第十九章

補(bǔ)體的檢測(cè)與應(yīng)用

臨床微生物學(xué)及免疫學(xué)教研室吳超1主要內(nèi)容：補(bǔ)體系統(tǒng)（了解與復(fù)習(xí)）補(bǔ)體總活性測(cè)定－CH50（重點(diǎn)掌握）單個(gè)補(bǔ)體成分測(cè)定（熟悉）補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（重點(diǎn)掌握）補(bǔ)體測(cè)定的應(yīng)用（了解）2第一節(jié)補(bǔ)體系統(tǒng)3免疫溶菌現(xiàn)象（Pfeiffer，1889年）

補(bǔ)體系統(tǒng)

4一、概述（一）補(bǔ)體（complement）的概念補(bǔ)體（complement）是由30余種血清蛋白和細(xì)胞膜蛋白組成的、具有級(jí)聯(lián)酶促反應(yīng)特征和自我調(diào)節(jié)機(jī)制的蛋白質(zhì)反應(yīng)系統(tǒng)。補(bǔ)體是天然免疫防御的組成部分，也是抗體介導(dǎo)體液免疫的效應(yīng)系統(tǒng)。

補(bǔ)體系統(tǒng)

5

（二）補(bǔ)體系統(tǒng)的組成補(bǔ)體成分（components）補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白（Regulators）補(bǔ)體受體（ComplementReceptors）

補(bǔ)體系統(tǒng)

6

補(bǔ)體的固有成分及其分子特性

補(bǔ)體系統(tǒng)

補(bǔ)體系統(tǒng)蛋白成分分子量結(jié)構(gòu)特點(diǎn)經(jīng)典活化的途徑

C1qC1rC1sC4C2C3旁路活化途徑

D因子

B因子凝集素途徑

MBP（MBL）MASP-1MASP-2終末端成分C5C6C7C8C9

460,000166,000166,000200,000102,000185,000

24,00092,000

320,00078,00076,000191,000120,000115,000151,00071,000

膠原樣蛋白絲氨酸蛋白酶SCRs具疏酯鍵結(jié)構(gòu)絲氨酸蛋白酶,SCRs具疏酯鍵結(jié)構(gòu)

絲氨酸蛋白酶絲氨酸蛋白酶,SCRs

膠原樣蛋白絲氨酸蛋白酶絲氨酸蛋白酶與C3/C4結(jié)構(gòu)相似孔道形成蛋白SCRs孔道形成蛋白LDL-R.EGF-R7補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白組成及其分子特性補(bǔ)體系統(tǒng)蛋白成分分子量結(jié)構(gòu)特點(diǎn)

血漿內(nèi)補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白

C1-INHC4hbpH因子

I因子備解素Properdin

S-protein膜結(jié)合調(diào)節(jié)蛋白

DAFMCPCR1HRF/C8bpCD59

110,000550,000150,00088,000220,00083,000

70,00045-70,000160,000、220,000250,000、260,00065,00018～25,000

SerpinsSCRsSCRs絲氨酸蛋白酶thrombospondin

GPI-protein.SCRsSCRsSCRs

GPI-proteinGPI-protein

補(bǔ)體系統(tǒng)

8補(bǔ)體受體和其生物學(xué)功能受體配體細(xì)胞分布生物學(xué)功能CR1

CR2

CR3

CR4C3a/C4aR

C5a受體C3b,C4b,C3bi

C3bi,C3dg,C3dEB病毒C3b(弱)C3bi

C3biC3a,C4a

C3d,C3dg紅細(xì)胞中性粒細(xì)胞,單核/巨噬細(xì)胞嗜酸粒細(xì)胞B細(xì)胞,T細(xì)胞濾泡樹突狀細(xì)胞腎小球上皮細(xì)胞B細(xì)胞鼻咽部上皮細(xì)胞濾泡樹突狀細(xì)胞單核/巨噬細(xì)胞,中粒,NK細(xì)胞脾內(nèi)樹突狀細(xì)胞中粒,單核細(xì)胞,血小板肥大細(xì)胞,嗜鹼粒細(xì)胞平滑肌細(xì)胞淋巴細(xì)胞肥大細(xì)胞,嗜鹼粒細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞中粒,單核/巨噬細(xì)胞清除血中免疫復(fù)合物,促進(jìn)C3轉(zhuǎn)化酶分解,Ⅰ因子的輔助因子增強(qiáng)吞噬作用

??結(jié)合免疫復(fù)合物?溶解捕獲的免疫復(fù)合物?B細(xì)胞激活？EB病毒感染方式EB病毒感染方式結(jié)合免疫復(fù)合物,活記憶B細(xì)胞細(xì)胞表面粘附(與粘附、W化吞噬有關(guān))？增強(qiáng)吞噬作用脫顆粒釋放組胺等炎癥介質(zhì)收縮?脫顆粒釋放組胺等炎癥介質(zhì)增強(qiáng)血管通透性啟動(dòng)趨化性

補(bǔ)體系統(tǒng)

9（三）補(bǔ)體系統(tǒng)的命名補(bǔ)體成分：C1（C1q、C1r、C1s）、C2、C3……B因子、D因子、I因子……肽鏈：C3α、C3β……補(bǔ)體酶解片段：C3a、C3b、C5a、C2b……酶活性分子：C1、C4b2b、C4b2b3b……

補(bǔ)體系統(tǒng)

10（四）補(bǔ)體的理化及生物學(xué)性質(zhì)各補(bǔ)體成分的分子量及血清含量不一；大多數(shù)補(bǔ)體成分對(duì)熱敏感；主要由肝細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和腸粘膜上皮細(xì)胞產(chǎn)生。細(xì)胞膜補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白具有同源限制性。

補(bǔ)體系統(tǒng)

11二、補(bǔ)體的激活激活途徑--經(jīng)典途徑(classicalpathway)Ag+Ab------C1q--旁路途徑(alternativepathway)

病原微生物----C3--MBL途徑（lectinpathway）MBL+病原微生物---MASP--C4,C2

甘露糖殘基

補(bǔ)體系統(tǒng)

12（一）經(jīng)典激活途徑（CLASSICALPATHWAY）激活物：抗原抗體復(fù)合物IgM：1分子IgG3、IgG2、IgG1：2分子以上多聚Ig分子酶活性分子：C3轉(zhuǎn)化酶：C4b2b、C5轉(zhuǎn)化酶：C4b2b3b

補(bǔ)體系統(tǒng)

13

激活過程1.識(shí)別階段

（RecognitionPhase）Ag-AbComplex+C1q→→C1q→C1r→C1s(具有脂酶活性)；

補(bǔ)體系統(tǒng)

14

補(bǔ)體系統(tǒng)

15

補(bǔ)體系統(tǒng)

162.活化階段

（ActivationPhase）C4C4a＋C4b↑↓C1sC4b2bC4b2b3b（C5轉(zhuǎn)化酶）↓↑C2C2a＋C2bC3C3b＋C3a

補(bǔ)體系統(tǒng)

17

補(bǔ)體系統(tǒng)

2b2a4b2b18

補(bǔ)體系統(tǒng)

2b4b2b3b19

3.膜攻擊階段（AttackPhase）

C5────→C5a＋C5bC5b+C6、C7、C8、C9─→C5b6789

補(bǔ)體系統(tǒng)

C4b2b3b(膜攻擊單位)20

補(bǔ)體系統(tǒng)

2b21

補(bǔ)體系統(tǒng)

22

補(bǔ)體系統(tǒng)

23（二）旁路激活途徑（ALTERNATIVEPATHWAY）激活物：細(xì)菌脂多糖（LPS）、酵母多糖、葡聚糖Covf（cobravenomfactor）多聚IgA、IgG4分子酶活性分子：C3轉(zhuǎn)化酶：C3bBb、C5轉(zhuǎn)化酶：C3bBb3b激活過程

補(bǔ)體系統(tǒng)

24

補(bǔ)體系統(tǒng)

C3H、I因子│↓B,Mg2+DP(滅活)

C3b───→C3bB───→C3bBb───→C3bBb3b↑滅活

(C3轉(zhuǎn)化酶)

(C5轉(zhuǎn)化酶)│

I因子

C3───→C3b＋C3a25

補(bǔ)體系統(tǒng)

26三、補(bǔ)體的生物學(xué)功能

補(bǔ)體系統(tǒng)

27（一）細(xì)胞毒及溶菌

補(bǔ)體系統(tǒng)

28（二）調(diào)理作用（Opsonization）

補(bǔ)體系統(tǒng)

29（三）炎癥介質(zhì)作用激肽樣作用：C2a過敏毒素作用：C5a、C3a趨化因子作用：C3a、C5a、C567亞溶破MAC刺激效應(yīng)

補(bǔ)體系統(tǒng)

30（四）免疫調(diào)節(jié)作用補(bǔ)體與特異性體液免疫

---CR2/CD19/CD20:BCR共受體—促進(jìn)維持免疫記憶補(bǔ)體與T細(xì)胞活化及調(diào)節(jié)

---通過免疫黏附及調(diào)理促進(jìn)抗原呈遞—T淋巴細(xì)胞的輔助刺激信號(hào):CD55,CD59—與細(xì)胞因子:C1q/C1qR

補(bǔ)體系統(tǒng)

31四、補(bǔ)體激活的調(diào)節(jié)自身衰變補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白--C1環(huán)節(jié)：C1INH--C3/C5轉(zhuǎn)化酶環(huán)節(jié):C4bp,FactorI,DAF,MCP,CR1--MAC環(huán)節(jié):C8bp/HRF,CD59,ProteinS,Sp40/40

補(bǔ)體系統(tǒng)

32五、補(bǔ)體的受體

—C3及裂解片段的受體：CR1,2,3,4—C3a/C4a,C5a,C1q受體

補(bǔ)體系統(tǒng)

33補(bǔ)體受體和其生物學(xué)功能受體配體細(xì)胞分布生物學(xué)功能CR1

CR2

CR3

CR4C3a/C4aR

C5a受體C3b,C4b,C3bi

C3bi,C3dg,C3dEB病毒C3b(弱)C3bi

C3biC3a,C4a

C3d,C3dg紅細(xì)胞中性粒細(xì)胞,單核/巨噬細(xì)胞嗜酸粒細(xì)胞B細(xì)胞,T細(xì)胞濾泡樹突狀細(xì)胞腎小球上皮細(xì)胞B細(xì)胞鼻咽部上皮細(xì)胞濾泡樹突狀細(xì)胞單核/巨噬細(xì)胞,中粒,NK細(xì)胞脾內(nèi)樹突狀細(xì)胞中粒,單核細(xì)胞,血小板肥大細(xì)胞,嗜鹼粒細(xì)胞平滑肌細(xì)胞淋巴細(xì)胞肥大細(xì)胞,嗜鹼粒細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞中粒,單核/巨噬細(xì)胞清除血中免疫復(fù)合物,促進(jìn)C3轉(zhuǎn)化酶分解,Ⅰ因子的輔助因子增強(qiáng)吞噬作用

??結(jié)合免疫復(fù)合物?溶解捕獲的免疫復(fù)合物?B細(xì)胞激活？EB病毒感染方式EB病毒感染方式結(jié)合免疫復(fù)合物,活記憶B細(xì)胞細(xì)胞表面粘附(與粘附、W化吞噬有關(guān))？增強(qiáng)吞噬作用脫顆粒釋放組胺等炎癥介質(zhì)收縮?脫顆粒釋放組胺等炎癥介質(zhì)增強(qiáng)血管通透性啟動(dòng)趨化性

補(bǔ)體系統(tǒng)

34第二節(jié)血清補(bǔ)體總活性測(cè)定35一、溶血反應(yīng)

（一）溶血反應(yīng)的組成補(bǔ)體＋綿羊紅細(xì)胞＋溶血素血清補(bǔ)體總活性測(cè)定36補(bǔ)體

多采用豚鼠血清,必須新鮮－70℃可保存數(shù)月，避免反復(fù)凍融存在個(gè)體差異,三只以上的血清混合使用。血清補(bǔ)體總活性測(cè)定37

綿羊紅細(xì)胞

玻璃珠去除纖維蛋白。加等量或兩倍的阿氏（Alsever）保存液混合，便于抗凝和儲(chǔ)存。臨用時(shí)生理鹽水洗滌紅細(xì)胞。使用濃度一般為2~5％。標(biāo)準(zhǔn)化：542nm比濁。血清補(bǔ)體總活性測(cè)定38

溶血素

溶血素即抗綿羊紅細(xì)胞抗體。制備：多是綿羊紅細(xì)胞免疫家兔而得到的兔抗血清。試驗(yàn)前應(yīng)先行加熱56℃30min或60℃3min以滅活補(bǔ)體。滴定溶血素的效價(jià)血清補(bǔ)體總活性測(cè)定39①溶血素稀釋溶血素的稀釋一般不采用連續(xù)倍比稀釋法，因?yàn)橄♂尩阶詈罂缍忍?，不太容易確定單位。

血清補(bǔ)體總活性測(cè)定40不同濃度溶血素的配制最終稀釋度緩沖液（ml）所加溶血素稀釋度體積（ml）1:10001.81:1000.21:20000.21:10000.21:30000.41:10000.21:40000.21:20000.21:50000.81:10000.21:60000.21:30000.21:80000.21:40000.21:100000.21:50000.2血清補(bǔ)體總活性測(cè)定41②效價(jià)滴定

避免蓋子上的冷凝水滴入試管內(nèi)引起非補(bǔ)體性溶血。血清補(bǔ)體總活性測(cè)定42溶血素的滴定

管號(hào)

溶血素稀釋度

試管內(nèi)加的各種試劑材料

溶血素(ml)

1:60稀釋補(bǔ)體(ml)緩沖液(ml)

2％羊紅細(xì)胞(ml)

結(jié)果

1234567891:10001:20001:30001:40001:50001:60001:80001:10000對(duì)照0.10.10.10.10.10.10.10.1－0.20.20.20.20.20.20.20.2－0.20.20.20.20.20.20.20.20.50.10.10.10.10.10.10.10.10.1全溶全溶全溶全溶大部分溶微溶不溶不溶不溶血清補(bǔ)體總活性測(cè)定43（二）判定標(biāo)準(zhǔn)完全溶血的試管內(nèi)液體紅色透明，放置一段時(shí)間后，管底無細(xì)胞沉淀。不溶血的管內(nèi)液體混濁，放置后可見紅細(xì)胞沉淀，上清無色透明。以完全溶血的最高稀釋管為最大效應(yīng)管，作為一個(gè)單位。再補(bǔ)體活性測(cè)定或補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)中一般使用2U。血清補(bǔ)體總活性測(cè)定44（三）稀釋緩沖液

磷酸鹽緩沖液或巴比妥緩沖液等。pH應(yīng)調(diào)至7.2-7.4之間。適量氯化鈉保持等滲。并適量加入一些鈣離子和鎂離子。0.1％明膠使蛋白液穩(wěn)定。0.02％疊氮鈉防腐。

血清補(bǔ)體總活性測(cè)定45（四）溶血反應(yīng)的應(yīng)用：

檢測(cè)補(bǔ)體的活性或溶血素的效價(jià)等。血清補(bǔ)體總活性測(cè)定46二、血清總補(bǔ)體活性測(cè)定

（CH50試驗(yàn)）

（一）CH50試驗(yàn)原理（二）試驗(yàn)方法血清補(bǔ)體總活性測(cè)定47（一）CH50試驗(yàn)原理在溶血反應(yīng)中，補(bǔ)體溶血程度與補(bǔ)體的活性相關(guān)，但非直線關(guān)系。以溶血百分率為縱坐標(biāo)，相應(yīng)血清量為橫坐標(biāo)，溶血反應(yīng)對(duì)補(bǔ)體劑量依賴呈特殊的S型曲線。血清補(bǔ)體總活性測(cè)定48f血清補(bǔ)體總活性測(cè)定49

由曲線可見：在輕微溶血和接近完全溶血時(shí)，對(duì)補(bǔ)體量的變化不敏感。在30％－70％之間最陡，補(bǔ)體量的少許變化，也會(huì)造成溶血程度的較大改變。因此，實(shí)驗(yàn)常以50％溶血作為終點(diǎn)指標(biāo)，比100％溶血更為敏感，這一方法稱為補(bǔ)體50％溶血試驗(yàn)（CH50）。血清補(bǔ)體總活性測(cè)定50（二）CH50試驗(yàn)方法

1.50％溶血標(biāo)準(zhǔn)管的配制：做CH50試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)同時(shí)配制50％溶血的標(biāo)準(zhǔn)管。（2％SRBC懸液0.5ml+2.0ml蒸餾水，使其溶解，再加上2.0ml1.8％NaCl溶液校正為等滲溶液，最后加入2％SRBC溶液0.5ml，即成為50％溶血狀態(tài)。）

血清補(bǔ)體總活性測(cè)定51

2.試劑、標(biāo)本的加入與反應(yīng)對(duì)待檢血清進(jìn)行適當(dāng)稀釋，依次加入待檢血清、緩沖液、溶血素和綿羊紅細(xì)胞。置于37℃水浴30分鐘。血清補(bǔ)體總活性測(cè)定52血清補(bǔ)體總活性測(cè)定533.判定標(biāo)準(zhǔn)及計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)：溫育后將所有試管2500r/min離心5min，通過觀察比較，選擇溶血程度與標(biāo)準(zhǔn)管相近的兩管，在分光光度計(jì)上分別讀取吸光度，以溶血程度最接近標(biāo)準(zhǔn)管的那一管定為最高有效反應(yīng)管。每毫升血清總補(bǔ)體活性＝（1/血清用量）×稀釋倍數(shù)參考范圍：50-100U／ml血清補(bǔ)體總活性測(cè)定54(三)臨床意義

CH50法主要檢測(cè)的是補(bǔ)體經(jīng)典途徑的溶血活性，所反映的主要是補(bǔ)體9種成分的綜合水平。測(cè)定值過低或完全無活性，首先考慮補(bǔ)體缺陷，可分別檢測(cè)C4、C2、C3、C5等成份的血清含量。血清補(bǔ)體總活性測(cè)定55（四）方法評(píng)價(jià)方法簡(jiǎn)便、快速，但靈敏度較低，受緩沖液pH、離子強(qiáng)度、鈣鎂濃度、綿羊紅細(xì)胞數(shù)量和反應(yīng)溫度等因素影響。血清補(bǔ)體總活性測(cè)定56第三節(jié)單個(gè)補(bǔ)體成分的測(cè)定主要檢測(cè)C3、C4、C1q、B因子和C1酯酶抑制物。測(cè)定方法：溶血法（檢測(cè)單個(gè)補(bǔ)體的溶血活性）和免疫化學(xué)法（測(cè)定補(bǔ)體含量）57一、免疫溶血法（一）原理抗原與其特異性抗體（IgG、IgM型）結(jié)合后可激活補(bǔ)體的經(jīng)典途徑或其他方式激活旁路途徑，導(dǎo)致細(xì)胞溶解。組成：①指示系統(tǒng)②反應(yīng)系統(tǒng)的補(bǔ)體③待測(cè)血清的補(bǔ)體單個(gè)補(bǔ)體成分的測(cè)定58

指示系統(tǒng)經(jīng)典途徑：SRBC＋ 溶血素（兔抗或馬抗SRBC抗體）＝致敏的SRBC替代途徑：未致敏SRBC單個(gè)補(bǔ)體成分的測(cè)定59

反應(yīng)系統(tǒng)中補(bǔ)體選用先天缺乏某單一補(bǔ)體成分的動(dòng)物或人血清作為試劑，如人（缺C2），豚鼠（缺C4），小鼠（缺C5）家兔（缺C6）等；用化學(xué)試劑人為滅活正常血清中某種補(bǔ)體成分而制備的補(bǔ)體試劑，如氨或肼（豚鼠C4），酵母多糖（C3）等。單個(gè)補(bǔ)體成分的測(cè)定60（二）試驗(yàn)方法＋反應(yīng)系統(tǒng)補(bǔ)體(缺待檢成分)致敏SRBC(或未致敏SRBC)不溶血致敏SRBC(或未致敏SRBC)＋反應(yīng)系統(tǒng)補(bǔ)體(缺待檢成分)溶血

待檢血清單個(gè)補(bǔ)體成分的測(cè)定61（三）結(jié)果判定溶血程度與待測(cè)補(bǔ)體成分活性相關(guān)，以50％溶血為終點(diǎn)。

每毫升血清總補(bǔ)體活性＝（1/血清用量）×稀釋倍數(shù)單個(gè)補(bǔ)體成分的測(cè)定62（四）應(yīng)用與評(píng)價(jià)診斷補(bǔ)體某個(gè)成分缺失或其含量正常但無溶血活性的先天性補(bǔ)體缺陷。定性方法，檢測(cè)單個(gè)補(bǔ)體成分無需特殊儀器，快速，但靈敏度低，影響因素多。單個(gè)補(bǔ)體成分的測(cè)定63二、免疫化學(xué)法可分為單向免疫擴(kuò)散法、火箭免疫電泳法、透射比濁法和散射比濁法。定量方法方法簡(jiǎn)單、特異、重復(fù)性好是檢測(cè)補(bǔ)體成分的主要方法。

單個(gè)補(bǔ)體成分的測(cè)定64第四節(jié)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)

（complementfixationtext,CFT）

一、試驗(yàn)原理二、試驗(yàn)方法

三、應(yīng)用和評(píng)價(jià)

65一、試驗(yàn)原理三個(gè)系統(tǒng)：反應(yīng)系統(tǒng)：已知的抗原（或抗體）與待測(cè)的抗體（或抗原）補(bǔ)體系統(tǒng)指示系統(tǒng)：SRBC與相應(yīng)溶血素（常預(yù)先混合形成致敏紅細(xì)胞）補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)66補(bǔ)體的作用無特異性，既可與反應(yīng)體系中的抗原抗體復(fù)合物結(jié)合，也能與SRBC結(jié)合。分兩個(gè)階段：①先加入反應(yīng)系統(tǒng)使其有優(yōu)先結(jié)合補(bǔ)體的機(jī)會(huì)。②SRBC與補(bǔ)體的結(jié)合。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)67第一階段第二階段試驗(yàn)結(jié)果反應(yīng)系統(tǒng)補(bǔ)體系統(tǒng)指示系統(tǒng)溶血反應(yīng)1.抗體檢測(cè)抗原（無抗原時(shí)）抗體補(bǔ)體溶血素SRBC+-2.抗原檢測(cè)抗體（無抗體時(shí)）抗原溶血素SRBC+-3.抗原抗體反應(yīng)抗原抗體復(fù)合物溶血素SRBC-+補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)68二、試驗(yàn)方法

全量法、半量法、小量法、微量法等，其中以后兩者應(yīng)用較為廣泛。優(yōu)點(diǎn)：量少、特異性好。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)69（一）試劑的制備

1、抗原純度越高，特異性越好。粗抗原則需用正常組織作對(duì)照，以區(qū)別待檢血清中可能存在的非特異性反應(yīng)。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)702、抗原和抗體滴定方法：方陣法進(jìn)行滴定。選擇抗原與抗體二者都呈強(qiáng)陽性反應(yīng)的最高稀釋度作為抗原和抗體的效價(jià)（單位）。在正式試驗(yàn)中抗原一般采用2－4單位（1:16－1:32），抗體為4個(gè)單位（1:8）。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)71抗原和抗體效價(jià)的方陣滴定抗原抗體抗體對(duì)照1:41:81:161:321:641:1281:2561:5121:44444443201:84444432101:164444332±01:32444432±001:644444210001:1284210000001:2563100000001:512000000000抗原對(duì)照00000000補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)723、補(bǔ)體滴定一般用豚鼠補(bǔ)體。每次試驗(yàn)前均應(yīng)滴定。溫育后觀察少量補(bǔ)體能產(chǎn)生完全溶血者，確定為1個(gè)實(shí)用單位，正式試驗(yàn)中使用2個(gè)實(shí)用單位。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)73補(bǔ)體滴定管號(hào)1234561:60補(bǔ)體(ml)0.040.060.080.100.120.14緩沖液(ml)0.260.240.220.200.180.16抗原(2U/ml)0.10.10.10.10.10.137℃水浴30min1％SRBC(ml)0.20.20.20.20.20.237℃水浴30min結(jié)果不溶血不溶血微溶血微溶血全溶血全溶血補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)74（二）血清標(biāo)本的處理

采集血液標(biāo)本后及時(shí)分離血清，及時(shí)檢驗(yàn)或?qū)⒀灞４嬖冢?0℃。血清在試驗(yàn)前應(yīng)先加熱56℃30min(或60℃3min)以破壞補(bǔ)體和去除一些非特異性因素。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)75血清中如有抗補(bǔ)體成分則：

加熱提高1－2℃；－20℃凍融后離心去沉淀；以3mmol/L鹽酸處理；加入少量補(bǔ)體后再加熱滅活；以白陶土處理；通入CO2；以小白鼠肝粉處理；用含10％新鮮雞蛋清的生理鹽水稀釋補(bǔ)體。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)76（三）正式試驗(yàn)

結(jié)果判定：不溶血為陽性，溶血為陰性。

補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)77補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)操作程序反應(yīng)物(ml)待檢血清陽性對(duì)照陰性對(duì)照抗原或抗體對(duì)照管抗體對(duì)照紅細(xì)胞對(duì)照測(cè)定對(duì)照測(cè)定對(duì)照測(cè)定對(duì)照2U1U0.5U稀釋血清0.10.10.10.10.10.1－－－－抗原或抗體0.1－0.1－0.1－0.10.10.10.1－緩