2025年高考真題分類匯編2025年高考真題分類匯編PAGE2PAGE1專題17基因工程考點01重組DNA技術的基本工具一、多選題1．（2025·江蘇·高考真題）圖示人體正常基因A突變?yōu)橹虏』騛及HindⅢ切割位點。AluⅠ限制酶識別序列及切割位點為，下列相關敘述正確的有（

）A．基因A突變?yōu)閍是一種堿基增添的突變B．用兩種限制酶分別酶切A基因后，形成的末端類型不同C．用兩種限制酶分別酶切a基因后，產(chǎn)生的片段大小一致D．產(chǎn)前診斷時，該致病基因可選用HindⅢ限制酶開展酶切鑒定考點02DNA的粗提取、PCR、電泳鑒定一、單選題2．（2025·廣東·高考真題）Solexa測序是一種將PCR與熒光檢測相結合的高通量測序技術。為了確保該PCR過程中，DNA聚合酶催化一個脫氧核苷酸單位完成聚合反應后，DNA鏈不繼續(xù)延伸，應保護底物中脫氧核糖結構上的（

）A．1'-堿基 B．2'-氫 C．3'-羥基 D．5'-磷酸基團3．（2025·陜晉青寧卷·高考真題）對下列關于中學生物學實驗的描述錯誤的是（

）①探究淀粉酶對淀粉和蔗糖的水解作用②觀察植物細胞的質壁分離現(xiàn)象③探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化④觀察植物細胞的有絲分裂⑤觀察葉綠體和細胞質的流動⑥DNA的粗提取與鑒定A．①⑥通過觀察顏色判斷實驗結果 B．③⑥均須進行離心操作C．②④均可使用洋蔥作為實驗材料 D．②⑤實驗過程均須保持細胞活性4．（2025·湖南·高考真題）用替代的實驗材料或者試劑開展下列實驗，不能達成實驗目的的是（）選項實驗內(nèi)容替代措施A用高倍顯微鏡觀察葉綠體用“菠菜葉”替代“蘚類葉片”BDNA的粗提取與鑒定用“豬成熟紅細胞”替代“豬肝細胞”C觀察根尖分生區(qū)組織細胞的有絲分裂用“醋酸洋紅液”替代“甲紫溶液”D比較過氧化氫在不同條件下的分解用“過氧化氫酶溶液”替代“肝臟研磨液”A．A B．B C．C D．D5．（2025·河北·高考真題）某科創(chuàng)小組將葉綠素合成相關基因轉入小麥愈傷組織，獲得再生植株，并進行相關檢測。下列實驗操作錯誤的是（

）A．將種子消毒后，取種胚接種到適當?shù)墓腆w培養(yǎng)基誘導愈傷組織B．在提取的DNA溶液中加入二苯胺試劑，沸水浴后觀察顏色以鑒定DNAC．將小麥色素提取液滴加到濾紙條，然后將色素滴加部位浸入層析液進行層析D．對葉片抽氣處理后，轉到富含CO2的清水中，探究不同光照下的光合作用強度二、多選題6．（2025·河北·高考真題）X染色體上的D基因異?？蓪е氯梭w患病，在男性中發(fā)病率為1/3500，某患病男孩（其母親沒有患?。染色體上的基因D和H內(nèi)各有一處斷裂，斷裂點間的染色體片段發(fā)生顛倒重接。研究者對患兒和母親的DNA進行了PCR檢測，所用引物和擴增產(chǎn)物電泳結果如圖。不考慮其他變異，下列分析錯誤的是（

）注：引物組合S1和S2，R1和R2可分別用于對正常基因D和H序列的擴增檢測A．該病患者中男性顯著多于女性，女性中攜帶者的占比為1/3500B．用R1和R2對母親和患兒DNA進行PCR檢測的結果相同C．與正常男性相比，患病男孩X染色體上的基因排列順序發(fā)生改變D．利用S1和S2進行PCR檢測，可診斷母親再次孕育的胎兒是否患該病二、解答題7．（2025·河南·高考真題）某二倍體植物松散株型與緊湊株型是一對相對性狀，緊湊株型適合高密度種植，利于增產(chǎn)。研究人員獲得了一個緊湊株型的植株，為研究控制該性狀的基因，將其與純合松散株型植株雜交，F(xiàn)1均為松散株型，F(xiàn)2中松散株型：緊湊株型=3：1，控制該相對性狀的基因為A/a?；卮鹣铝袉栴}：(1)該緊湊株型性狀由（填“A”或“a”）基因控制。(2)在A基因編碼蛋白質的區(qū)域中插入一段序列得到a基因（圖1），a基因表達的肽鏈比A基因表達的肽鏈短。造成此現(xiàn)象的原因是。(3)研究人員設計了3條引物（P1~P3），位置如圖1（→表示引物5′→3′方向）。以3個F2單株（甲、乙、丙）的DNA為模板，使用不同引物組合進行PCR擴增，瓊脂糖凝膠電泳結果分別為圖2-A和2-B（不考慮PCR結果異常）。①圖2-A中使用的引物組合是；丙單株無擴增條帶的原因是。②結合圖2-A的擴增結果，在圖2-B中，參照甲的條帶補充乙與丙的電泳條帶（將正確條帶涂黑）。③使用圖2-A中的引物組合擴增F2全部樣本，有擴增條帶松散株型：無擴增條帶松散株型=。8．（2025·云南·高考真題）冬瓜果面有蠟粉可提高果實抗病、耐日灼和耐儲性。為探究冬瓜果面蠟粉的遺傳方式并對蠟粉基因（用“A”“a”表示）進行定位，科研人員進行了一系列雜交實驗，結果如表。群體植株總數(shù)/株果面有蠟粉株數(shù)/株果面無蠟粉株數(shù)/株P130300P230030F15235230F2574430144注：F1為P1和P2雜交后代，F(xiàn)2為F1自交后代。回答下列問題：(1)根據(jù)雜交結果可知，果面蠟粉的遺傳遵循基因的定律，依據(jù)是。(2)實驗證明蠟粉性狀的改變是由基因突變引起的，突變基因上出現(xiàn)了一個限制酶H的切割位點，可用于在苗期篩選出果實表面有蠟粉的植株，據(jù)此設計引物后進行植株基因型鑒定的步驟為：提取基因組DNA→目的DNA片段→限制酶H切割擴增產(chǎn)物→電泳。結果顯示P1植株為1條條帶，P2植株為2條條帶，則F2中有蠟粉的植株為條條帶，限制酶H的切割位點位于（填“A”“a”或“A和a”）上。(3)用表中材料設計實驗，驗證（1）中得到的結論，寫出所選材料及遺傳圖解。9．（2025·北京·高考真題）學習以下材料，回答（1）~（4）題。野生動物個體識別的新方法識別野生動物個體有助于野外生態(tài)學的研究。近年，人們發(fā)現(xiàn)可以從動物糞便中提取該動物的DNA，PCR擴增特定的DNA片段，測定產(chǎn)物的長度或序列，據(jù)此可識別個體，在此基礎上可以獲得野生動物的多種生態(tài)學信息。微衛(wèi)星DNA是一種常用于個體識別的DNA片段，廣泛分布于核基因組中。每個微衛(wèi)星DNA是一段串聯(lián)重復序列，每個重復單位長度為2~6bp（堿基對），重復數(shù)可以達到幾十個（圖1）．基因組中有很多個微衛(wèi)星DNA，分布在不同位置。每個位置的微衛(wèi)星DNA可視為一個“基因”，由于重復單位的數(shù)目不同，同一位置的微衛(wèi)星“基因”可以有多個“等位基因”，能組成多種“基因型”．分析多個微衛(wèi)星“基因”，可得到個體特異的“基因型”組合，由此區(qū)分開不同的個體。依據(jù)微衛(wèi)星“基因”兩側的旁鄰序列（圖1），設計并合成特異性引物，PCR擴增后，檢測擴增片段長度，即可得知所測個體的“等位基因”（以片段長度命名），進而獲得該個體的“基因型”。例如，圖2是對某種哺乳動物個體A和B的一個微衛(wèi)星“基因”進行擴增后電泳分析的結果示意圖，個體A的“基因型”為177/183。

有一個遠離大陸的孤島，陸生哺乳動物幾乎無法到達，人類活動將食肉動物貉帶到該島上?？茖W家在島上采集貉的新鮮糞便，提取DNA，擴增并分析了10個微衛(wèi)星“基因”，結果在30份樣品中成功鑒定出個體（如表）。幾個月后再次采集貉的新鮮糞便，進行同樣的分析，在40份樣品中成功鑒定出個體（如表）。據(jù)此，科學家估算出該島上貉的種群數(shù)量。兩次采樣所鑒定出的貉的個體編號第一次采集的30份糞便樣品所對應的個體編號N01N02N03N04N05N06N07N08N08N09N10N11N12N12N13N14N14N15N16N17N18N18N19N20N21N22N22N23N24N24第二次采集的40份糞便樣品所對應的個體編號N03N04N05N08N09N09N12N14N18N23N24N25N26N26N26N27N28N29N30N30N31N32N32N33N33N33N34N35N36N37N38N39N40N41N42N43N44N44N45N46(1)圖2中個體B的“基因型”為。(2)使用微衛(wèi)星DNA鑒定個體時，能區(qū)分的個體數(shù)是由微衛(wèi)星“基因”的數(shù)目和的數(shù)目決定的。(3)科學家根據(jù)表1信息，使用了法的原理來估算這個島上貉的種群數(shù)量，計算過程及結果為。(4)在上述研究基礎上，利用現(xiàn)有DNA樣品，設計一個實驗方案，了解該島貉種群的性別比例。10．（2025·江蘇·高考真題）川金絲猴是我國特有的珍稀瀕危物種，為了更好地保護這一物種，研究者開展了以下研究。請回答下列問題：(1)川金絲猴警戒行為具有監(jiān)測捕食者和同種個體的功能，這說明生物之間的關系有。川金絲猴的警戒行為依賴于環(huán)境中獲取的信息，信息類型有。川金絲猴根據(jù)這些信息及時作出反應，一方面可以降低被捕食風險，另一方面為爭奪獲得更多機會。(2)川金絲猴以植食為主，消化道中部分微生物直接參與高纖維食物的消化，這些微生物與川金絲猴構成關系。(3)研究者為了進一步研究川金絲猴的食性，采集其糞便樣本，進行DNA提取、擴增，部分實驗過程如下。請完成下表：實驗目的簡要操作步驟釋放DNA在去雜后的樣本中加入裂解液析出DNA離心后?、?，加入乙醇②在沉淀物中加入純水擴增DNA將③、引物、樣本DNA、含有Mg2?緩沖液、超純水等加入PCR管中，進行PCR(4)為分析川金絲猴攝食的植物種類，研究者設計一對引物F和R，能同時擴增出不同種植物葉綠體中的rbeL基因片段，是因為引物F和R的堿基能與rbcL基因的保守序列的堿基。用引物F和R對4種植物樣本甲~丁的葉綠體基因組DNA進行擴增測序，結果如圖所示。若對4個樣本的擴增產(chǎn)物進行DNA電泳條帶分析，能檢出的樣本是。研究者用引物F和R對川金絲猴糞便DNA進行擴增并測序，得到的序列有圖中的3種序列，據(jù)此可確定川金絲猴攝食的植物有。若要更準確鑒定出川金絲猴攝食的植物，參照葉綠體基因庫，還需選用的保守序列設計引物，對川金絲猴糞便DNA進行擴增、測序分析。注：“·”表示與植物甲對應位置上相同的堿基：“……”表示省略200個堿基(5)依據(jù)上述研究，保護川金絲猴可采取的措施有（填字母）。a．建立川金絲猴生態(tài)廊道，促進種群間基因交流

b．保護川金絲猴棲息地的植被和它喜食的植物c．需用標記重捕法定期重捕，以精確監(jiān)測種群數(shù)量

d．主要依賴遷地保護，擴大川金絲猴種群數(shù)量11．（2025·湖南·高考真題）未成熟豌豆豆莢的綠色和黃色是一對相對性狀，科研人員揭示了該相對性狀的部分遺傳機制?；卮鹣铝袉栴}：(1)純合綠色豆莢植株與純合黃色豆莢植株雜交，只有一種表型。自交得到的中，綠色和黃色豆莢植株數(shù)量分別為297株和105株，則顯性性狀為。(2)進一步分析發(fā)現(xiàn)：相對于綠色豆莢植株，黃色豆莢植株中基因H（編碼葉綠素合成酶）的上游缺失非編碼序列G。為探究G和下游H的關系，研究人員擬將某綠色豆莢植株的基因H突變?yōu)閔（突變位點如圖a所示，h編碼的蛋白無功能），然后將獲得的Hh植株與黃色豆莢植株雜交，思路如圖a：①為篩選Hh植株，根據(jù)突變位點兩側序列設計一對引物提取待測植株的DNA進行PCR。若擴增產(chǎn)物電泳結果全為預測的1125bp，則基因H可能未發(fā)生突變，或發(fā)生了堿基對的；若H的擴增產(chǎn)物能被酶切為699bp和426bp的片段，而h的酶切位點喪失，則圖b（擴增產(chǎn)物酶切后電泳結果）中的（填“Ⅰ”“Ⅱ”或“Ⅲ”）對應的是Hh植株。②若圖a的中綠色豆莢：黃色豆莢=1：1，則中黃色豆莢植株的基因型為[書寫以圖a中親本黃色豆莢植株的基因型（△G+H）/（△G+H）為例，其中“△G”表示缺失G]。據(jù)此推測中黃色豆莢植株產(chǎn)生的遺傳分子機制是。③若圖a的中兩種基因型植株的數(shù)量無差異，但豆莢全為綠色，則說明?？键c03基因工程的基本操作程序及應用和蛋白質工程一、單選題12．（2025·安徽·高考真題）質粒K中含有β-半乳糖苷酶基因，將該質粒導入大腸桿菌細胞后，其編碼的酶可分解X-gal，產(chǎn)生藍色物質，進而形成藍色菌落，如圖所示?？蒲行〗M以該質粒作為載體，采用基因工程技術實現(xiàn)人源干擾素基因在大腸桿菌中的高效表達。下列敘述錯誤的是（

）A．使用氯化鈣處理大腸桿菌以提高轉化效率，可增加篩選平板上白色和藍色菌落數(shù)B．如果篩選平板中僅含卡那霉素，生長出的白色菌落不可判定為含目的基因的菌株C．因質粒K中含兩個標記基因，篩選平板中長出的白色菌落即為表達目標蛋白的菌株D．若篩選平板中藍色菌落偏多，原因可能是質粒K經(jīng)酶切后自身環(huán)化并導入了大腸桿菌二、解答題13．（2025·陜晉青寧卷·高考真題）馬鈴薯作為重要農(nóng)作物，提高其冷耐受性可拓展優(yōu)質馬鈴薯的種植區(qū)域。我國科研人員發(fā)現(xiàn)，野生馬鈴薯中S基因的表達與其冷耐受性調(diào)控有關，將該基因導入栽培馬鈴薯中可顯著增強其抗寒能力。回答下列問題。(1)PCR擴增目的基因時，需要模板DNA、引物、、含Mg2+的緩沖液和耐高溫的DNA聚合酶。DNA聚合酶在PCR的步驟中起作用。(2)圖中標識了載體和S基因中限制酶的切割位點。為將S基因正確插入載體，PCR擴增S基因時需在引物的（填“5'端”或“3'端”）添加限制酶識別序列，結合上表分析，上游引物應添加的堿基序列是5'--3'，切割載體時應選用的兩種限制酶是，PCR擴增產(chǎn)物和載體分別被限制酶切割后，經(jīng)純化和連接，獲得含S基因的表達載體并導入農(nóng)桿菌。(3)用攜帶S基因的農(nóng)桿菌侵染栽培馬鈴薯愈傷組織時，基因表達載體中T-DNA進入愈傷組織細胞，將S基因整合到，抗性基因可用于篩選成功轉化的愈傷組織。該愈傷組織經(jīng)形成芽、根，繼續(xù)培育可獲得抗寒能力顯著增強的馬鈴薯植株。14．（2025·廣東·高考真題）大腸桿菌是重要工業(yè)菌株之一，其培養(yǎng)過程可分為快速生長期和生長穩(wěn)定期兩個階段。為了通過調(diào)節(jié)蛋白質合成與降解速率來動態(tài)調(diào)控代謝途徑關鍵酶的蛋白量，使細胞適配不同階段的生產(chǎn)需求，研究者設計了兩種質粒，并以穩(wěn)定性好的紅色熒光蛋白mKate2為模式蛋白。測試質粒功能?；卮鹣铝袉栴}：(1)研究者首先構建質粒①（圖a）用于在細胞內(nèi)表達C-末端帶SsrA短肽的mKate2，將質粒導入感受態(tài)細胞后，在添加抗生素的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)。根據(jù)培養(yǎng)基上菌落的生長狀況，結合PCR及檢測，篩選獲得重組菌株W1。(2)將W1在適宜條件下進行搖瓶培養(yǎng)，定時取樣檢測培養(yǎng)液中細胞密度，方法有（答一種）。接種前需檢測液體培養(yǎng)基的熒光強度，其作用是。培養(yǎng)結果（圖b）表明，進入生長穩(wěn)定期后熒光強度快速下降，原因是。(3)研究者選用啟動子PX、X基因（編碼阻遏蛋白X，阻遏PX開啟轉錄），重新構建質粒②（圖a），導入野生型大腸桿菌中獲得重組菌株W2。在適宜條件下?lián)u瓶培養(yǎng)，W2的生長趨勢不變，培養(yǎng)期間熒光強度的變化趨勢為。(4)莽草酸是一種重要工業(yè)化學品，其胞內(nèi)合成代謝途徑見圖c。由于野生型大腸桿菌胞內(nèi)酶A活性弱，且莽草酸會被快速轉化為細胞生長必需物，因此細胞中無法大量積累莽草酸。為了保證細胞正常生長，并在生長穩(wěn)定期實現(xiàn)莽草酸的大量積累，利用上述兩種質粒的調(diào)控功能，結合野生型菌株遺傳物質的改造，提出重組生產(chǎn)菌株構建思路：。15．（2025·云南·高考真題）我國研究人員發(fā)明了生產(chǎn)維生素C的兩步發(fā)酵法，流程如圖甲。為了減少氧化葡糖桿菌競爭性消耗山梨糖，需要進行滅菌以結束第一步發(fā)酵。在兩步發(fā)酵法的基礎上，我國研究人員進一步嘗試用三菌混菌體系建立一步發(fā)酵法。在氧化葡糖桿菌（原始菌MCS）中利用基因工程技術導入大腸桿菌基因ccdB，得到工程菌IR3C。MCS和IR3C單菌培養(yǎng)時，活菌數(shù)變化曲線如圖乙，MCS、IR3C分別與普通生酮基古龍酸菌和巨大芽孢桿菌進行三菌混菌發(fā)酵時，產(chǎn)物含量變化曲線如圖丙?；卮鹣铝袉栴}：(1)要使基因ccdB在IR3C中穩(wěn)定遺傳、表達并發(fā)揮作用，構建的基因表達載體除啟動子外，還必須有。(2)繪制圖乙需統(tǒng)計活菌數(shù)，常用方法是。當活菌達到一定數(shù)量時，基因ccdB編碼的蛋白質開始發(fā)揮作用，推測該蛋白質的作用是，開始發(fā)揮作用的時間是，判斷理由是。(3)基于圖丙，利用IR3C三菌混菌發(fā)酵的產(chǎn)量（填“高于”或“低于”）MCS三菌混菌發(fā)酵的產(chǎn)量，其原因是。16．（2025·甘肅·高考真題）水稻白葉枯?。ㄖ仓甑娜~片上會出現(xiàn)逐漸擴大的黃白色至枯白色病斑）由白葉枯病菌引起，嚴重威脅水稻生產(chǎn)和糧食安全?？茖W家利用CRISPR-Cas9基因組編輯技術，對水稻白葉枯病的感病基因SWEET（該基因被白葉枯病菌利用以侵染水稻）的啟動子區(qū)進行了定點“修改”，編輯后的水稻幼胚通過植物組織培養(yǎng)技術獲得抗病植株（如下圖）?；卮鹣铝袉栴}。(1)CRISPR-Cas9重組Ti質粒構建完成后，可通過（方法）將該質粒轉入植物細胞，并將整合到該細胞的染色體上。為了能夠篩選出轉化成功的細胞，需要在植物組織培養(yǎng)基中添加。(2)實驗中用到的水稻幼胚在植物組織培養(yǎng)中被稱為，對其消毒時需依次使用酒精和處理。誘導形成再生植株的過程中需使用生長素和細胞分裂素，原因是。(3)為了檢測基因編輯水稻是否成功，首先需采用技術檢測目標基因的啟動子區(qū)是否被成功編輯；然后，在個體水平需將基因編輯后的水稻與野生型水稻分別接種白葉枯病菌，通過比較來驗證抗病性。(4)在該研究中，基因編輯成功后的水稻可以抗白葉枯病的原因為。17．（2025·河南·高考真題）卡拉膠是一類源于海洋紅藻的大分子多糖，可被某些細菌降解為具有多種應用前景的卡拉膠寡糖。某研究小組擬篩選具有高活性卡拉膠酶（CG）的菌種用于生產(chǎn)卡拉膠寡糖?；卮鹣铝袉栴}：(1)選擇海藻和海泥作為樣本篩選卡拉膠降解菌的原因是。將培養(yǎng)后的菌液混勻并充分，再接種至微孔板中，經(jīng)培養(yǎng)和篩選獲得了CG活性最高的菌種。(2)為構建攜帶cg（CG的編碼基因）的大腸桿菌表達載體（圖1），對cg的PCR擴增產(chǎn)物和質粒進行雙酶切，隨后用E.coliDNA連接酶連接。為保證連接準確性和效率，cg轉錄模板鏈的5'端最好含有酶切位點。另有兩組同學選用了各不相同的雙酶切組合和T4DNA連接酶重復上述實驗，獲得的部分重組質粒分子大小符合預期，但均無法使用各自構建表達載體的雙酶切組合進行切割，其原因是。

限制酶的識別序列和切割位點如下：(3)為將構建好的表達載體轉入大腸桿菌，需要先用Ca2+處理大腸桿菌細胞，目的是，隨后在含和的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時間后，根據(jù)菌落周圍有無水解透明圈篩選目的菌株。(4)已知空間上鄰近的兩個半胱氨酸易形成二硫鍵，從而提升蛋白質的耐熱性。為提高CG的耐熱性，研究人員分析了五個氨基酸位點的空間距離和保守度（保守度值越大表明該位點對酶的功能越關鍵），如圖2所示。根據(jù)分析結果，選擇第位的氨基酸替換成半胱氨酸最合適，原因是。

18．（2025·湖南·高考真題）非洲豬瘟病毒是一種雙鏈DNA病毒，可引起急性豬傳染病。基因A編碼該病毒的主要結構蛋白A，其在病毒侵入宿主細胞和誘導機體免疫應答過程中發(fā)揮重要作用?；卮鹣铝袉栴}：(1)制備特定抗原①獲取基因A，構建重組質粒（該質粒的部分結構如圖所示）。重組質粒的必備元件包括目的基因、限制酶切割位點、標記基因、啟動子和等；為確定基因A已連接到質粒中且插入方向正確，應選用圖中的一對引物對待測質粒進行PCR擴增，預期擴增產(chǎn)物的片段大小為bp。②將DNA測序正確的重組質粒轉入大腸桿菌構建重組菌。培養(yǎng)重組菌，誘導蛋白A合成。收集重組菌發(fā)酵液進行離心，發(fā)現(xiàn)上清液中無蛋白A，可能的原因是（答出兩點即可）。(2)制備抗蛋白A單克隆抗體用蛋白A對小鼠進行免疫后，將免疫小鼠B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，誘導融合的常用方法有（答出一種即可）。選擇培養(yǎng)時，對雜交瘤細胞進行克隆化培養(yǎng)和，多次篩選獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細胞。體外培養(yǎng)或利用小鼠大量生產(chǎn)的抗蛋白A單克隆抗體，可用于非洲豬瘟的早期診斷。19．（2025·河北·高考真題）為治理水體中對生物有毒害的鎘污染，研究者構建了分泌信號肽SP7、鎘離子結合蛋白CADR、定位于細胞壁的蛋白GP1和黃色熒光蛋白YFP編碼序列融合表達的載體，轉入單細胞衣藻，實現(xiàn)CADR大量合成、分泌并定位于細胞壁，以吸附水體中的鎘離子?；卮鹣铝袉栴}：(1)在DNA聚合酶、引物、模板DNA和脫氧核苷酸中，隨著PCR反應進行，分子數(shù)量逐漸減少的是和。模板與引物在PCR反應的階段開始結合。PCR中使用的DNA聚合酶需耐高溫，其原因為。(2)載體中可用的酶切位點信息和擬構建載體的部分結構如圖1所示。在將CADR、GP1和YFP基因逐個構建到載體時，為避免錯誤連接，需向以上三個基因的兩端分別添加限制酶識別序列，其中GPl兩端應添加（填兩種限制酶）的識別序列。用DNA連接酶連接時，可催化載體和目的基因之間形成鍵。(3)若在熒光顯微鏡下觀察到轉基因衣藻表現(xiàn)為，初步表明融合蛋白表達成功。將轉基因衣藻和野生型衣藻置于含鎘離子的培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時間后，若轉基因衣藻細胞壁比野生型衣藻細胞壁的鎘離子含量，則表明融合蛋白能結合鎘離子。(4)將轉基因衣藻和野生型衣藻在不同鎘離子濃度的培養(yǎng)液中培養(yǎng)6天后，檢測細胞密度，結果見圖2。轉基因衣藻在含有不同濃度鎘離子的培養(yǎng)液中生長均優(yōu)于野生型衣藻的原因可能是。240μmol·L-1鎘離子濃度下，轉基因衣藻和野生型衣藻生長均被明顯抑制的原因可能是。(5)轉基因衣藻可用于水體鎘污染治理，與施加化學藥物法相比，能體現(xiàn)出其環(huán)境治理優(yōu)勢的兩個特性是和。（填標號）①衣藻作為生物材料在水體中可自我繁殖②衣藻生長速率受鎘離子濃度影響③衣藻可吸收水體中能引起富營養(yǎng)化的物質④衣藻吸附的鎘可沿食物鏈傳遞20．（2025·湖北·高考真題）某種昆蟲病毒的遺傳物質為雙鏈環(huán)狀DNA．該病毒具有包膜結構，包膜上的蛋白A與宿主細胞膜上的受體結合后，兩者的膜發(fā)生融合，從而使病毒DNA進入細胞內(nèi)進行自我復制?；卮鹣铝袉栴}：(1)要清楚觀察病毒的形態(tài)結構需要使用的顯微鏡類型是。(2)體外培養(yǎng)的梭形昆蟲細胞，被上述病毒感染后會轉變?yōu)閳A球形，原因是病毒感染引起了昆蟲細胞內(nèi)（填細胞結構名稱）的改變。(3)這類病毒的基因組中通常含有抗細胞凋亡的基因，這類基因對病毒的生物學意義是：。(4)該病毒DNA能在宿主細胞中自我復制，卻無法在大腸桿菌中復制。為解決這一問題，可在該病毒的DNA中插入序列，以實現(xiàn)利用大腸桿菌擴增該病毒DNA的目的。(5)用該病毒感染哺乳動物細胞，可以在細胞內(nèi)檢測到該病毒完整的基因組DNA，但無對應的轉錄產(chǎn)物。推測其無法轉錄的原因是：。(6)采用脂溶劑處理該病毒顆?？墒共《臼λ拗骷毎母腥拘?，其原因是：。21．（2025·黑吉遼蒙卷·高考真題）香樹脂醇具有抗炎等功效，從植物中提取難度大、產(chǎn)率低。通過在酵母菌中表達外源香樹脂醇合酶基因N，可高效生產(chǎn)香樹脂醇。回答下列問題。

(1)可從中查詢基因N的編碼序列，設計特定引物。如圖1所示，a鏈為轉錄模板鏈，為保證基因N與質粒pYL正確連接，需在引物1和引物2的5'端分別引入和限制酶識別序列。PCR擴增基因N，特異性酶切后，利用連接DNA片段，構建重組質粒，大小約9.5kb（kb為千堿基對），假設構建重組質粒前后，質粒pYL對應部分大小基本不變。(2)進一步篩選構建的質粒，以1-4號菌株中提取的質粒為模板，使用引物1和引物2進行PCR擴增，電泳PCR產(chǎn)物，結果如圖2。在第5組的PCR反應中，使用無菌水代替實驗組的模板DNA，目的是檢驗PCR反應中是否有的污染。初步判斷實驗組（從“1~4”中選填）的質粒中成功插入了基因N，理由是。(3)為提高香樹脂醇合酶催化效率，將編碼第240位脯氨酸或第243位苯丙氨酸的堿基序列替換為編碼丙氨酸的堿基序列，丙氨酸的密碼子有GCA等。a是誘變第240位脯氨酸編碼序列的引物（GCA為誘變序列），b、c、d其中一條是誘變第243位苯丙氨酸的引物，其配對模板與a的配對模板相同。據(jù)此分析，丙氨酸的密碼子除GCA外，還有。a：5'-…GCA/CCC/GAG/TTC/TGG/CTG/TTT/CCC/TCT/TTC/TTC…-3'b：5'-…GAA/CTG/TGG/GAC/ACC/CTG/AAC/TAC/TTC/TCT/GAG…-3'c：5'-…GCC/TGG/CTG/TTT/CCC/TCT/TTC/TTC/CCC/TAC/CAC…-3'd：5'-…GAT/AAT/AAG/ATC/CGA/GAG/AAG/GCC/ATG/CGA/AAG…-3'(4)進一步檢測轉基因酵母菌發(fā)酵得到的含量并進行比較，可以選出最優(yōu)的香樹脂醇合酶基因的改造方案。22．（2025·四川·高考真題）桿菌M2合成的短肽拉索西丁能有效殺死多種臨床耐藥細菌。拉索西丁能與細菌的核糖體結合，阻止攜帶氨基酸的tRNA進入核糖體位點2。有人將合成拉索西丁的相關基因（lrcA-lrcF）導入鏈霉菌，基因克隆流程及拉索西丁的作用機制如下圖?；卮鹣铝袉栴}。注：①F1、F2、F3和F4為與相應位置的DNA配對的單鏈引物，“→”指引物5-3方向。②密碼子對應的氨基酸：AAA-賴氨酸；AUG-甲硫氨酸（起始）；UUC-苯丙氨酸；ACA-蘇氨酸：UCG-絲氨酸。(1)用PCR技術從桿菌M2基因組中擴增lrcA-lrcF目的基因時，應選用引物。本研究載體使用了鏈霉菌的復制原點，其目的是。(2)采用EcoRI和BamHI完全酶切構建的重組質粒，產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電泳檢測應產(chǎn)生條電泳條帶，電泳檢測酶切產(chǎn)物的目的是。(3)由圖可知，拉索西丁與核糖體結合后，會阻止攜帶（填氨基酸名稱）的tRNA進入結合位點，導致，最終引起細菌死亡。(4)重組鏈霉菌的目的基因產(chǎn)物經(jīng)驗證有殺菌活性，但重組菌在實驗室多次培養(yǎng)后，提取的目的基因產(chǎn)物殺菌活性喪失，可能的原因是。若運用發(fā)酵工程來生產(chǎn)拉索西丁工程藥物，除產(chǎn)物活性外還需進一步研究的問題有（答出1點即可）。23．（2025·河北·高考真題）T-DNA插入失活是研究植物基因功能的常用方法，研究者將帶有卡那霉素抗性基因的T-DNA插入擬南芥2號染色體的A基因內(nèi)，使其突變?yōu)閱适Чδ艿腶基因，花粉中A基因功能的缺失會造成其不育?；卮鹣铝袉栴}：(1)基因內(nèi)堿基的增添、缺失或都可導致基因突變。(2)以Aa植株為（填“父本”或“母本”）與野生型擬南芥雜交，F(xiàn)1中卡那霉素抗性植株的占比為0，其反交的F1中卡那霉素抗性植株的占比為。(3)為進一步驗證基因A的功能，將另一個A基因插入Aa植株的3號染色體。僅考慮基因A和a，該植株會產(chǎn)生種基因型的可育花粉，其中具有a基因的花粉占比為。該植株自交得到F1。利用圖1所示引物P1和P2、P1和P3分別對F1進行PCR檢測，電泳結果如圖2所示。根據(jù)電泳結果F1植株分為Ⅰ型和Ⅱ型，其中Ⅰ型植株占比為。F1中沒有檢測到僅擴增出600bp條帶的植株，其原因為。(4)實驗中還獲得了一個E基因被T-DNA插入突變?yōu)閑基因的植株，e基因純合的種子不能正常發(fā)育而退化。為分析基因E/e和A/a在染色體上的位置關系，進行下列實驗：①利用基因型為AaEE和AAEe的植株進行雜交，篩選出基因型為的F1植株。②選出的F1植株自交獲得F2．不考慮其他突變，若F2植株中花粉和自交所結種子均發(fā)育正常的植株占比為0，E/e和A/a在染色體上的位置關系及染色體交換情況為；若兩對基因位于非同源染色體，該類植株的占比為。除了上述兩種占比，分析該類植株還可能的其他占比和原因：。24．（2025·山東·高考真題）種子休眠是抵御穗發(fā)芽的一種機制。通過對Ti質粒的改造，利用農(nóng)桿菌轉化法將Ti質粒上的T-DNA隨機整合到小麥基因組中，篩選到2個種子休眠相關基因的插入失活純合突變體。與野生型相比，突變體種子的萌發(fā)率降低。小麥基因組序列信息已知。(1)Ti質粒上與其在農(nóng)桿菌中的復制能力相關的結構為。選用圖甲中的SmaI對抗除草劑基因X進行完全酶切，再選擇SmaI和對Ti質粒進行完全酶切，將產(chǎn)生的黏性末端補平，補平時使用的酶是。利用DNA連接酶將酶切后的包含抗除草劑基因X的片段與酶切并補平的Ti質粒進行連接，構建重組載體，轉化大腸桿菌；經(jīng)卡那霉素篩選并提取質粒后再選用限制酶進行完全酶切并電泳檢測，若電泳結果呈現(xiàn)一長一短2條帶，較短的條帶長度近似為bp，則一定為正向重組質粒。(2)為證明這兩個突變體是由于T-DNA插入到小麥基因組中同一基因導致的，提取基因組DNA，經(jīng)酶切后產(chǎn)生含有T-DNA的基因組片段（圖乙）。在此酶切過程中，限于后續(xù)PCR難以擴增大片段DNA，最好使用識別序列為（填“4”“6”或“8”）個堿基對的限制酶，且T-DNA中應不含該酶的酶切位點。需首先將圖乙的片段，才能利用引物P1和P2成功擴增未知序列。PCR擴增出未知序列后，進行了一系列操作，其中可以判斷出2條片段的未知序列是否屬于同一個基因的操作為（填“瓊脂糖凝膠電泳”或“測序和序列比對”）。(3)通過農(nóng)桿菌轉化法將構建的含有野生型基因的表達載體轉入突變植株，如果檢測到野生型基因，（填“能”或“不能”）確定該植株的表型為野生型。25．（2025·安徽·高考真題）稻瘟病是一種真菌病害，水稻葉片某些內(nèi)