I的CS.65.020

B43

DB5206

銅仁市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB5206/T101—2018

代替DB522200/T116—2011

銅仁市山羊人工授精技術(shù)操作規(guī)程

TongrenCityofGoatartificialinseminationtechnologyoperatingrules

2018-12-06發(fā)布2018-12-06實(shí)施

銅仁市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

DB5206/T101—2018

銅仁市山羊人工授精技術(shù)操作規(guī)程

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了山羊人工授精技術(shù)的必備條件、采精前的準(zhǔn)備、采精、精液品質(zhì)檢查、精液

稀釋與保存、母羊發(fā)情鑒定、輸精、妊娠診斷等。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于銅仁市規(guī)模養(yǎng)羊場（戶）、山羊人工授精站（點(diǎn)）開展山羊人工授精技術(shù)操作。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適

用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T5458液氮生物容器

GB20557山羊冷凍精液

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件

3.1

人工授精

是指利用人工的方法采取公羊的精液，經(jīng)檢查和處理后，注入發(fā)情母羊的生殖道內(nèi)，使

其受孕的一種繁殖技術(shù)。

3.2

假陰道

模擬母山羊陰道的、用于采精的工具，羊用假陰道具有與母羊陰道相似的結(jié)構(gòu)。

3.3

精子活力

指在37℃～38℃條件下精液中呈直線前進(jìn)運(yùn)動的精子數(shù)占總精子數(shù)的百分率。

4必備條件

4.1從事山羊人工授精操作人員必須身體健康，具有一定文化程度，經(jīng)縣級以上業(yè)務(wù)主管部

門培訓(xùn)，能基本了解山羊繁殖的基本知識，熟練掌握山羊人工授精技術(shù)操作。

4.2種公羊圈舍2～3間，每間5m2～8m2，用水泥砂漿硬化的運(yùn)動及采精場20m2～30m2。

4.3種公羊品種標(biāo)準(zhǔn)與調(diào)教

4.3.1根據(jù)品種標(biāo)準(zhǔn)，選擇體質(zhì)結(jié)實(shí)，結(jié)構(gòu)勻稱，生產(chǎn)性能高，生殖器官正常，有明顯雄性

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特征，精液品質(zhì)優(yōu)良特級或一級公羊2～3只。

4.3.2種公羊調(diào)教

4.3.2.1發(fā)情母羊引誘法：將公羊放入發(fā)情母羊群中，幾天后，當(dāng)公羊爬跨母羊時，讓其本

交幾次，然后隔開。

4.3.2.2嗅覺刺激法：將發(fā)情母羊的尿液、分泌物或成年公羊的精液涂抹在公羊的鼻子上，

刺激性欲。

4.3.2.3觀摩法：公羊配種或采精時，讓其在一旁觀摩，直至調(diào)教會為止。

4.4采精室的要求：采精地面平坦，堅實(shí)而不光滑，室內(nèi)不得存放其他雜物，環(huán)境相對安靜，

室溫保持在18℃～25℃，面積12m2～20m2。

4.5器械、藥品、用具

器械、藥品、用具見附錄A。

5采精準(zhǔn)備

5.1臺羊的準(zhǔn)備

選擇健康發(fā)情征狀明顯的母羊作臺羊，臺羊后軀用0.1%高錳酸鉀液清洗消毒擦凈。

5.2采精和輸精器械的清洗與消毒

5.2.1采精和輸精器械器械的清洗將采精、輸精及與精液接觸的所有器械用2％的碳酸氫

鈉刷洗，然后用清水沖洗，再用蒸餾水沖洗數(shù)次。

5.2.2其他器械的消毒假陰道外筒清洗后不用消毒，內(nèi)胎使用前用75％的酒精消毒。集

精杯、輸精器、試管、玻璃棒等玻璃器皿及鐵制輸精器、鑷子等蒸煮消毒30min，或置高壓

鍋內(nèi)消毒15min，用前再用生理鹽水沖洗數(shù)次。凡士林、毛巾、紗布等蒸氣滅菌20min待用。

5.3假陰道的制作及安裝

假陰道安裝假陰道分內(nèi)外兩層，外層是硬塑料圓筒，亦稱外殼，長20cm，直徑4cm，殼

厚約0.5cm，筒上有一孔，孔上裝有橡皮塞，塞上有氣嘴。內(nèi)層為薄橡膠皮筒，亦稱內(nèi)胎，

長30cm，扁平直徑4cm。安裝假陰道之前，首先檢查所用的內(nèi)胎有無損壞和砂眼，確認(rèn)完整

無損后先放入開水中浸泡3～5min。新內(nèi)胎或長期未用的內(nèi)胎，必須洗凈消毒后方可使用；

工作人員要剪短并磨平指甲，以免劃破內(nèi)胎，再用酒精棉球消毒雙手。安裝時，先將內(nèi)胎裝

入外殼，內(nèi)胎光滑面朝里，粗糙面朝外殼，露出外殼的兩頭要求等長，然后將內(nèi)胎的一端翻

套在外殼上，同樣的方法套好另一端，注意不要使內(nèi)胎發(fā)生扭轉(zhuǎn)，也不要拉得太直太緊，做

到松緊適度，內(nèi)胎平展。兩端再分別套上橡皮圈固定。用酒精棉球由內(nèi)向外徹底消毒內(nèi)胎，

待酒精揮發(fā)后再用生理鹽水擦拭。在假陰道一端安裝消毒過的集精瓶。安裝好假陰道后，左

手握住假陰道的中部，右手用燒杯將溫水（水溫50～55℃）從外殼的灌水孔注入，水量約

為外殼與內(nèi)胎間容積的1/2～1/3（豎立假陰道，水位達(dá)灌水孔即可），再裝上帶活塞的氣

嘴，并將活塞關(guān)好。隨后，用消毒過的玻璃棒取少許凡士林，由內(nèi)向外在內(nèi)胎表面均勻涂抹

一薄層，涂抹深度以假陰道長度的1/2為宜。最后，從氣嘴吹氣，用消毒過的溫度計插入假

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陰道內(nèi)檢查溫度，以采精時40～42℃為宜。溫度適宜后吹氣加壓，使假陰道口呈三角形，

松緊適度，能以裝入公羊的陰莖為宜。

5.4其它準(zhǔn)備

5.4.1操作人員剪短指甲并磨光，肥皂洗手，沖洗干凈后擦干，戴上乳膠手套，涂上滑石粉

，穿上工作服。

5.4.2采精公羊的準(zhǔn)備用0.1%高錳酸鉀溶液清洗外生殖器及周圍并擦干凈，若陰莖包皮

孔有長毛先剪短。

6采精

6.1采精時間

一般為早上進(jìn)食前或進(jìn)食后1h采精，盛夏中午不采，冬季清晨不采。

6.2采精人員右手握住假陰道后端，固定好集精杯(瓶)，并將氣嘴活塞朝下，蹲在臺羊右后

側(cè)，讓假陰道靠近母羊的臀部，在公羊跨上母羊背側(cè)的同時，將假陰道與地面保持35～40°

角迅速將公羊的陰莖引入假陰道內(nèi)，當(dāng)公羊后軀急速用力向前一沖時，即已射精，此時，順

公羊動作向后移下假陰道，并迅速將假陰道豎起，集精杯一端向下，然后打開活塞上的氣嘴，

放出空氣，取下集精杯，用蓋蓋好送精液處理室待檢。

6.3種公羊利用8～12月齡調(diào)教配種，成年公羊一般每周采精3～4次，日采精1～2次，必

要時每d采3～6次，二次采精間隔2h。采精應(yīng)在喂完料、運(yùn)動1h后進(jìn)行。連續(xù)采精5～6d

應(yīng)休息1d。公羊的利用年限為4～5年。

采精步驟及注意事項(xiàng)：牽引公羊到采精現(xiàn)場后，人為控制其幾min后再讓其爬跨臺羊，

這樣不僅可以增強(qiáng)公羊的性反射，也可提高射精量和精液品質(zhì)。采精步驟如下：①采精人員

右手緊握假陰道，用食指、中指夾好集精瓶，使假陰道氣嘴活塞朝下，蹲在臺羊的右后側(cè)。

②待公羊爬跨臺羊且陰莖伸出時，采精人員用左手輕撥公羊包皮（勿觸龜頭），將陰莖導(dǎo)入

假陰道（假陰道應(yīng)與地面呈35°）。③若假陰道內(nèi)的溫度、壓力和潤滑感適宜，公羊很快

就會射精。當(dāng)公羊后軀急速向前一沖，表明已經(jīng)射精。此時，順公羊動作向后及時取下假陰

道，并迅速將假陰道豎立，安裝有集精瓶的一端向下。④打開活塞上的氣嘴，放出空氣，取

下集精瓶，用蓋蓋好并保溫（37℃水?。?，待檢查。

7精液品質(zhì)檢查

7.1精液的外觀檢查

7.1.1精液量成年公羊射精量，一般每次為0.5mL～1．5mL，每mL精子總數(shù)約為20億。

公羊的射精量一般為0.5～2mL，平均為1mL左右,每mL精液中精子數(shù)量為20億～50億個。

7.1.2色澤正常精液呈乳白色或淡黃色，濃厚而不透明；紅色、褐色、綠色的精液為不

正常。

7.1.3氣味正常精液無異味或略帶腥味，腐臭等異味精液為不正常。

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7.2顯微鏡檢查

7.2.1精液檢查操作的基本原則采得的精液要迅速置于30℃左右的恒溫水浴中或保溫瓶

中；精液的檢查要保持室溫在18℃～30℃和顯微鏡周圍溫度37℃～38℃下進(jìn)行；檢查精液

時要求動作迅速；取樣要有代表性，要求從全部并輕輕振搖的精液中取樣；操作過程中不應(yīng)

使精液品質(zhì)受到損害和其他異物的影響。

7.2.2精子活力：是指精液中直線運(yùn)動的精子所占比例。一般采用五級評分的辦法：全部精

子做直線運(yùn)動，則評為五級（1）；80%左右的精子做直線運(yùn)動，評為四級（0.8～0.9）；60%

左右的精子做直線運(yùn)動，評為三級（0.6～0.7）；40%左右的精子做直線運(yùn)動，評為二級（0.4～

0.5）；20%左右的精子做直線運(yùn)動，評為一級（0.3以下）。在人工授精中，鮮精的活力低

于四級，一般不能用于輸精。直線前進(jìn)運(yùn)動的精子占90%,則活力為0.9;直線前進(jìn)運(yùn)動的精

子占80%,則活力為0.8;以此類推,活力低于0.6精液不能存放和稀釋。

7.2.3精液的密度：通常與精子活力同時檢查。在200～600倍的顯微鏡下觀察，精子密度

一般分為密、中、稀三級。如精子密布整個視野，精子之間無空隙，即為“密”；精子之間

有明顯的空隙，距離為1～2個精子的長度，即為“中”；如果視野中只有少數(shù)精子，精子

之間的空隙超過2個以上精子的長度，即為“稀”。在視野中沒有看到精子的，用“無”標(biāo)

記。一般用于輸精的精液，其精子密度至少是“中”級。

7.2.4酸堿度（pH值）正常精液呈中性或弱堿性,平均PH值為6.6～7.5。

8精液稀釋與保存

8.1精液稀釋液配方

8.1.1常溫保存稀釋液

8.1.1.1葡萄糖3g、檸檬酸鈉1.4克、加蒸餾水100mL，溶解過濾后煮沸消毒15min—20min，

降至室溫每mL加入青霉素1000IU、鏈霉素1000IU；

8.1.1.2新鮮牛奶用數(shù)層紗布過濾，然后在水浴鍋中加熱至92℃～95℃，維持10min～

15min，冷卻至室溫，除去上層奶皮，每mL加青霉素1000IU、鏈霉素1000IU。

8.1.2低溫保存稀釋液

8.1.2.1100mL蒸餾水加10克奶粉，溶解后用多層紗布過濾，然后在水浴鍋中加熱至92℃

—95℃，維持15min，冷卻至室溫，每mL加入青霉素1000IU、鏈霉素1000IU；

8.1.2.2100mL的蒸餾水加1.4克檸檬酸鈉、3克葡萄糖溶解過濾后消毒，冷卻至40℃時加

入新鮮卵黃20mL，每毫再加入青霉素1000IU、鏈霉素1000IU。

8.2精液稀釋倍數(shù)

一般稀釋比例為1：2～4；精子密度在25億以上的精液可以按1:40～50稀釋。

8.3精液稀釋方法

稀釋液的溫度要與精液的溫度一致，在20℃～25℃時進(jìn)行稀釋。將稀釋液沿精液瓶壁

緩緩倒入，輕輕攪勻。如作20倍以上高倍稀釋時，應(yīng)分兩步進(jìn)行，先加入稀釋液總量的1

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／3～1／2作低倍稀釋，稍后再將剩余的稀釋液全部加入。稀釋后，進(jìn)行精子活力檢查，稀

釋前后活力一樣，可進(jìn)行分裝與保存。

8.4．精液保存

8.4.1鮮精保存山羊鮮精常溫保存（15℃～25℃）48h；低溫保存（0℃～5℃），從常溫每

min降2℃逐級降至低溫，放在冰箱內(nèi)或裝有冰塊的廣口保溫瓶中冷藏，保存60h-72h，活

力可達(dá)70％以上。

8.4.2凍精保存山羊凍精質(zhì)量應(yīng)符合GB20557的規(guī)定，并浸放在液氮生物容器內(nèi)（-196℃）

備用，液氮生物容器應(yīng)符合GB/T5458的規(guī)定。定期撿查容器(罐)內(nèi)液氮消耗量，不足60%

時，應(yīng)及時補(bǔ)充液氮。

8.5精液運(yùn)輸

做到低溫、防震、防污染、防輻射、防時間過長（不超過6h）。

9母羊發(fā)情鑒定

9.1母羊發(fā)情征狀鳴叫不安、食欲減退、頻頻排尿、主動接近公羊、爬跨其它母羊；外陰

部潮紅、腫脹、流出粘液:發(fā)情開始透明粘稠帶狀，中期白色，末期混濁、不透明粘膠狀。

9.2配種適期母羊發(fā)情周期18d～24d，平均為21d，發(fā)情持續(xù)期24h～48h，平均為30h。

發(fā)情開始后12h～24h為配種適宜期。

10輸精

10.1準(zhǔn)備工作

在人工授精前，應(yīng)做好適當(dāng)?shù)臏?zhǔn)備工作，保證輸精過程快速、準(zhǔn)確、連貫，盡量縮短精

液在羊體外存留的時間。①輸精器械的準(zhǔn)備。輸精所有可能用到的器材如玻璃輸精器、開膣

器、輸精管等，均要消毒滅菌。②輸精人員的準(zhǔn)備。輸精人員穿工作服，剪短指甲，雙手洗

凈擦干后用75%酒精消毒，再用生理鹽水沖洗。③授精母羊的準(zhǔn)備。把發(fā)情母羊牽到輸精架

上保定，并將其外陰部擦洗干凈、消毒。生產(chǎn)中，可采取一人背對羊頭騎于母羊背上，抬起

母羊的兩后肢，其余人幫助固定好母羊以便輸精。④精液的準(zhǔn)備。常溫或低溫保存的精液，

要在溫水中升溫到35℃左右，并在顯微鏡下檢查其活力，符合要求才能輸精。

10.2清點(diǎn)消毒好的輸精器械，并再用稀釋液沖洗備用。

10.3凍精解凍

顆粒凍精用2.2%～2.9%的檸檬酸鈉溶液0.1mL注入消毒的小玻璃試管內(nèi)，并置于45℃～

60℃的溫水杯中，然后取出顆粒精液一枚，投入解凍液內(nèi)，并輕輕搖動；細(xì)管凍精38℃～

40℃的溫水直接解凍，10s～15s后立即取出輸給發(fā)情母羊。

10.4檢查精液

鮮精鏡檢活力0.6以上、凍精鏡檢活力0.3以上，并將精液吸入輸精器。

10.5輸精母羊保定

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多采用倒提后腿法保定或?qū)l(fā)情母羊兩后肢擔(dān)在離地高度50cm左右的橫杠式輸精架上

固定作保定。

10.6外陰消毒

用0.1%高錳酸鉀液清洗母羊外陰及后軀，再用溫水洗掉藥液并擦干。

10.7輸精技術(shù)

10.7.1輸精原則做到“適時”、“深部”、“慢插”、“輕注”“稍站”。

10.7.2.1方法輸精員右手持輸精器，左手持開膣器，先將涂上無菌潤滑劑的開膣器順著陰

門插人陰道深部之后旋轉(zhuǎn)90°,開啟開膣器尋找子宮頸口，開膣器開張幅度2cm～3cm。

10.7.2.2用額燈或手電筒光源輔助觀察。子宮頸口位于陰道底部，稍向外突出，呈深紅色

陰影或小孔，像極小的唇狀物，如有云霧狀粘液妨礙觀察，用吸管吸去。有些羊需用輸精器

前端拔開子宮頸外口上下2片或3片突起皺壁方可將輸精器插入子宮頸口內(nèi)。如果子宮頸緊

閉而干燥，說明母羊尚未發(fā)情，如果粘液清澈的，應(yīng)取出開膣器延期輸精。

10.7.2.3使用細(xì)管凍精，將細(xì)管槍上的活塞拉回12.7cm～17.8cm插入細(xì)管，棉花端封口朝

向前，切下細(xì)管尖使切口整齊，套上細(xì)管，扭緊“O”型環(huán)。

10.7.2.4找到子宮頸口后，將輸精器插入子宮頸口內(nèi)1cm～1．5cm處緩慢地注入精液。若

子宮頸口較緊或不正者，可將精液注到子宮頸口附近，但輸精量應(yīng)加大一倍。輸完精后先將

輸精器取出，再將開腔器抽出。

10.7.3輸精量鮮精為0.1mL～0.2mL、細(xì)管凍精一支，有效精子數(shù)不少于6000萬個。一

次輸精的有效精子數(shù)應(yīng)保持在7500萬個以上，一個發(fā)情期要輸精2次，間隔8h～12h。

10.7.4輸精注意事項(xiàng)

10.7.4.1輸精瞬間應(yīng)縮小開腔器開張程度，減少刺激，并向外拉1/3，使陰道前邊閉合，

容易輸精。

10.7.4.2輸精完畢的母羊在原保定位置停留一會再放開，輸精后的母羊應(yīng)休息10min左右，

并注意觀察是否有精液倒流，不能立即驅(qū)趕或放牧。保持安靜狀態(tài)2h～3h將母羊趕走。

10.7.4.3輸精人員的手和輸精器外壁要用生理鹽水擦凈后再操作。

11妊娠鑒定

對已輸配母羊，觀察下一情期是否發(fā)情，如不出現(xiàn)返情，可視為懷孕，則加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，

保證胎兒正常發(fā)育。山羊孕期為145d～159d，平均為150d，正確推算配種母羊的預(yù)產(chǎn)期，

要做好追綜調(diào)查，不斷總結(jié)和提高山羊人工輸配受胎率。

12做好記錄

做好種公羊精液或凍精品質(zhì)檢查記錄和母羊配種繁殖記錄是總結(jié)和提高山羊人工授精

受胎率關(guān)鍵措施之一。種公羊精液品質(zhì)檢查及利用記錄表見附錄B，母羊配種繁殖記錄表見

附錄C。

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附錄A

(資料性附錄)

表A.1主要器械、藥品和用具表

序號名稱規(guī)格單位數(shù)量

1顯微鏡300～600倍架1

2蒸餾器小型套1

3d平0.1～100g臺1

4假陰道外殼個4

5假陰道內(nèi)胎條8～12

6假陰道塞子(帶氣嘴)個6～8

7玻璃輸精器1mL支8～12

8輸精量調(diào)節(jié)器個4～6

9集精杯個8～12

10金屬開腔器大、小兩種個各2～3

11溫度計100℃支4～6

12寒暑表個3

13載玻片盒1

14蓋玻片盒1～2

15酒精燈個2

16玻璃量杯500mL、100mL個各1

17量筒500mmL、1000mL個各1

18蒸餾水瓶500mL、1000mL個各1

19玻璃漏斗8cm、12cm個各1～2

20漏斗架個1～2

21廣口玻塞瓶125mL、500mL個4～6

22雨口玻塞瓶500mL、100mL個各1～2

23玻璃三角燒瓶500mL個2

24洗瓶500mL個2

25燒杯500mL個2

26玻璃皿10～12cm套2

27帶蓋搪瓷杯250mL、500mL個各2～3

28搪瓷盤20cm×30cm個2

29搪瓷盤40cm×50cm個2

30不銹鋼鍋帶蒸籠個1

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附錄A（續(xù)）

序號名稱規(guī)格單位數(shù)量

31剪刀直頭把2

32廣口保溫瓶手提式個2

33酒精95%，500mL瓶2

34氯化鈉化學(xué)純500g瓶2

35凡士林克1000

36試管刷大，中，小把各2

37紗布克1000

38藥棉克1000

39瓷盆個2

40手電筒（額燈）帶電池個2

41耳號鉗把2

42羊耳號個按羊數(shù)量定

43工作服套每人1套

44肥皀塊2

45毛巾塊4

46高錳酸鉀瓶2

47碳酸氫鈉瓶2

48碘酊mL200

49配種記錄本本2

50精液檢查記錄本本1

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