2024-9-10實(shí)施2024-9-10實(shí)施I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件由新疆維吾爾自治區(qū)畜牧獸醫(yī)局提出、歸口并組織實(shí)施。本文件起草單位：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)、新疆大學(xué)、新疆旺源生物科技集團(tuán)、阿勒泰地區(qū)畜牧工作站、新疆維吾爾自治區(qū)動物疾病預(yù)防控制中心。本文件主要起草人：蘇戰(zhàn)強(qiáng)、楊潔、佟盼盼、馬萬鵬、陳鋼糧、張毅、姚懷兵、毋狀元、劉英玉、李斌、史慧君、劉璐瑤、王振超、王玉琢、于維浩、阿依江·卡那提拜克、瑪依拉·艾尼瓦。本文件實(shí)施應(yīng)用中的疑問，請咨詢新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)。對本文件的修改意見建議，請反饋至新疆維吾爾自治區(qū)畜牧獸醫(yī)局(烏魯木齊市新華南路408號)、新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)(烏魯木齊市農(nóng)大東路311號)、新疆維吾爾自治區(qū)市場監(jiān)督管理局(烏魯木齊市新華南路167號)。新疆維吾爾自治區(qū)畜牧獸醫(yī)局聯(lián)系電話傳真郵編：830049新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)聯(lián)系電話傳真郵編：830052新疆維吾爾自治區(qū)市場監(jiān)督管理局聯(lián)系電話傳真郵編：83000411范圍本文件規(guī)定了雙峰駝幼駝大腸桿菌性腹瀉的臨床癥狀、診斷、防治的要求。本文件適用于從事雙峰駝幼駝的飼養(yǎng)、經(jīng)營，以及從事動物疾病防治活動的單位和個人對雙峰駝幼駝大腸桿菌性腹瀉進(jìn)行診斷與防治。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范動物防疫條件審查辦法農(nóng)業(yè)部令2022年第8號病死畜禽和病害畜禽產(chǎn)品無害化處理管理辦法農(nóng)業(yè)部令2022年第3號中華人民共和國動物防疫法中華人民共和國獸藥典3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。雙峰駝幼駝大腸桿菌性腹瀉bactriancamelyoungcamelcoliformdiarrhea是由大腸桿菌引起1歲以內(nèi)的雙峰駝幼駝以排便次數(shù)增加、排糞量增加、糞質(zhì)改變(稀薄、含血液、黏膜或膿液)、脫水、消瘦為臨床特征的一種急性傳染病。4臨床癥狀4.1發(fā)病初期發(fā)病幼駝的體溫最高可升高到41.6℃,呼吸及脈搏次數(shù)增加。病駝腹瀉次數(shù)增加，量增加，糞便有稀便、水樣便、黏液便、血便等，并有惡臭；病駝被毛雜亂沒有光澤，精神萎靡，常常臥地，腹腔有一定程度的臌脹；腸蠕動音亢進(jìn)，且次數(shù)增多，食欲減退。注：正常幼駝的體溫、呼吸、脈搏，分別為36.40℃~38.20℃、8次/分鐘～12次/分鐘、32次/分鐘～52次/分鐘。4.2發(fā)病中期病駝體溫、呼吸、脈搏均高于正常值。病駝脫水，個別嚴(yán)重的臥地不起，無糞便，腸音消失，食欲廢絕，四肢冰涼。24.3發(fā)病后期病駝精神倦怠，體溫下降到34.6℃,臥地不起，消瘦，駝峰塌陷，肚腹卷縮，糞便黑紫或無糞便，反芻停止，嚴(yán)重脫水，電解質(zhì)紊亂，甚至死亡。5.1臨床診斷5.1.1針對病駝的癥狀進(jìn)行診斷5.1.1.1病駝排出大量稀便，肛門、尾部及后肢被稀糞污染，精神萎靡，腸音增強(qiáng)。5.1.1.2病駝腹痛，體質(zhì)虛弱，臥地不起，發(fā)生痙攣時無法站立。5.1.2鑒別診斷5.1.2.1沙門氏菌性腹瀉：秋季高發(fā)，以1歲內(nèi)幼駝為主，發(fā)病幼駝精神沉郁，行走無力、反芻減弱，食欲降低，飲欲增加，尿少，體溫升高至41.5℃,呼吸增加，眼球下陷；排出黃色或灰黃色帶難聞氣味的稀糞，大腸桿菌性腹瀉幼駝臥地不起，食欲廢絕；沙門氏菌性腹瀉病死幼駝剖檢時見出血性胃腸炎，肝臟邊緣有壞死灶，胃腸道空虛，內(nèi)容物稀薄，腸黏膜充血，腸系膜淋巴結(jié)腫大及出血，脾充血，腎皮質(zhì)部與心內(nèi)外膜有小出血點(diǎn)，大腸桿菌性腹瀉幼駝腸內(nèi)容物為黑色，脾萎縮，心肌纖維壞死。5.1.2.2病毒性腹瀉：春秋季高發(fā)，以2歲內(nèi)幼駝為主，相比于大腸桿菌性腹瀉，急性型病毒性腹瀉患駝表現(xiàn)為突然發(fā)病，淋巴結(jié)腫大，口腔黏膜潰爛；慢性型病毒性表現(xiàn)為間歇性腹瀉，淋巴結(jié)無腫脹；剖檢時肺部出現(xiàn)充血、淤血。5.2實(shí)驗(yàn)室診斷5.2.1雙峰駝幼駝大腸桿菌性腹瀉糞樣的實(shí)驗(yàn)室診斷方法按照附錄A的要求執(zhí)行。5.2.2血液學(xué)變化：大腸桿菌性腹瀉病駝血清生化指標(biāo)堿性磷酸酶(ALP)含量升高、白蛋白(ALB)、白/球比值(A/G)、血糖(GLU)等降低，血常規(guī)指標(biāo)血紅蛋白(HGB)、血細(xì)胞壓積(HCT)、白細(xì)胞總數(shù)(WBC)等升高。腹瀉幼駝血生化和血常規(guī)檢測及正常雙峰駝血生化和血常規(guī)指標(biāo)按照附錄B執(zhí)行。5.3病理變化5.3.1死亡幼駝腹腔內(nèi)有大量淡黃色漿液性滲出液。小腸內(nèi)充滿滲出液和大量氣體，腸黏膜充血，點(diǎn)狀出血和水腫，腸壁變薄。大腸內(nèi)容物呈黑色，惡臭，腸系膜淋巴腫大，切面呈黃白色、出血。瘤胃、網(wǎng)胃、皺胃黏膜充血。5.3.2肝腫大、淤血，邊緣鈍圓，有壞死狀結(jié)節(jié)，質(zhì)脆、呈砂礫肝，與腹腔黏連；脾失去光澤并萎縮，呈灰白色；腎腫大，包膜容易剝離，實(shí)質(zhì)變脆壞死，呈紅褐色；肺充血，毛細(xì)血管淤血，有塊狀壞死(結(jié)節(jié));心肌纖維腫脹、壞死，心包膜內(nèi)有大量淡黃色的滲出，容易剝離，有點(diǎn)狀壞死。6.1預(yù)防6.1.1建設(shè)管理雙峰駝圈舍建設(shè)應(yīng)參見《動物防疫條件審查辦法》的要求。系統(tǒng)化養(yǎng)殖場防疫的軟硬件建設(shè)參見《中3華人民共和國動物防疫法》規(guī)定。6.1.2制度管理場區(qū)應(yīng)建立健全崗位責(zé)任制、生產(chǎn)管理、投入品保管和使用、免疫、防疫、衛(wèi)生消毒、疫病診療記錄檔案等制度。嚴(yán)格控制進(jìn)入場區(qū)的外來人員，發(fā)生疫情時，陌生人員和車輛不應(yīng)在養(yǎng)殖區(qū)內(nèi)流動。6.1.3飼養(yǎng)管理6.1.3.1堅(jiān)持自繁自養(yǎng)，圈舍應(yīng)每天打掃，清理排泄物、草料、塑料等廢物，不混養(yǎng)其他動物，及時消毒。控制駱駝種群密度，提高種群抗病力。6.1.3.2對病死的雙峰駝用深埋法進(jìn)行處理。依據(jù)《病死畜禽和病害畜禽產(chǎn)品無害化處理管理辦法》處理。6.1.4消毒管理6.1.4.1執(zhí)行嚴(yán)格的門衛(wèi)消毒制度，養(yǎng)殖場大門入口處要設(shè)立消毒池，1-2周對養(yǎng)殖區(qū)進(jìn)行1次臨時消毒，應(yīng)每月安排1次對養(yǎng)殖區(qū)的定期消毒。6.1.4.2消毒時宜使用廣譜消毒劑或根據(jù)病原選擇作用最強(qiáng)的消毒劑。6.1.4.3消毒劑使用時要防止腐蝕或中毒問題的發(fā)生。6.1.4.4應(yīng)注意消毒劑的質(zhì)量、有效期、使用方法，并注意觀察消毒效果。6.1.4.5不應(yīng)將兩種以上的消毒劑混合使用或同時消毒同一物品或場地。6.1.4.6應(yīng)多備幾種消毒劑，以便交替單獨(dú)使用，如復(fù)合酚、二氯異氰尿酸鈉、癸甲溴銨或過氧乙酸等。不應(yīng)長期使用一種消毒劑，以免病原產(chǎn)生耐藥性，影響消毒效果。6.1.5懷孕母駝管理6.1.5.1產(chǎn)房管理建設(shè)保暖防風(fēng)的產(chǎn)房，定期消毒被污染的環(huán)境和用具，并確保產(chǎn)房清潔、干燥。6.1.5.2產(chǎn)后護(hù)理母駝分娩后用0.5%的洗必泰溶液或1%的聚維酮碘溶液擦拭乳房、陰部等部位。6.1.6幼駝管理6.1.6.1喂足初乳，初乳中含有豐富的免疫球蛋白，及早飼喂初乳，能賦予初生幼駝抵抗多種傳染病的能力。6.1.6.2制定對應(yīng)的飼養(yǎng)計(jì)劃，根據(jù)季節(jié)的變化飼喂合適的飼料并進(jìn)行適當(dāng)?shù)难a(bǔ)飼，在圈舍中懸掛微量元素舔磚，提高幼駝抵抗力。6.1.6.3飼喂苜蓿、麥稈、玉米秸稈等牧草時應(yīng)該長草短喂，將苜蓿、麥稈、玉米秸稈等牧草粉碎后飼喂，便于幼駝咀嚼和消化吸收，飼喂時清理飼料中的塑料、被毛、鐵絲等雜物，飼喂青儲飼料時要適量并添加精料。6.1.6.4幼駝出生后防止其受冷，為幼駝縫制適合的衣服進(jìn)行保暖，飼養(yǎng)在防風(fēng)的圈舍中，提高幼駝的免疫力，并防止各種應(yīng)激因素導(dǎo)致幼駝發(fā)生腹瀉；平時以預(yù)防為主，當(dāng)幼駝發(fā)生腹瀉時，應(yīng)早發(fā)現(xiàn)、早報(bào)告、早治療。6.2.1治療原則4黃芪多糖注射液5mL,在頸部皮下分別注射以消炎止瀉。方為氯化鈉3.5g,氯化鉀1.5g,碳酸氫鈉(小蘇打)2.5g,葡萄糖20g,水(涼開水或供飲用的純凈水)1L。1次/天，連用3d為1個療程。動物脫水補(bǔ)液過程中，排尿是脫水得以糾正的重要臨床表現(xiàn)。6.2.2.2.1發(fā)病初期的治療：硫酸慶大霉素注射液肌內(nèi)注射，劑量為2mg/kg,2次/天，連用3d為20mg/kg,肌內(nèi)注射，2次/天，同時注射5%的葡萄糖500mL、0.9%的氯化鈉500mL,5%的維生素C注射液20mL,1次/天，連用3d為1個療程。5(規(guī)范性)雙峰駝幼駝大腸桿菌性腹瀉糞樣的實(shí)驗(yàn)室檢測方法A.1主要耗材和試劑生理鹽水，營養(yǎng)肉湯，MH瓊脂，麥康凱瓊脂，0抗原單價(jià)血清，革蘭氏染色液，細(xì)菌微量生化反應(yīng)A.2樣品的采集腹瀉流行或者爆發(fā)時，依據(jù)病畜的數(shù)量或分布范圍采集腹瀉糞樣，進(jìn)行細(xì)菌的分離鑒定，按照NY/T541動物疫病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)采樣方法采集。A.3病原菌分離鑒定采集的糞便放入2mL無菌生理鹽水中浸泡5min,取0.2mL含有病原的生理鹽水接種在5mL營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24h。用接種環(huán)挑取渾濁菌液，接種在麥康凱瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)24h～48h,用接種環(huán)挑取表面光滑濕潤、邊緣整齊稍凸起、直徑2mm～3mm的紅色圓形疑似菌落進(jìn)行涂片，革蘭氏染色鏡檢觀察時，菌株呈現(xiàn)革蘭氏染色陰性、中小型直桿菌、兩短鈍圓、散在或成對排列的桿菌。A.4生化實(shí)驗(yàn)將培養(yǎng)好的菌液加入細(xì)菌微量生化反應(yīng)管，37℃恒溫培養(yǎng)24h,以說明書為標(biāo)準(zhǔn)同時參考《一般細(xì)菌的常用鑒定手冊》和《伯杰細(xì)菌鑒定手冊》對菌株進(jìn)行鑒定，觀察結(jié)果。A.5耐藥性實(shí)驗(yàn)將培養(yǎng)的菌液吸取400μL均勻涂布在MH平板上，貼上頭孢呋辛、頭孢曲松、頭孢他啶、頭孢噻吩、頭孢噻肟、頭孢吡肟、氨曲南、氨芐西林、青霉素G、苯唑西林、哌拉西林、慶大霉素、卡那霉素、阿米卡星、鏈霉素、妥布霉素、大觀霉素、紅霉素、麥迪霉素、克拉霉素、克林霉素、氯霉素、四環(huán)素、米諾環(huán)素、多粘菌素B、復(fù)方新諾明、諾氟沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、左氟沙星、呋喃妥因等藥敏片檢測耐藥性，為治療用藥提供參考。A.6PCR鑒定水煮法提取麥康凱瓊脂平板培養(yǎng)的菌落DNA作為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反應(yīng)體系如下：2×PCRMix10μL,phoA-F/R各1μL,菌液模板2μL,條件如下：95℃5min;95℃15s,50℃20s,72℃40s,35個循環(huán)；72℃10min。phoA-F/R為引物(見表A.1)進(jìn)行PCR鑒定。表A.1phoA-F/R引物序列及片段大小引物名稱引物序列(5′→3′)目的基因6A.7結(jié)果判定PCR擴(kuò)增結(jié)束后取10μLPCR產(chǎn)物加入10g/L瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳，電泳條帶大小為761bp,則判定為陽性，無特異性條帶或條帶大小不在761bp左右，則判定為陰性。A.8血清型鑒定通過分離培養(yǎng)、染色鏡檢、生化實(shí)驗(yàn)后將初步確定的大腸埃希菌接種于普通營養(yǎng)瓊脂斜面進(jìn)行純培養(yǎng)，用5g/L的石炭酸生理鹽水洗滌培養(yǎng)的菌苔，制成菌懸液，并在121℃的高壓環(huán)境處理2h,待菌液冷卻后，挑取一鉑耳環(huán)菌液與已稀釋5倍的大腸埃希菌0抗原單價(jià)血清在玻璃板上混勻，同時菌懸液與生理鹽水混合物作對照，觀察有無自凝集現(xiàn)象，若30s內(nèi)出現(xiàn)明顯凝集者為陽性。7(規(guī)范性)范圍總蛋白TP/(g/dL)白蛋白ALB/(g/dL)球蛋白GLOB/(g/L)谷草轉(zhuǎn)氨酶AST/(U/L)堿性磷酸酶ALP/(U/L)谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT/(U/L)白/球比值A(chǔ)/G血糖GLU/(mm