15I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會（SAM/TC1本文件主要起草人：徐曉靜、謝夢圓、張勇、呂亮亮、王秀敏、趙卓1牛呼吸道疾病綜合征診斷技術(shù)規(guī)范GB/T18637牛病毒性腹瀉/粘膜病診斷技術(shù)NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運輸技術(shù)規(guī)范NY/T575牛傳染性鼻氣管炎診斷技術(shù)NY/T3234牛支原體PCR檢測方法DB15/T2907溶血性曼氏桿菌病診斷技術(shù)BRSV：牛呼吸道合胞體病毒（Bovinerespiratorysyncytialvirus）BT細(xì)胞：牛鼻甲骨細(xì)胞（BovineturbinatecelBPIV-3：牛副流感病毒3型（BovineparainfluenzavirustypeBVDV：牛病毒性腹瀉/黏膜病毒（Bovineviraldiarrhea/mucosaldiseaseviruIBRV：牛傳染性鼻氣管炎病毒（InfectiousbovinerhinotMDBK細(xì)胞：牛腎細(xì)胞（Madindarbybovinekidneycell）2Vero細(xì)胞：非洲綠猴腎細(xì)胞（Verdarenocell）病、溶血性曼氏桿菌病各個年齡階段牛均易感，昏睡嗜突然發(fā)病，體溫升至40℃~42℃。病牛精神沉郁、厭食，鼻、眼有漿液性分泌物，2d～3d后期腹瀉物帶黏液和血液。部分病牛出現(xiàn)蹄葉炎及趾間皮膚糜爛和潰瘍，導(dǎo)致跛母牛妊娠期感染可引起流產(chǎn)，或產(chǎn)先天性缺3混雜黏液或血液且惡臭。一般病程為12h處。眼紅腫、流淚，有急性結(jié)膜炎。呼吸困難，皮膚和病牛會排帶有黏液和血塊的稀便。本病型最為常見，病程一般為3d～7達(dá)40℃~42℃,精神沉郁、厭食，后期臥地不起，呼吸極度困難，最后窒息而死，病程3d～7d。特征性組織病理學(xué)變化是肺組織各級細(xì)支氣管腔內(nèi)可見合胞體細(xì)胞，同時在細(xì)支氣管上皮細(xì)胞漿內(nèi)見病例炎癥累及到膈葉，使多數(shù)肺組織實變。支4慢性支氣管間質(zhì)性化膿性肺炎在是支氣管性間質(zhì)性肺炎病變的基礎(chǔ)上發(fā)展而來，在肺實變區(qū)散在或彌敗血型：主要呈全身性急性敗血癥變化和咽喉部急性炎性血，可累及咽周圍組織；咽和頸前淋巴結(jié)高度腫脹；上呼吸道黏胸膜。淋巴結(jié)腫大呈黑紅色。大腦見多發(fā)性出血性TSA培養(yǎng)基、細(xì)菌微量生化反應(yīng)管及指示劑、PBS（0.01moL/L，pH7.2）、DEPC水、Taq酶鼻腔采樣，將無菌棉拭子伸入鼻腔內(nèi)刮取黏液，放入裝有PBS的離心管。編號并記錄相關(guān)信息。病5將PBS離心管中采集的鼻拭子樣品充分振蕩，4℃、12000r/min離心5min組織樣品稱取1g置于研缽，充分研磨后加5mLPBS，混勻，4℃、12000r/m將采集的樣品用PBS制成1:4懸液，裝入盛有玻璃珠的管內(nèi)充分震蕩30min～50min，取懸液3000r/min離心30min，取上清，15000r/min離心30min，取上清，再以40000r/min～50000r/min離心3h～5h，棄上清，加1～2滴蒸餾水懸浮管內(nèi)沉淀，2%磷鏡下可見直徑約100nm～150nm，表面有刺突的病毒顆粒，牛病毒性腹瀉病毒粒子呈nm，牛副流感病毒3型電鏡下呈不規(guī)則型，直徑約將處理的樣品接種適宜細(xì)胞（MDBK細(xì)胞、Vero細(xì)胞、BT細(xì)胞）進(jìn)行病毒分離培養(yǎng)，應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)血清應(yīng)用相應(yīng)的病毒抗體對細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行免疫熒光檢測。根據(jù)熒光信號強(qiáng)弱判定結(jié)果。按照GB/T18637中方法檢測牛病毒性腹瀉/黏膜將采集的鼻拭子或組織樣品，用相應(yīng)細(xì)菌培養(yǎng)基培養(yǎng)24h～486符合5.1.2、5.1.3的臨床癥狀和病理變化，可初步判定為牛呼吸道疾病綜合征疑似符合5.1.2，5.1.3和、、其中任一檢測結(jié)果為陽性可判定為牛呼吸道7AGGACCGCGAGTTCTTGCCBVDV-FBVDV-RBVDV-PBPIV-3-FBPIV-3-RBRSV-FAGTTGACACTGTATCCGTTBRSV-R8ACGAGCCATAAAATAATGCCATCAACCACGGCTTGTTGGAAM.Bovis-FM.Bovis-R9