馬鈴薯脫毒技術規(guī)程2017-11-20實施2017-11-20實施新疆維吾爾自治區(qū)質量技術監(jiān)督局發(fā)布I II 1 1 1 25病毒類型 2 2 2 29病毒檢測 4 4 4附錄A(資料性附錄)組培設備、試劑 6附錄B(資料性附錄)MS培養(yǎng)基配方 8標準下載本標準按照GB/T1.1-2009《標準化工作導則第1部分：標準的結構和編寫》給出的規(guī)則起草。本標準由新疆生產建設兵團第六師農業(yè)科學研究所提出。本標準由新疆維吾爾自治區(qū)農業(yè)標準化技術委員會歸口。本項目起草單位：新疆生產建設兵團第六師農業(yè)科學研究所、五家渠質量技術監(jiān)督局、自治區(qū)標準化研究院。本標準主要起草人：陳英、羅艷輝、張愛萍、李東方、劉雪蓮、哈麗旦·艾比布拉、王航件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。NY/T401脫毒馬鈴薯種薯(苗)病毒檢測技術規(guī)程2芽頂端部分(0.1mm~10mm)其中包括芽原基和葉原基。3將芽眼萌動的塊莖外植體直接放于光照培養(yǎng)箱內，控制溫度37℃±1℃(8h)20℃(16h),光照時間8h/d,光照強度10001x～20001x,連續(xù)處理6周～8周。馬鈴薯塊莖芽長1cm～1.5cm。上述蔗糖一卡拉膠(或瓊脂)溶液中，每加入一種母液需充分攪拌后再加下一液滴定pH值到5.8～6.0之間。不超過總體積的70%,并在培養(yǎng)器皿上編號，用聚丙烯膜(瓶蓋)封口。在121℃溫度下(103KPa)滅菌保持20min～25min。滅菌結束時高壓鍋壓力指示表自然下降到0℃,將培養(yǎng)基由滅菌鍋中取出，在室溫下自然冷卻。滅菌過的培養(yǎng)基置于滅菌室放置2d~3d,無污染方可使用。取塊莖芽用1%洗潔精水溶液浸泡5min并用玻璃棒輕微攪動后，再用自來水沖洗30min～60min,無菌水沖洗1次~2次移入超凈工作臺。倒入75%酒精浸泡20s~30s,無菌水沖洗2次～3次，轉入0.1%將預剝離的材料的芽消毒后，放在超凈工作臺上，剝除所有外葉，切取0.5cm～0.8cm的莖尖，接中到灌裝有基本培養(yǎng)基MS的試管(瓶)中。溫度23℃±2℃,光照時間16h/d,光照強度10001x～20001x。生根后，移到光照培養(yǎng)箱中，照時間12h/d,光照強度20001x～30001x,長成3cm~5cm高的芽苗，用于進行莖尖剝離。使用MS基本培養(yǎng)基配方附加不同種類和數量的激素，莖尖誘導分化培占體積為1/3,試管里的培養(yǎng)基做成斜面。封口膜(瓶蓋)用聚丙烯材料。在121℃高壓鍋中消毒204標準下載高溫處理過的塊莖芽或芽長成的試管(瓶)苗。.1用高溫處理過的塊莖芽(長度小于5cm),消毒程序按照執(zhí)行。.2消毒過塊莖芽置于40倍變倍體顯微鏡下，用接種針剝取0.2mm～0.3mm帶1個或2個葉原基的莖尖，接種于誘導分化培養(yǎng)基上面。每個試管(瓶)接種一個莖尖。接種針剝取0.2mm～0.3mm帶1溫度23℃±2℃,光照強度20001x～30001x,光照時間12h/d～14h/d。培養(yǎng)時間30d～40d。將莖尖剝離誘導成苗分別編號，連續(xù)快繁2次后，然后在超凈工作臺上打開試管(瓶)口，剪取每9.2.1編號的每個樣品研磨后取3管，采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測或逆轉錄聚合酶鏈式反應法的試管(瓶)苗，作為核心苗擴繁、繼代或保存。5經檢測不帶病毒的試管苗進行試種觀察。將每個試管苗繼代2次后取出一部分移栽到防蟲網棚，結微型薯后再種植到田間試種觀察，檢驗其是否發(fā)生變異。植株及所結塊莖符合原品種的典型性狀，它所對應的試管苗即為脫毒苗，脫除全部病毒。6(資料性附錄)A.1.4分析天平、0.1g感應A.1.6各種規(guī)格的容量瓶、細口瓶(包括棕色)、廣口瓶、移液槍、槍頭、燒杯、量筒、玻璃棒、試劑A.1.10清洗室及滅菌室A.1.12組培瓶控水架、耐高壓框子。A.1.16雙層不銹鋼推車。A.2.7若干輛雙層不銹鋼推車。A.3培養(yǎng)室(采光室)7A.4.3400mg/L含量的二氧化8(資料性附錄)MS固體培養(yǎng)基配方表B.1MS固體培養(yǎng)基配方質量濃度(mg/L)硝酸鉀(KNO?)硝酸銨(NH?NO?)氯化鈣(CaCl?·2H?O)硫酸鎂(MgSO?·7H?O)磷酸二氫鉀(KH?PO?)碘化鉀(KI)硼酸(H?BO?)硫酸錳(MnSO?·4H?O0)硫酸鋅(ZnSO?·7H?O)鉬酸鈉(Na?MoO?·2H?O)硫酸銅(CuSO?·5H?O)氯化鈷(CoC1·6H?O)硫酸亞鐵(FeSO..7H?O)乙二胺四乙酸二鈉(Na?·EDTA·2H?O)鹽酸吡哆