,振蕩均勻。然后同樣方法，配置成稀釋度為10）

10"、107的土壤菌懸液。用一支新的尢菌移液管，由低濃度開始，從各濃度土壤稀釋液中各吸

取1mL,對號均勻地放入已寫好稀釋度的培養(yǎng)基平板上（直徑較小的那個培養(yǎng)皿），在酒精燈火

焰上方操作，每個濃度做3個平板（重復）。（注意：操作時每一個稀釋度換一支試管，移取液體

和將液體置于培養(yǎng)皿中時必須在火焰上方操作，這樣可以在一定程度上保證是無菌操作）

3、倒平板：右手持盛培養(yǎng)基的三角瓶置于火焰旁邊，左手將瓶塞輕輕地拔出，瓶口保持對著火

焰，然后左手拿培養(yǎng)皿并將皿蓋在火焰附近打開一縫，迅速倒入培養(yǎng)基約1/3,加蓋后輕輕搖

動培養(yǎng)皿，右三圈，左三圈，右三圈，使培養(yǎng)基均勻分布在培養(yǎng)皿底部，然后平置于桌面上，

冷卻后倒置。（注意:倒平板必須在火焰上方操作，這樣可以在一定程度上保證是無菌操作）

4、培養(yǎng)：用牛皮紙包好，放到溫度為37℃的恒溫箱中培養(yǎng)，23后觀察。

5、純化和接種：用已經(jīng)滅菌的接種環(huán)從平板培養(yǎng)基上挑取分離的單個菌落，接種到培養(yǎng)皿和斜

面培養(yǎng)基（接種管）上.培養(yǎng)皿用平板劃線法完成，平板劃線應(yīng)不少于150條線.用牛皮紙包好恒

溫培養(yǎng)，24h后觀察.

6、鑒定：根據(jù)根據(jù)菌落的生長特征，對照食品微生物學課本，鑒定是何種微生物。

5.實驗數(shù)據(jù)處理方法

觀察培養(yǎng)基和試管里的微生物的生長情況,根據(jù)根據(jù)菌落的生長特征，對照食品微生物學課本，

鑒定是何種微生物。

6.參考文獻

[1].牛天貴.食品微生物學實驗技術(shù).第1版.北京：中國農(nóng)業(yè)大學出版社，2002.

[2].郝林.食品微生物學實驗技術(shù).北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2001.

[3].何國慶，賈英民，丁立孝等.食品微生物學.第2版.北京：中國農(nóng)業(yè)大學出版社,

2009.

教師對實驗方案設(shè)計的意見

簽名：

年月日

二、實驗報告

1.實驗現(xiàn)象與結(jié)果

I

2.對實驗現(xiàn)象、實驗結(jié)果的分析及其結(jié)論

⑴、平板劃線劃得不是很好，超過24h后才觀察導致菌落都差不多生長在一起。不過接種管斜

面的劃線很成功，可以清楚地看清一些菌落?？偟膩碚f，實驗算是成功的。

⑵、觀察培養(yǎng)基和試管里的微生物的生長情況，根據(jù)根據(jù)菌落的生長特征，對照食品微生物學

課本，鑒定是酵母菌和霉菌及放線菌。

三、實驗總結(jié)

1.本次實驗成敗及其原因分析

⑴、由「劃線技術(shù)不夠嫻熟，平板劃線劃得夠好，超過24h后才觀察導致菌落都差不多生長在一

起。不過試管斜面的劃線很成功，可以清楚地看清一些菌落。但總的來說，實驗算是成功的。

⑵、觀察培養(yǎng)基和試管里的微生物的生長情況，根據(jù)根據(jù)菌落的生長特征，對照食品微生物學

課本，鑒定是酹母菌和霉菌及放線菌。

2.本實驗的關(guān)鍵環(huán)節(jié)及改進措施

⑴、接種環(huán)的滅菌操作要到位:接種環(huán)使用前，直接在酒精燈上燒灼滅菌，把環(huán)和金屬絲燒紅即

可。接種環(huán)使用后，先在火焰周圍把環(huán)上標本烤?干，再燒灼滅菌，以免標本汽化，爆烈四濺，

污染環(huán)境。金屬桿快速通過火焰2—3次，殺滅表面微生物。

⑵、劃線技術(shù)要很嫻熟,具體要求參照上圖。

⑶、整個過程要嚴格防止實驗中被污染,每個階梯稀釋換新的移液管,要等平板冷卻后再倒置。

思考題

1、食品中微生物為何繁殖迅速、種類繁多？

2、食品被微生物污染后有哪些危害？

3、檢樣稀釋時，每個稀釋度都要更換刻度吸管，為什么？

1、答:因為食品中含有大量的淀粉、蛋白質(zhì)、糖類、脂肪等有機物，且無機鹽含量相對較低,

食品中含有一定的水分，并且食品包裝后容易使內(nèi)部升溫，這些都是很適合微生物（細

菌、原蟲、病毒）生長繁殖的情況，因此食品中的微生物能夠繁殖迅速且種類繁多。所

以很多食物要嚴格滅菌或者添加防腐劑、干燥劑、脫氧劑等，或者真空包裝。

2、答:⑴、降低食品的營養(yǎng);

（2）、引起食品腐敗變質(zhì)；

（3）、引起嘔葉.、中毒或者某些疾病（如痢疾、腹瀉、呼吸道感染等）和潛在性的慢性危

害等。

3、答：每個稀釋度都要更換刻