15Operationalproceduresforbov2022-07-29發(fā)布本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（SAM/TC1生物藥品有限公司、北京生泰爾科技股份有限公司、內(nèi)蒙古伊利實(shí)業(yè)集團(tuán)股份有限I牛腹瀉疾病防控操作規(guī)程本文件適用于奶牛飼養(yǎng)場(chǎng)（戶）、肉牛飼養(yǎng)場(chǎng)（戶）GB4789.4食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門氏菌GB4789.6食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)致瀉大腸埃希氏菌GB/T27401實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范動(dòng)物GB/T27637副結(jié)核分枝桿菌實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)NY5047無公害食品奶牛飼養(yǎng)獸醫(yī)防疫準(zhǔn)則NY/T5049無公害食品奶牛飼養(yǎng)管理準(zhǔn)則性因素兩類，傳染性因素包括病毒、細(xì)菌、BVDV：牛病毒性腹瀉病毒（Bovineviraldiarrheavirus）BVD/MD：牛病毒性腹瀉/黏膜?。˙ovineviraldiarrhea-mucosaldiseasBRV：牛輪狀病毒（Bovineratovirus）BCoV：牛冠狀病毒（BovinecoronaviruCPE：致細(xì)胞病變效應(yīng)（CytopathicE1Dubos培養(yǎng)基：杜波斯液體培養(yǎng)基（Dubosmedium）E.coli：大腸桿菌（EscherichiaHRT-18細(xì)胞：人直腸腫瘤-18細(xì)胞（HumanRectalTumor-18CeMA104細(xì)胞：恒河猴腎細(xì)胞（Rhesuskidneycell）MDBK細(xì)胞：牛腎細(xì)胞（MadinDarbyBovineKidneyCell）樣品采集的生物安全措施符合GB19489的引起牛腹瀉疾病的主要病原有：病毒性病原包括核分枝桿菌（Mycobacteriumaviumsubsp.paratuberculosis）不同年齡和品種牛均可發(fā)生，多見于幼齡牛，犢白痢多發(fā)于1月齡內(nèi)犢牛；犢牛副傷寒多發(fā)于1～5月齡的犢牛；副結(jié)核性腸炎多發(fā)于成年牛；牛病毒性腹瀉病毒多發(fā)于6～18月齡牛，牛輪狀病毒和牛冠狀病毒多發(fā)于1周齡犢牛。病牛和帶菌（毒）牛是感染性腹瀉的主要傳染源。通過消化道、呼吸道、接甚至脫落的黏膜。部分病牛出現(xiàn)蹄葉炎及趾間皮膚糜爛壞死，導(dǎo)致2排出深褐色帶血稀糞，伴有產(chǎn)奶下降、沉郁及厭食等病牛初期體溫升高達(dá)41℃~42℃,有的犢牛出生后數(shù)小時(shí)開始腹瀉。初期糞便呈粥樣、白色或黃犢牛多發(fā)病突然，病初體溫升高至40℃~41℃,24發(fā)病后主要表現(xiàn)為腹瀉，食欲下降，嚴(yán)重脫水，在腹瀉期間的犢牛失去吃乳能力，飲水欲望增加。3腫大，質(zhì)地柔軟，被膜下散在針尖大的灰黃或灰白色病白色黏稠的糊狀物。腸黏膜增厚2～30倍，折疊形成腦回樣皺襞。病變部腸管的漿膜淋巴管和相應(yīng)的腸系膜淋巴管擴(kuò)張、增粗，呈彎曲的細(xì)繩索狀，腸系膜淋巴結(jié)直腸內(nèi)容物呈褐色、惡臭，有纖維素性薄膜和黏膜碎片。腸系膜淋巴結(jié)腫4PBS、2%磷鎢酸、胰酶、MA104細(xì)胞、MDBK細(xì)胞、HRT-18細(xì)胞、細(xì)菌微量生化反應(yīng)管及指示劑、PCR7.2.4.2用于細(xì)菌檢測(cè)：將糞便樣品漩渦震蕩，用無菌接種環(huán)接種于增菌培養(yǎng)基；組織樣品直接取少r/min離心30min，取上清，15000r/min離心30min，取上清，以40000r/min～50000r/min離心3h~5h，棄上清，加1～2滴蒸餾水懸浮管內(nèi)沉淀，滴加銅網(wǎng)，2%磷鎢5學(xué)調(diào)查、基因重配毒株的構(gòu)建及二價(jià)減毒株的免疫原性評(píng)價(jià)”中BRV引物序列：BRV-VP6-F：GACGGAGCGACTACATGGT；BRV-VP6-R：GTCCAATTCATACCTGGTGG；采用常繼濤等人文章“載牛冠狀病毒N蛋白殼聚糖微球的免疫效果評(píng)價(jià)”中BcoV引物序CTTAGTGGCATCCTTGCCAA；采用彭雪松論文“BVDV基因分型檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用”BVDV-F：TAGCCATGCCCTTAGTAGGAC；BVDV-R：CTCCATGTGCCATGTACA將采集的糞便或組織樣品，用相應(yīng)細(xì)菌培養(yǎng)基大腸桿菌用伊紅美藍(lán)瓊脂或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)；沙門菌用SS培養(yǎng)基、HE瓊脂培養(yǎng)基或去氧膽鹽鈉-枸櫞酸鹽培養(yǎng)基培養(yǎng)；副結(jié)核分枝桿菌初代分離困難，在病變腸段及腸淋巴結(jié)分離率較高，可先用4%H2SO4或2%NaOH處理，再用D按照GB4789.6對(duì)致病性大腸桿菌進(jìn)行血清學(xué)按照GB4789.4對(duì)沙門菌進(jìn)行血清學(xué)根據(jù)沙門菌毒力基因invA設(shè)計(jì)引物。參考李文豪論文“呼和浩特牛腹瀉部分細(xì)菌性病原檢測(cè)及三重PCR檢測(cè)方法的建立”中的引物序列：F：CACGCTCTTTCGTCTGGCATTA；R：TAGACAGGGCGGAGGA按照GB/T27637對(duì)副結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行PCR檢測(cè)67用特異性引物進(jìn)行病原的普通或熒光定量PCR檢測(cè)。采用王曉丹論文“牛腹瀉部分寄生蟲性病原符合7.1.1、7.1.2、7.1.3,可判定為牛腹瀉疾病疑似病例。符合7.1.1、7.1.2、7.1.3,經(jīng)實(shí)驗(yàn)室診斷任一檢測(cè)結(jié)果為陽性可判定為牛腹瀉疾病。8.1加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，保持衛(wèi)生清潔。按照GB/T16568和NY/T5049的規(guī)定。8.3在保證舍內(nèi)溫度的前提下，自然通風(fēng)，保證牛舍干燥、舒適、溫暖。8.4避免應(yīng)激，消除可能降低機(jī)體抵抗力的各種應(yīng)激因素。8.5自然哺乳母牛定期消毒乳頭，防8.7初生犢牛及時(shí)哺喂初乳。犢牛出生后1h內(nèi)灌服經(jīng)巴氏消毒的初乳4L,奶溫36℃~38℃,12h后視情況可再飼喂2L。8.8哺乳犢牛給予開食料，補(bǔ)充微量元素，飼料配比適當(dāng)。8.9牛群防疫參照NY5047的規(guī)定。根據(jù)細(xì)菌學(xué)診斷及藥敏試驗(yàn)結(jié)果選擇敏感抗生89.2微生態(tài)制劑治療改善機(jī)體消化道內(nèi)環(huán)境，調(diào)節(jié)微生態(tài)平衡。9.3