152022-09-09發(fā)布本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（SAM/TC1李學(xué)朋、劉敏、郜晉楠、胡建華、陳曉妮、王典I玉米皮菌酶協(xié)同發(fā)酵蛋白飼料技術(shù)規(guī)程GB/T6432飼料中粗蛋白的測(cè)定凱GB/T6434飼料中粗纖維的含量測(cè)定GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和GB10648《飼料標(biāo)簽》國家標(biāo)準(zhǔn)第1號(hào)修GB/T23181微生物飼料添加劑通用玉米經(jīng)過浸泡、破碎后分離出來的玉米表皮，經(jīng)烘干、擠水、烘干等工序加工而124.1.1酶解設(shè)備可使用蒸煮罐酶解或者其他具有保溫、攪拌功能的酶解設(shè)備/設(shè)施。4.1.2發(fā)酵設(shè)施可選擇發(fā)酵池、發(fā)酵桶等，應(yīng)具備保溫、通風(fēng)的功能。4.2原料要求4.2.1原料應(yīng)無發(fā)霉變質(zhì)無雜物。粗玉米皮為5～10目；細(xì)玉米皮過20目篩通過率85%以上。4.2.2發(fā)酵菌種應(yīng)符合中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第2045號(hào)的規(guī)定。所用添加劑硫酸銨、磷酸二氫鉀、氯化鈉應(yīng)符合飼料級(jí)，其他發(fā)酵所用的添加劑的種類和劑量應(yīng)符合GB/T23181和中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第2625號(hào)的規(guī)定。4.2.4酶制劑所用纖維素酶的種類應(yīng)符合中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第2625號(hào)的規(guī)定，其質(zhì)量應(yīng)符合QB/T2583標(biāo)準(zhǔn)，酶活力大于等于10000U/g。4.2.5菌種培養(yǎng)基枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基：蛋白胨10g,酵母提取粉5g,氯化鈉10g,蒸餾水1L,pH為7.0～7.4,121℃滅菌20min。酵母菌培養(yǎng)基：蛋白胨20g,酵母提取粉10g,葡萄糖20g,蒸餾水1L,pH為7.0～7.4,115℃滅菌30min。4.2.6菌液細(xì)胞數(shù)所用枯草芽孢桿菌細(xì)胞數(shù)均培養(yǎng)至1×10?CFU/mL～2×10?CFU/mL時(shí)使用；酵母菌細(xì)胞數(shù)培養(yǎng)至1×10?~2×10?個(gè)/mL時(shí)使用。發(fā)酵底物為原料、水及添加劑的混合物，成分為粗玉米皮75kg、細(xì)玉米皮25kg、自來水150L、飼料級(jí)硫酸銨5kg、糖蜜(10°Brix)5L、飼料級(jí)磷酸二氫鉀0.5kg、飼料級(jí)氯化鈉0.25kg。5生產(chǎn)工藝流程5.1生產(chǎn)工藝流程圖生產(chǎn)工藝流程包括6個(gè)階段，如圖1所示。3菌種選用中國微生物普通菌種保藏中心的產(chǎn)朊假絲酵母CandidautilisCGMCC2.2878以業(yè)微生物菌種保藏中心的枯草芽孢桿菌BacillussubtilisCICC10090和釀酒酵母Saccharomyces5.2.2.1以1%接種量將枯草芽孢桿菌B.subtilisCICC10090種子液接種至LB培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)至種子液細(xì)胞數(shù)達(dá)到1×10?CFU/ml～2×10℃FU/ml。5.2.2.2以1%接種量將產(chǎn)骯假絲酵母C.utilisCGMCC2.28種子液接種至YPD培養(yǎng)基中30℃培養(yǎng)至種子液細(xì)胞數(shù)達(dá)到1×10?~2×10?個(gè)/ml。5.2.2.3將菌種枯草芽孢桿菌B.subtilisCICC10090:絲酵母C.utilisCGMCC2.2878按1:1:10的比例混合均勻作為發(fā)酵菌劑備用。粗玉米皮為5～10目；細(xì)玉米皮過20目篩通過率85%以上，以3:1的比例混合。在發(fā)酵底物中加入纖維素酶0.1%,經(jīng)設(shè)備內(nèi)部充分?jǐn)嚢杈鶆?，在依?jù)酶制劑生產(chǎn)說明書中的最適溫5.3.3.1酶解后的發(fā)酵底物與發(fā)酵菌劑充分混合均勻后置于發(fā)酵設(shè)施，菌劑接種總量為12%,接種量5.3.3.2發(fā)酵可在發(fā)酵桶或發(fā)酵池內(nèi)發(fā)酵，料層厚度應(yīng)保持在發(fā)酵設(shè)備/設(shè)施高度的2/3處，發(fā)酵室溫度在25℃~30℃,相對(duì)濕度不低于95%,發(fā)酵品溫控制在30℃~35℃,發(fā)酵72h±2h。5.4.1酶解的最佳溫度依據(jù)購買酶制劑使用說明進(jìn)行，發(fā)酵的最佳溫度為30℃~35℃,發(fā)酵時(shí)間為45.4.2冬季發(fā)酵應(yīng)采取增溫、保溫措施，夏季發(fā)酵應(yīng)采取降溫措施，避免陽光直射。5.4.3發(fā)酵過程中每24h翻拌一次。5.4.4在發(fā)酵過程中，采用間歇通風(fēng)調(diào)節(jié)品溫在30℃~35℃;當(dāng)品溫高于35℃且連續(xù)通風(fēng)仍不能降至35℃以下時(shí)，則應(yīng)翻拌一次。5.5.3粗蛋白5.5.4真蛋白一級(jí)二級(jí)色澤均勻色澤稍不均勻表2玉米皮菌酶協(xié)同發(fā)酵蛋白飼料質(zhì)量基準(zhǔn)6.4.1符合感官要求、物理指標(biāo)及衛(wèi)生指標(biāo)要求后，再根據(jù)6.4.2根據(jù)品質(zhì)定級(jí)時(shí)，當(dāng)樣品的各項(xiàng)品質(zhì)指標(biāo)同時(shí)符合某一等級(jí)時(shí)，則判定所代表的該批次產(chǎn)品為產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)合格后，裝入帶有單向閥的呼吸袋進(jìn)行密封裝袋5A.2試劑或材料A.2.1水GB/T6682，三級(jí)。A.2.2硫酸銨，化學(xué)純。A.2.4五水硫酸銅，化學(xué)純。A.2.6混合催化劑。稱取0.4g五水硫酸銅、6.0g硫酸鉀或硫酸鈉，研磨均勻；或購買商品化的凱式A.2.7硼酸吸收液Ⅰ。稱取20g硼酸，用水溶解并稀釋1000mL。A.2.8硼酸吸收液Ⅱ。1%硼酸水溶液1000mL，加入0.1%溴甲酚綠乙醇溶液10ml，0.1%甲基紅乙醇溶液7mL，4%氫氧化鈉水溶液0.5mA.2.9氫氧化鈉溶液Ⅰ。稱取40.0g氫氧化鈉，用水溶解，冷卻至室溫稀釋至1000mA.2.10氫氧化鈉溶液Ⅰ。稱取40.0g氫氧化鈉，用水溶解，冷卻至室溫稀釋至1000mL。A.2.11硫酸銅溶液。稱取100.0g五水硫酸銅，用水溶解，冷卻至室溫稀釋至1000mL。A.3儀器設(shè)備A.3.1分析天平：感量0.0001g。A.3.3凱式燒瓶：250mL。A.3.4消煮管：250mL。A.3.6定氮儀：以凱式原理制造的各類型半自動(dòng)、全自動(dòng)定氮儀。A.4樣品碎，全部通過0.42mm試驗(yàn)篩，混勻，裝入密閉容器A.5樣品處理6準(zhǔn)確稱取玉米皮0.5g～1g，加入75mL蒸餾水，記錄刻度線，加熱煮沸30min，期間維持液面約75mL處，加入2