152022-01-25發(fā)布DB15/T2506—2022本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定I1本文件規(guī)定了羊感染捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的診斷依據(jù)、檢疫鑒定原則及鑒別診斷。本文件適用于不同飼養(yǎng)模式下羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的檢疫鑒定，也適用于牛、駝、鹿等動物捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的檢疫鑒定。2規(guī)范性引用文件本文件沒有規(guī)范性引用文件。3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。捻轉(zhuǎn)血矛線蟲haemonchuscontortus俗名：捻轉(zhuǎn)胃蟲，分類地位見附錄A。捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染haemonchuscontortusinfection可在宿主糞便中檢出捻轉(zhuǎn)血矛線蟲蟲卵或能在宿主真胃內(nèi)檢出捻轉(zhuǎn)血矛線蟲成蟲，而宿主無明顯臨床癥狀和體征。捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病haemonchosiscontortus由捻轉(zhuǎn)血矛線蟲寄生于宿主真胃或小腸所引起的免疫系統(tǒng)、消化系統(tǒng)和血液系統(tǒng)等病變，并出現(xiàn)相應(yīng)的臨床癥狀和體征。4診斷依據(jù)4.1流行病學(xué)宿主生活或來源于捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病流行區(qū)，且有采食被捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染性幼蟲污染的青草或飼料史。2羊只顯著貧血，眼瞼黏膜蒼白，身體逐漸衰弱、消瘦，被毛粗4.2.2慢性型4.3.1血常規(guī)檢查發(fā)現(xiàn)血中紅細胞4.3.2糞便蟲卵檢測按照附錄G的規(guī)定，發(fā)現(xiàn)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲蟲卵，其特征描述見附錄C。4.3.3糞便幼蟲培養(yǎng)按照附錄G的規(guī)定，檢出捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感4.3.5真胃內(nèi)容物淘洗檢查按照附錄G的規(guī)定，檢出捻轉(zhuǎn)血矛線蟲成蟲，其特征描述見附錄E。5.1根據(jù)流行病學(xué)、臨床表現(xiàn)，結(jié)合4.3.1、4.3.2、4.3.3中任兩條檢查結(jié)果可初步診斷。5.2根據(jù)4.3.4和4.3.5中的任一條檢查結(jié)果可確切診斷。無明顯臨床癥狀，同時符合4.1和4.2,且符合4.3.1、4.3.2、4.3.3中任兩條。7.1捻轉(zhuǎn)血矛線蟲卵與其他胃腸道線蟲卵相鑒別見附錄F。7.2捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染性幼蟲與其他圓線蟲感染性幼蟲相鑒別見附錄F。3(資料性)血矛線蟲屬線蟲的系統(tǒng)發(fā)育樹(HobergEP等，2004)見圖A.1。捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(Haemonchuscontortus)屬于動物界(Animalia),線蟲綱(Nematoda),圓線目(Strongylida),毛圓科(Trichostrongylidae),血矛屬(Haemonchus)。該屬共有12種蟲體(圖1),其中，捻轉(zhuǎn)血矛線蟲為該屬發(fā)現(xiàn)的第一種蟲體。*pp4(資料性)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲生活史捻轉(zhuǎn)血矛線蟲生活史見圖B.1。捻轉(zhuǎn)血矛線蟲整個生活史包括自由生活期和寄生生活期。按照蟲卵孵化后的發(fā)育結(jié)構(gòu)可劃分為五個階段，即自由生活期的一期幼蟲、二期幼蟲和三期幼蟲三個階段；寄生生活期的四期幼蟲和成蟲兩個階段。新排出的蟲卵在27℃條件下經(jīng)5d發(fā)育為第三期幼蟲，羊通過攝入第三期幼蟲而感染，在感染后第15d性成熟蟲體開始交配，第18d部分雌蟲開始產(chǎn)卵。內(nèi)脫鞘且在皺胃(期幼蟲三期幼蟲(感染性幼蟲)移(爬出混合在糞便中圖B.1捻轉(zhuǎn)血矛線蟲生活史5(資料性)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲蟲卵形態(tài)糞便中檢出的捻轉(zhuǎn)血矛線蟲蟲卵(40×)見圖C.1。捻轉(zhuǎn)血矛線蟲新鮮蟲卵夾雜在羊糞中排出，為淡灰黑色，橢圓形，平均大小為70.9μm×45.9μm,為桑葚期或更早。圖C.1糞便中檢出的捻轉(zhuǎn)血矛線蟲蟲卵(40×)糞便中檢出的捻轉(zhuǎn)血矛線蟲蟲卵(400×)見圖C.2。圖C.2糞便中檢出的捻轉(zhuǎn)血矛線蟲蟲卵(400×)6DB15/T2506—2022(資料性)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染性三期幼蟲形態(tài)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染性三期幼蟲形態(tài)(40×)見圖D.1。第三期幼蟲，大小約0.65～0.75mm×0.025～0.030mm,幼蟲口孔封閉，圓形的小口腔開始出現(xiàn)，腔有小管道通于食道的空隙，食道呈絲狀形。腸管由16個方形細胞所構(gòu)成，尾部尖細，長約0.054mm~圖D.1捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染性三期幼蟲形態(tài)(40×)7(資料性)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲成蟲形態(tài)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲形態(tài)結(jié)構(gòu)見圖E.1。捻轉(zhuǎn)血矛線蟲雌雄異體，頸乳突明顯。雌蟲長1.8cm～3.0cm;眼觀生殖器為白色，消化道為紅色，新鮮蟲體呈現(xiàn)為紅白色相互纏繞狀；鏡下陰門蓋異常明顯。雄蟲長1.5cm~2.2cm,背肋作“Y”字形。圖E.1捻轉(zhuǎn)血矛線蟲形態(tài)結(jié)構(gòu)8(資料性)F.1羊糞便中常見胃腸道線蟲蟲卵特征見表F.1。蟲種名稱蟲卵。葉氏古柏線蟲蟲卵橢圓形。Trichostrongyluscolubri蟲卵橢圓形。羊仰口線蟲Bunostomumtrigonoceph蟲卵兩端鈍圓，兩側(cè)平直，胚細胞大而數(shù)少，內(nèi)含暗色顆粒。哥倫比亞食道口線蟲細胞8～16個。9蟲種名稱綿羊夏伯特線蟲蟲卵橢圓形。F.2捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染性幼蟲與羊其他圓線蟲的感染性幼蟲見圖F.1。DB15/T2506—2022取新鮮糞便樣品2g于50mL燒杯中，加少許飽和食鹽水用鑷子壓碎，加飽和食鹽水至20均勻，用40目篩網(wǎng)過濾，將濾液置于安剖瓶中，使液面略高于瓶口，靜置30取待檢羊新鮮糞便，置于干凈的搪瓷盤中，頂部稍高于搪瓷盤邊緣，其上蓋3層醫(yī)用紗布，蓋好搪DB15/T2506—2022對擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳，以陽性對照組和待檢樣本擴增出265bp的目標條帶，陰性對照組未擴增出條帶，判定為捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染陽性；陽性樣本進一步測序，序列與標準