附件1

ICS

X

團體標(biāo)準(zhǔn)

T/CAQIXX—20XX

茶葉及茶制品中黃曲霉毒素B1的測定

DetectionofaflatoxinB1inteaandteaproducts

征求意見稿

2022-××-××發(fā)布2022-××-××實施

中國質(zhì)量檢驗協(xié)會發(fā)布

茶葉及茶制品中黃曲霉毒素B1的測定

1范圍

本文件提供了茶葉及茶制品中黃曲霉毒素B1（以下簡稱AFTB1）的測定方法。

本文件第一法為同位素稀釋液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，第二法為高效液相色譜法，適用于

綠茶、紅茶、黃茶、黑茶、白茶、烏龍茶、再加工茶、固態(tài)速溶茶、茶多酚以及茶黃素中

AFTB1的測定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期

的引用文件，僅注日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括

所有的修改單）適用于本文件。

GB5009.22食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

第一法同位素稀釋液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

3原理

試樣中的黃曲霉毒素B1，用乙腈提取，固相萃取柱和免疫親和柱凈化，液相色譜分離，

串聯(lián)質(zhì)譜檢測，同位素內(nèi)標(biāo)法定量。

4試劑和材料

除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。

4.1試劑

4.1.1乙腈（CH3CN）：色譜純。

4.1.2甲酸（CH2O2）：色譜純。

4.1.3氯化鈉（NaCl）。

4.1.4磷酸氫二鈉（Na2HPO4）。

4.1.5磷酸二氫鉀（KH2PO4）。

4.1.6氯化鉀（KCl）。

3

4.1.7鹽酸（HCl）。

4.1.8吐溫-20,（C58H114O26）。

4.2試劑配制

4.2.185%乙腈水：85mL乙腈（4.1.1）中加入15mL水。

4.2.20.1%甲酸水：取1mL甲酸（4.1.2），加水定容至1L。

4.2.3磷酸鹽緩沖溶液（以下簡稱PBS）：稱取8.00g氯化鈉、1.20g磷酸氫二鈉、0.20

g磷酸二氫鉀、0.20g氯化鉀，用900mL水溶解，用鹽酸調(diào)節(jié)pH至7.4±0.1，加水稀釋至1000

mL。

4.2.4吐溫-20的PBS：取10mL吐溫-20，用PBS稀釋至1000mL。

4.3標(biāo)準(zhǔn)品

4.3.1AFTB1標(biāo)準(zhǔn)品（C17H12O6，CAS：1162-65-8）：純度≥98%，或經(jīng)國家認(rèn)證并授

予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

13

4.3.2同位素內(nèi)標(biāo)C17-AFTB1(C17H12O6，CAS：1217449-45-0)：純度≥98%，濃度為0.5

μg/mL。

注：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可以滿足溯源要求的商品化標(biāo)準(zhǔn)溶液。

4.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

4.4.1標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（10μg/mL）:準(zhǔn)確稱取AFTB1（4.3）1mg（精確至0.01mg），

置于100mL容量瓶，用乙腈（4.1.1）溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度為10μg/mL

的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。溶液轉(zhuǎn)移至試劑瓶中后，在-20℃下避光保存，備用。

4.4.2標(biāo)準(zhǔn)中間液（100ng/mL）：準(zhǔn)確移取AFTB1標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液1.00mL至100mL容

量瓶中，乙腈（4.1.1）定容。此溶液密封后避光-20℃下保存，有效期三個月。

13

4.4.3同位素內(nèi)標(biāo)工作液（100ng/mL）：準(zhǔn)確移取0.5μg/mLC17-AFTB12.0mL，用乙

腈定（4.1.1）容至10mL。在-20℃下避光保存，備用，有效期三個月。

4.4.4標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：準(zhǔn)確移取AFTB1（100ng/mL）標(biāo)準(zhǔn)溶液10μL、50μL、100μL、

200μL、500μL、800μL、1000μL于10mL容量瓶中，加入200μL100ng/mL的同位素內(nèi)

標(biāo)工作液，用初始流動相定容至刻度，配制標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液濃度點為：0.1ng/mL、0.5ng/mL、

1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、8.0ng/mL、10.0ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

4.5材料

4.5.1免疫親和柱：AFTB1柱容量≥200ng，回收率≥85%（驗證方法參見附錄B）。

注：對于不同批次的試劑盒在使用前需進(jìn)行質(zhì)量驗證。

4

4.5.2固相萃取柱：6mL，1000mg，適用于茶葉樣品基質(zhì)黃曲霉毒素專用型的固相萃

取柱。

4.5.3玻璃纖維濾紙：快速、高載量、液體中顆粒保留1.6μm。

4.5.4微孔濾頭：帶0.22μm微孔濾膜（所選用濾膜應(yīng)采用標(biāo)準(zhǔn)溶液檢驗確認(rèn)無吸附現(xiàn)

象，方可使用）。

4.5.5篩網(wǎng)：1mm～2mm試驗篩孔徑。

5儀器設(shè)備

5.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：帶電噴霧離子源。

5.2分析天平：感量分別為0.01mg和0.01g。

5.3渦旋混合器。

5.4高速粉碎機。

5.5氮吹儀。

5.6高速均質(zhì)器：轉(zhuǎn)速6500r/min~24000r/min。

5.7離心機：轉(zhuǎn)速≥6000r/min。

5.8pH計。

5.9固相萃取裝置。

6試驗步驟

警示：整個分析操作過程應(yīng)在指定區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。該區(qū)域應(yīng)具備相對獨立的操作臺和廢棄

物存放裝置。在實驗過程中，操作者在配制AFTB1標(biāo)準(zhǔn)溶液時應(yīng)按照接觸劇毒物的要求采

取相應(yīng)的保護(hù)措施。

6.1試樣制備

試樣用高速粉碎機將其粉碎，過篩，使其粒徑小于2mm孔徑試驗篩。

6.2試樣前處理

6.2.1提取

準(zhǔn)確稱取5.0g（精確到0.01g）樣品于50mL具塞離心管中，加入400μL同位素內(nèi)標(biāo)

工作液（4.4.3），加入20mL乙腈，渦旋混勻，高速均質(zhì)器均質(zhì)提取3min，6000r/min下

離心5min，上清液用玻璃纖維濾紙過濾，濾液待凈化。

6.2.2凈化

6.2.2.1固相萃取柱凈化

固相萃取柱（4.5.2）用5mL85%乙腈水溶液活化，取4mL濾液通過固相萃取柱中，收

5

集凈化液，再用5mL85%乙腈水分兩次洗脫，流速控制在1mL/min~3mL/min，合并凈化

液。氮吹濃縮至4mL，用吐溫-20的PBS緩沖液定容至50mL，混勻，待免疫親和柱凈化。

6.2.2.3免疫親和柱凈化

6.2.2.3.1免疫親和柱的準(zhǔn)備

將低溫下保存的免疫親和柱（4.5.1）恢復(fù)至室溫。

6.2.2.3.2試樣的凈化

待免疫親和柱內(nèi)原有液體流盡后，將上述樣液移至50mL注射器筒內(nèi)，調(diào)節(jié)下滴速度，

控制樣液以1mL/min~3mL/min的速度穩(wěn)定下滴。待樣液滴完后，往注射器筒內(nèi)加入2×10mL

水，以穩(wěn)定流速淋洗免疫親和柱。待水滴完后，用真空泵抽干親和柱。脫離真空系統(tǒng)，在免

疫親和柱下部放置10mL刻度試管，取下50mL注射器筒，加入4×0.5mL乙腈（4.1.1）洗脫

親和柱，控制流速在1mL/min~3mL/min的范圍內(nèi)下滴，再用真空泵抽干親和柱，收集全部

洗脫液至試管中，在50℃下用氮氣緩緩地將洗脫液吹至近干，加入1.0mL初始流動相，渦旋

30s溶解殘留物，0.22μm濾膜過濾，收集濾液于進(jìn)樣瓶中以備進(jìn)樣。

6.3儀器測定

6.3.1液相色譜參考條件如下：

a)色譜柱：C18柱，3.0mm×100mm，粒徑5.0μm，或性能相當(dāng)者；

b)流動相：A為乙腈（4.1.1），B為0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫（見表1）；

c)流速：0.3mL/min；

d)柱溫：40℃；

e)進(jìn)樣量：10μL。

表1流動相梯度洗脫程序

時間（min）流動相A（%）流動相B（%）

01090

4.59010

6.51090

10.01090

6.3.2質(zhì)譜參考條件

質(zhì)譜參考條件列出如下：

a)檢測方式：多離子反應(yīng)檢測（MRM）；

b)離子源控制條件：參見表2；

6

c)離子選擇參數(shù)：參見表3。

表2離子源控制條件

電離方式ESI+

毛細(xì)管電壓/kV3.5

錐孔電壓/V30

射頻透鏡1電壓/V14.9

射頻透鏡2電壓/V15.1

離子源溫度/℃150

錐孔反吹氣流量/(L/h)50

脫溶劑氣溫度/℃500

脫溶劑氣溫度/(L/h)800

電子倍增電壓/V650

表3離子選擇參數(shù)表

母離子定量離子碰撞能量定性離子碰撞能量

化合物名稱離子化方式

(m/z)(m/z)eV(m/z)eV

+

AFTB13132852224138ESI

13+

C17-AFTB13302552330135ESI

6.3.3定性測定

試樣中目標(biāo)化合物色譜峰的保留時間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保留時間相比較，變化范圍應(yīng)

在±2.5％之內(nèi)。

每種化合物的質(zhì)譜定性離子必須出現(xiàn)，至少應(yīng)包括一個母離子和兩個子離子，而且同一

檢測批次，對同一化合物，樣品中目標(biāo)化合物的兩個子離子的相對豐度比與濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)

溶液相比，其允許偏差不超過表4規(guī)定的范圍。

表4定性時相對離子豐度的最大允許偏差

7

相對離子豐度/%＞5020~5010~20≤10

允許相對偏差/%±20±25±30±50

6.3.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

在6.3.1、6.3.2的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀分析條件下，將標(biāo)準(zhǔn)系列溶液由低到高濃度進(jìn)樣

檢測，以AFTB1色譜峰與對應(yīng)內(nèi)標(biāo)色譜峰的峰面積比值-濃度作圖，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程，

其線性相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于0.99。

6.3.5試樣溶液的測定

取6.2處理得到的待測溶液進(jìn)樣，內(nèi)標(biāo)法計算待測液中目標(biāo)物質(zhì)的質(zhì)量濃度，計算樣品

中待測物的含量。待測樣液中的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，超過線性范圍則應(yīng)適當(dāng)減

少取樣量重新測定。

6.3.6空白試驗

不稱取試樣，按6的試驗步驟做空白實驗。應(yīng)確認(rèn)不含有干擾待測組分的物質(zhì)。

7試驗數(shù)據(jù)處理

試樣中AFTB1的殘留量按式（1）計算。

計算公式：

ρVV1000

X13…………………（1）

V2m1000

式中：

X—試樣中AFTB1的含量，單位為微克每千克（g/kg）；

ρ—進(jìn)樣溶液中AFTB1按照內(nèi)標(biāo)法在標(biāo)準(zhǔn)曲線中對應(yīng)的濃度，單位為納克每毫升

（ng/mL）；

V1—試樣提取液體積，單位為毫升（mL）；

V3—樣品經(jīng)凈化洗脫后的最終定容體積，單位為毫升（mL）；

1000—換算系數(shù)；

V2—用于凈化分取的樣品體積，單位為毫升（mL）；

m—試樣的稱樣量，單位為克（g）。

8

計算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算數(shù)平均值表示，保留至小數(shù)點后

兩位。

8精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20%。

9其他

當(dāng)稱取樣品5g時，AFTB1的檢出限為：0.03g/kg；AFTB1的定量限為0.1g/kg。

第二法高效液相色譜法

導(dǎo)語：下述方法的儀器檢測部分，包括三氟乙酸柱前衍生、碘或溴試劑柱后衍生、光化

學(xué)柱后衍生等衍生方法，可根據(jù)實際情況，選擇其中一種方法即可。

10原理

試樣中的黃曲霉毒素B1，用乙腈提取，固相萃取柱和免疫親和柱凈化，液相色譜分離，

柱前或柱后衍生（三氟乙酸柱前衍生、碘或溴試劑柱后衍生和光化學(xué)柱后衍生），熒光檢測

器檢測，外標(biāo)法定量。

11試劑或材料

除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。

11.1試劑

11.1.1乙腈（CH3CN）：色譜純。

11.1.2甲醇（CH3OH）：色譜純。

11.1.3甲苯（C7H8）：色譜純。

11.1.4正己烷（C6H14）：色譜純。

11.1.5三氟乙酸（CF3COOH）。

11.1.6碘衍生使用試劑：碘（I2）。

11.1.7溴衍生使用試劑：三溴化吡啶（C5H6Br3N2）。

11.1.8氯化鈉（NaCl）。

11.1.9磷酸氫二鈉（Na2HPO4）。

9

11.1.10磷酸二氫鉀（KH2PO4）。

11.1.11氯化鉀（KCl）。

11.1.12鹽酸（HCl）。

11.1.13吐溫-20，（C58H114O26）。

11.2試劑配制

11.2.10.05％碘溶液：稱取0.1ｇ碘，用20mL甲醇（11.1.2）溶解，加水定容至200mL，

用0.45μｍ的濾膜過濾，現(xiàn)配現(xiàn)用（僅碘柱后衍生法使用）。

11.2.25mg/L三溴化吡啶水溶液：稱取5mg三溴化吡啶（11.1.7）溶于1L水中，用

0.45μm的濾膜過濾，現(xiàn)配現(xiàn)用（僅溴柱后衍生法使用）。

11.2.310%甲苯-乙腈：90mL乙腈（11.1.1）中加入10mL甲苯（11.1.3）。

11.2.4磷酸鹽緩沖溶液（以下簡稱PBS）：稱取8.00g氯化鈉、1.20g磷酸氫二鈉（或2.92

g十二水磷酸氫二鈉）、0.20g磷酸二氫鉀、0.20g氯化鉀，用900mL水溶解，用鹽酸調(diào)節(jié)pH

至7.4±0.1，加水稀釋至1000mL。

11.2.5吐溫-20的PBS：取10mL吐溫-20，用PBS稀釋至1000mL。

11.3標(biāo)準(zhǔn)品

AFTB1標(biāo)準(zhǔn)品（C17H12O6，CAS：1162-65-8）：純度≥98%，或經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)

物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

注：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可以滿足溯源要求的商品化標(biāo)準(zhǔn)溶液。

11.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

11.4.1標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（10μg/mL）:準(zhǔn)確稱取AFTB1（11.3）1mg精確至（0.01mg），

置于100mL容量瓶，用乙腈（11.1.1）溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度為10.0μg/mL

的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。溶液轉(zhuǎn)移至試劑瓶中后，在-20℃下避光保存，備用。

11.4.2標(biāo)準(zhǔn)中間液（100ng/mL）：準(zhǔn)確移取AFTB1標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（11.4.1）1.00mL至

100mL容量瓶中，乙腈（11.1.1）定容。此溶液密封后避光-20℃下保存，有效期三個月。

11.4.3標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：準(zhǔn)確移取AFTB1（100ng/mL）標(biāo)準(zhǔn)溶液10μL、50μL、200μL、

500μL、1000μL、2000μL、4000μL分別于10mL容量瓶中，用初始流動相定容至刻度，

配制標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液濃度分別為：0.1ng/mL、0.5ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10ng/mL、

20.0ng/mL、40.0ng/mL。

11.5材料

11.5.1免疫親和柱：AFTB1柱容量≥200ng，回收率≥85%（驗證方法參見GB5009.22

10

附錄B）。

注：對于不同批次的免疫親和柱試在使用前需進(jìn)行質(zhì)量驗證。

11.5.2固相萃取柱：6mL，1000mg，適用于茶葉樣品基質(zhì)黃曲霉毒素專用型的固相萃

取柱。

11.5.3玻璃纖維濾紙：快速、高載量、液體中顆粒保留1.6μm。

11.5.4微孔濾頭：帶0.22μm微孔濾膜（所選用濾膜應(yīng)采用標(biāo)準(zhǔn)溶液檢驗確認(rèn)無吸附現(xiàn)

象，方可使用）。

11.5.5篩網(wǎng)：1mm～2mm試驗篩孔徑。

12儀器設(shè)備

12.1液相色譜儀：液相色譜儀（配備熒光檢測器）。

12.2溶劑柱后劑衍裝置（適用于碘或溴試劑柱后衍生法）。

12.3光化學(xué)柱后劑衍器（適用于光化學(xué)柱后衍生法）。

12.4分析天平：感量分別為0.01mg和0.01g。

12.5渦旋混合器。

12.6高速粉碎機。

12.7氮吹儀。

12.8高速均質(zhì)器：轉(zhuǎn)速6500r/min~24000r/min

12.9離心機：轉(zhuǎn)速≥6000r/min。

12.10pH計。

12.11恒溫箱。

12.12固相萃取裝置（帶真空泵）。

13試驗步驟

警示：整個分析操作過程應(yīng)在指定區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。該區(qū)域應(yīng)具備相對獨立的操作臺和廢棄

物存放裝置。在實驗過程中，操作者在配制AFTB1標(biāo)準(zhǔn)溶液時應(yīng)按照接觸劇毒物的要求采

取相應(yīng)的保護(hù)措施。

13.1試樣制備

同6.1。

13.2試樣前處理

13.2.1提取

11

準(zhǔn)確稱取5.0g（精確到0.01g）樣品于50mL具塞離心管中，加入20mL乙腈，渦旋

混勻，高速均質(zhì)器均質(zhì)提取3min，6000r/min下離心5min，上清液用玻璃纖維濾紙過濾，

濾液待凈化。

13.2.2凈化

同6.2.2。

13.3衍生及儀器測定

13.3.1三氟乙酸柱前衍生

用移液管準(zhǔn)確吸取4.0mL凈化液于10mL離心管后在50℃下用氮氣緩緩地吹至近干，

分別加入200μL正己烷和100μL三氟乙酸，渦旋30s，在40℃±1℃的恒溫箱中衍生15min，

衍生結(jié)束后，在50℃下用氮氣緩緩地將衍生液吹至近干，用初始流動相定容至1.0mL，渦

旋30s溶解殘留物，過0.22μm濾膜，收集濾液于進(jìn)樣瓶中以備進(jìn)樣。

液相色譜參考條件列出如下：

a)色譜柱：C18柱，4.6mm×150mm，粒徑5.0μm，或性能相當(dāng)者；

b)流動相：A為乙腈（11.1.1），B為水，A:B=30:70；

c)流速：1.0mL/min；

d)柱溫：40℃；

e)進(jìn)樣量：50μL；

f)激發(fā)波長360nm；發(fā)射波長440nm。

13.3.2柱后光化學(xué)衍生法

液相色譜參考條件列出如下：

a)色譜柱：C18柱，4.6mm×150mm，粒徑5.0μm，或性能相當(dāng)者；

b)流動相：A為乙腈（11.1.1），B為水，A:B=30:70；

c)流速：1.0mL/min；

d)柱溫：40℃；

e)進(jìn)樣量：50μL；

f)光化學(xué)柱后衍生器；

g)激發(fā)波長360nm；發(fā)射波長440nm。

13.3.3柱后碘或溴試劑衍生法

液相色譜參考條件列出如下：

a)色譜柱：C18柱，4.6mm×150mm，粒徑5.0μm，或性能相當(dāng)者；

12

b)流動相：A為乙腈（11.1.1），B為水，A:B=30:70；

c)流速：1.0mL/min；

d)柱溫：40℃；

e)進(jìn)樣量：50μL；

f)柱后衍生化系統(tǒng)；

g)衍生溶液：0.05％碘溶液（碘試劑柱后衍生法）或5mg/L三溴化吡啶水溶液（溴試

劑柱后衍生法）；

h)衍生溶液流速：0.2mL/min；

i)衍生反應(yīng)管溫度：70℃；

j)激發(fā)波長360nm；發(fā)射波長440nm。

13.4標(biāo)準(zhǔn)溶液測定

將標(biāo)準(zhǔn)工作液（11.4.3）進(jìn)樣測定。

13.5試樣溶液的測定

將待測試樣凈化液溶液進(jìn)樣測定。

13.6空白試驗

不稱取試樣，按13的試驗步驟做空白實驗。應(yīng)確認(rèn)不含有干擾待測組分的物質(zhì)。

14試驗數(shù)據(jù)處理

試樣中AFTB1的殘留量按式（2）計算。

計算公式：

cV1000

X…………………（2）

m1000

式中：

X—試樣中AFTB1的含量，單位為微克每千克（g/kg）；

c—進(jìn)樣溶液中AFTB1的濃度，按照標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度乘于進(jìn)樣溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積比

計算，或儀器軟件自動計算，單位為納克每毫升（ng/mL）；

V—試樣提取液體積，單位為毫升（mL）；

13

m—試樣的稱樣量，單位為克（g）。

計算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算數(shù)平均值表示，保留至小數(shù)點后

兩位。

15精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20%。

16其他

當(dāng)稱取樣品5g時，AFTB1的檢出限為0.03μg/kg，定量限為0.1μg/kg。

14

附錄A（資料性附錄）

串聯(lián)質(zhì)譜法圖譜

A.1黃曲霉毒素B1離子掃描圖見圖A.1。

圖A.1黃曲霉毒素B1離子掃描圖

A.2黃曲霉毒素B1液相串聯(lián)質(zhì)譜圖見圖A.2。

圖A.2黃曲霉毒素B1液相串聯(lián)質(zhì)譜圖（1.0ng/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液）

15

附錄B（資料性附錄）

液相色譜圖

B.1黃曲霉毒素B1液相色譜圖

B.1黃曲霉毒素B1TFA柱前衍生液相色譜圖見圖B.1。

圖B.2黃曲霉毒素B1TFA柱前衍生液相色譜圖（0.5ng/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液）

B.2黃曲霉毒素B1柱后光化學(xué)衍生液相色譜圖見圖B.2。

圖B.2黃曲霉毒素B1柱后光化學(xué)衍生液相色譜圖（1ng/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液）

16

B.3黃曲霉毒素B1柱后碘衍生液相色譜圖見圖B.3。

圖B.3黃曲霉毒素B1柱后碘衍生液相色譜圖（1ng/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液）

B.4黃曲霉毒素B1柱后溴衍生液相色譜圖見圖B.4。

圖B.4黃曲霉毒素B1柱后溴衍生液相色譜圖（1ng/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液）

17

B.5黃曲霉毒素B1柱后電化學(xué)衍生液相色譜圖見圖B.5。

圖B.5黃曲霉毒素B1柱后電化學(xué)衍生法液相色譜圖（1ng/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液）

18

前言

本文件參照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》

給出的規(guī)則起草。

請注意本文件的某些內(nèi)容有可能涉及專利，本文件的發(fā)布機構(gòu)不應(yīng)承擔(dān)識別這些專利的

責(zé)任。

本文件由云南農(nóng)業(yè)大學(xué)提出，由中國質(zhì)量檢驗協(xié)會歸口。

本文件主要起草單位：云南農(nóng)業(yè)大學(xué)、吉林省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗院、云南省茶葉流通協(xié)

會、湖南省茶葉流通協(xié)會、四川省茶葉流通協(xié)會、勐臘易武福元昌茶業(yè)有限公司、昆明七彩

云南慶灃祥茶葉股份有限公司。

本文件主要起草人：

本文件為首次發(fā)布。

2

茶葉及茶制品中黃曲霉毒素B1的測定

1范圍

本文件提供了茶葉及茶制品中黃曲霉毒素B1（以下簡稱AFTB1）的測定方法。

本文件第一法為同位素稀釋液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，第二法為高效液相色譜法，適用于

綠茶、紅茶、黃茶、黑茶、白茶、烏龍茶、再加工茶、固態(tài)速溶茶、茶多酚以及茶黃素中

AFTB1的測定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期

的引用文件，僅注日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括

所有的修改單）適用于本文件。

GB5009.22食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

第一法同位素稀釋液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

3原理

試樣中的黃曲霉毒素B1，用乙腈提取，固相萃取柱和免疫親和柱凈化，液相色譜分離，

串聯(lián)質(zhì)譜檢測，同位素內(nèi)標(biāo)法定量。

4試劑和材料

除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。

4.1試劑

4.1.1乙腈（CH3CN）：色譜純。

4.1.2甲酸（CH2O2）：色譜純。

4.1.3氯化鈉（NaCl）。

4.1.4磷酸氫二鈉（Na2HPO4）。

4.1.5磷酸二氫鉀（KH2PO4）。

4.1.6氯化鉀（KCl）。

3

4.1.7鹽酸（HCl）。

4.1.8吐溫-20,（C58H114O26）。

4.2試劑配制

4.2.185%乙腈水：85mL乙腈（4.1.1）中加入15mL水。

4.2.20.1%甲酸水：取1mL甲酸（4.1.2），加水定容至1L。

4.2.3磷酸鹽緩沖溶液（以下簡稱PBS）：稱取8.00g氯化鈉、1.20g磷酸氫二鈉、0.20

g磷酸二氫鉀、0.20g氯化鉀，用900mL水溶解，用鹽酸調(diào)節(jié)pH至7.4±0.1，加水稀釋至1000

mL。

4.2.4吐溫-20的PBS：取10mL吐溫-20，用PBS稀釋至1000mL。

4.3標(biāo)準(zhǔn)品

4.3.1AFTB1標(biāo)準(zhǔn)品（C17H12O6，CAS：1162-65-8）：純度≥98%，或經(jīng)國家認(rèn)證并授

予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

13

4.3.2同位素內(nèi)標(biāo)C17-AFTB1(C17H12O6，CAS：1217449-45-0)：純度≥98%，濃度為0.5

μg/mL。

注：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可以滿足溯源要求的商品化標(biāo)準(zhǔn)溶液。

4.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

4.4.1標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（10μg/mL）:準(zhǔn)確稱取AFTB1（4.3）1mg（精確至0.01mg），

置于100mL容量瓶，用乙腈（4.1.1）溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度為10μg/mL

的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。溶液轉(zhuǎn)移至試劑瓶中后，在-20℃下避光保存，備用。