ICS67.040CCSC1499CBPIAFreeze-driedpowderofanimalblood-derivedsuperoxidedismutaseⅠT/CBPIA0010—2025 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 14技術(shù)要求 25檢驗規(guī)則 3 3附錄A（規(guī)范性）超氧化物歧化酶(SOD)活力的測定方法 5ⅡT/CBPIA0010—2025本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由中國生化制藥工業(yè)協(xié)會提出并歸口。本文件起草單位：中國生化制藥工業(yè)協(xié)會、華東理工大學(xué)、上海市質(zhì)量監(jiān)督檢驗技術(shù)研究院、上海舒澤生物科技研究所、上海綠梅生物科技有限公司、甘肅養(yǎng)泰和生物科技有限公司、寧波邁康爾生物科技有限公司、武漢岐生堂天然生物制品有限公司、遼寧未來生物科技有限公司、河南壽酒集團(tuán)有限公司、北京和頤林生物科技有限公司、上海圣岳生物科技有限公司、上海和森生物科技股份有限公司、陜西科聚美康生物科技有限公司、河北鈺健生物科技有限公司、深圳市活力悠生物科技有限公司。本文件主要起草人：袁勤生、裘偉民、周家春、萬一、樓秀余、莫宏春、韓斌、魏利夫、范立強(qiáng)、彭亞鋒、顧宇翔、張薇、程榆茗、陳石良、韓效亮、韓彬、邱金家、高茹云、周羽。ⅢT/CBPIA0010—2025超氧化物歧化酶是生物和食品領(lǐng)域研究常用的原料之一，國內(nèi)超氧化物歧化酶的生產(chǎn)技術(shù)已經(jīng)成熟。超氧化物歧化酶的來源廣泛，質(zhì)量指標(biāo)和適用的檢測方法各異。超氧化物歧化酶的活性通過檢測酶催化產(chǎn)生的還原性物質(zhì)進(jìn)行表征。雖然《超氧化物歧化酶活性檢測方法》（GB/T41906-2022）、《保健食品中超氧化物歧化酶（SOD）活性的測定》（GB/T5009.171-2003）已公告，但這些標(biāo)準(zhǔn)對超氧化物歧化酶活力的定義不夠精準(zhǔn)。本文件提出動物血來源超氧化物歧化酶質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、超氧化物歧化酶活力的定義、超氧化物歧化酶活力測定方法。1T/CBPIA0010—2025動物血來源超氧化物歧化酶凍干粉本文件界定了動物血來源超氧化物歧化酶（SOD）凍干粉的技術(shù)要求、檢驗規(guī)則、標(biāo)志、包裝、運輸、貯存和保質(zhì)期。本標(biāo)準(zhǔn)適用于以動物血為原料，經(jīng)溶血、沉淀、壓濾、超濾、熱處理、柱層析、滅菌、冷凍干燥等工藝生產(chǎn)的超氧化物歧化酶（SOD）凍干粉，可作為保健食品、化妝品、醫(yī)用藥品的原料。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件，不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。包裝儲運圖示標(biāo)志●GB4789.2食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)測定●GB4789.3食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗大腸菌群計數(shù)●GB4789.4食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗沙門氏菌檢驗●GB4789.10食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗金黃色葡萄球菌檢驗●GB4789.15食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗霉菌和酵母計數(shù)●GB5009.3食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中水分的測定●GB5009.4食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中灰分的測定●GB5009.5食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中蛋白質(zhì)的測定食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中總砷及無機(jī)砷的測定食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中鉛的測定●GB5009.17食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中總汞及有機(jī)汞的測定●GB7718食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)預(yù)包裝食品標(biāo)簽通則●DB35/T1148-2011福建省地方標(biāo)準(zhǔn)原料用超氧化物歧化酶3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.12T/CBPIA0010—2025超氧化物歧化酶（SOD）能夠催化超氧陰離子自由基發(fā)生歧化反應(yīng)，把超氧陰離子自由基轉(zhuǎn)化為過氧化氫的金屬酶。反應(yīng)式如下：2O2-+2H+→H2O2+O23.2超氧化物歧化酶（SOD）活力超氧化物歧化酶（SOD）活力定義：25℃,pH8.20條件下，1mL反應(yīng)液中每1min抑制連苯三酚自氧化速率50%所需的SOD量為一個活力單位。4一般要求4.1感官要求感官要求應(yīng)符合表1的規(guī)定。表1感官要求項目要求檢驗方法色澤淡藍(lán)綠色取適量試樣置于清潔、干燥的白瓷盤中，在自然光線下觀察其色澤和狀態(tài)，并嗅其氣味狀態(tài)粉末氣味具本品特有的氣味4.2理化指標(biāo)理化指標(biāo)應(yīng)符合表2的規(guī)定。表2理化指標(biāo)項目指標(biāo)檢驗方法一級二級三級SOD活力，U/mg≥800050003000蛋白質(zhì)，w/%≥GB5009.5第一法水分，w/%≤3.0GB5009.3第一法總灰分，w/%≤3.0GB5009.4第一法鉛（Pb）/（mg/kg）≤GB5009.12總砷（以As計）/（mg/kg）≤GB5009.11總汞（Hg）/（mg/kg）≤0.1GB5009.174.3微生物限量微生物限量應(yīng)符合表3的規(guī)定。3T/CBPIA0010—2025表3微生物限量項目采樣方案a及限量（若非指定，均以CFU/g表示）檢驗方法ncmM菌落總數(shù)5210000GB4789.2大腸菌群52GB4789.3平板計數(shù)法金黃色葡萄球菌500/25g-GB4789.10沙門氏菌500/25g-GB4789.4霉菌≤25GB4789.15a樣品的分析及處理按GB4789.1執(zhí)行。5檢驗規(guī)則5.1出廠檢驗每批次產(chǎn)品須經(jīng)企業(yè)質(zhì)量檢驗部門檢驗合格，并附有產(chǎn)品合格證明后方可出廠。出廠檢驗項目包括：感官指標(biāo)、酶活力、蛋白質(zhì)、水分、菌落總數(shù)、大腸菌群。同一原料、同一班次生產(chǎn)的產(chǎn)品為一批次。5.2型式檢驗產(chǎn)品正常生產(chǎn)時，每半年應(yīng)進(jìn)行一次型式檢驗。型式檢驗項目為本文件要求的全部項目。型式檢驗的樣品在出廠檢驗合格產(chǎn)品中抽取。有下列情形之一時，也應(yīng)進(jìn)行型式檢驗：a)新產(chǎn)品正式投產(chǎn)時；b)原料、工藝發(fā)生重大變化時；c)停產(chǎn)三個月，恢復(fù)生產(chǎn)時；d)出廠檢驗結(jié)果與上次型式檢驗結(jié)果有較大差異時；e)國家質(zhì)量監(jiān)督管理部門提出型式檢驗要求時。5.3判定規(guī)則所檢項目全部合格，判定該批產(chǎn)品合格或型式檢驗通過；產(chǎn)品所檢項目有一項不合格，允許在同批產(chǎn)品中加倍抽樣，對不合格項進(jìn)行復(fù)驗，若仍不合格，即判定該批產(chǎn)品為不合格產(chǎn)品或型式檢驗不予通過。微生物指標(biāo)不得復(fù)檢。6標(biāo)志、包裝、運輸、貯存和保質(zhì)期6.1標(biāo)志4T/CBPIA0010—2025產(chǎn)品內(nèi)外包裝的標(biāo)志應(yīng)符合GB7718食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)預(yù)包裝食品標(biāo)簽通則的規(guī)定。6.2包裝產(chǎn)品應(yīng)在無菌條件下用鋁箔袋密封包裝，內(nèi)襯材料應(yīng)符合食品衛(wèi)生要求。6.3運輸運輸工具必須清潔、衛(wèi)生。運輸過程中不得曝曬、雨淋、受潮。不得與有毒、有害、有腐蝕、有異味的物品混裝運輸。6.4貯存產(chǎn)品應(yīng)貯存于常溫、干燥、衛(wèi)生、通風(fēng)、避光的倉庫中。嚴(yán)禁與有毒、有害、有腐蝕、易揮發(fā)或有異味的物品同庫貯存。嚴(yán)禁露天堆放、日曬、雨淋或靠近熱源。6.5保質(zhì)期在符合本文件貯存條件下存放時，產(chǎn)品保質(zhì)期為24個月。5T/CBPIA0010—2025（規(guī)范性）超氧化物歧化酶(SOD)活力的測定方法A.1一般規(guī)定本質(zhì)量規(guī)格要求除另有規(guī)定外，所用試劑的純度應(yīng)在分析純以上，所用標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液、雜質(zhì)測定用標(biāo)準(zhǔn)溶液、制劑及制品，應(yīng)按GB/T601、GB/T602、GB/T603的規(guī)定制備，試驗用水應(yīng)符合GB/T6682中三級水的規(guī)定。試驗中所用溶液在未注明用何種溶劑配制時，均指水溶液。A.2超氧化物歧化酶(SOD)活力的測定A.2.1測定原理A.2.1測定原理在堿性條件下，連苯三酚自氧化反應(yīng)體系中的連苯三酚能迅速氧化釋放出超氧陰離子，產(chǎn)生有色的中間產(chǎn)物，從而使吸光度增加，此過程中吸光度值與反應(yīng)時間可呈良好的線性關(guān)系。在連苯三酚自氧化反應(yīng)體系中加入SOD后，因SOD催化超氧陰離子反應(yīng)為過氧化氫，有色中間產(chǎn)物的生成受阻，連苯三酚自氧化的速率降低，導(dǎo)致吸光度下降。吸光度下降值與SOD活性呈線性相關(guān)。A.2.2試劑與材料A.2.2.1鹽酸（分析純）A.2.2.2三羥甲基氨基甲烷(Tris)（分析純）A.2.2.3乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-2Na分析純）A.2.2.4連苯三酚（分析純）A.2.2.5鹽酸溶液（10mmoL/L用微量移液器（A.2.3.6）量取鹽酸（A.2.2.1）415μL，加適量GB/T6682中二級水稀釋，定容至500mL。A.2.2.6三羥甲基氨基甲烷(Tris)-鹽酸緩沖液（50mmoL/L，pH8.20內(nèi)含1mmoL/LEDTA-2Na)：稱取三羥甲基氨基甲烷（A.2.2.2）13.114g（精確到0.0001g）和EDTA-2Na（A.2.2.3）0.744g（精確到0.0001g用GB/T6682中二級水溶解，稀釋至1800mL左右，用HCl溶液（A.2.2.5）調(diào)節(jié)pH至pH8.20(用pH計校正)，用GB/T6682中二級水定容至2000mL，冷藏保存。6T/CBPIA0010—2025A.2.2.7連苯三酚溶液（50mmoL/L稱取連苯三酚（A.2.2.4）0.1576g（精確到0.0001g用HCl溶液（A.2.2.5）溶解并定容至25mL，放入棕色瓶中，遮光冷藏保存。A.2.2.8試樣溶液：稱取適量試樣，用GB/T6682中二級水配置成適量濃度（C樣）的樣液，如1mg/mL。A.2.3儀器和設(shè)備A.2.3.1紫外分光光度計A.2.3.2pH計：精度pH0.01A.2.3.3電子分析天平：感量0.0001gA.2.3.4恒溫水浴鍋A.2.3.5石英比色皿A.2.3.6微量移液器：量程1-10μL，1-1000μLA.2.4實驗步驟A.2.4.1試劑與樣品預(yù)熱：將Tris-HCl緩沖液（A.2.2.6）、50mmol/L連苯三酚溶液（A.2.2.7）和試樣液（A.2.2.8）在恒溫水浴鍋中25℃保溫20min；A.2.4.2連苯三酚自氧化速率測定在石英比色皿中加入3mLTris-HCl緩沖液（A.2.2.6放入紫外分光光度計（A.2.3.1）中，作為空白對照，調(diào)節(jié)儀器使波長λ=325nm處光吸收值為“0”。向3mLTris-HCl緩沖液（A.2.2.6）中加入10μL左右連苯三酚溶液（A.2.2.7混合均勻，轉(zhuǎn)入石英比色皿內(nèi)，4min內(nèi)每隔30s測定一次325nm波長處光吸收A值，計算每分鐘光吸光變化值(△A/min記錄為△A連/min。根據(jù)測定結(jié)果，調(diào)整連苯三酚溶液（A.2.2.7）的加入體積V連，使得自氧化率△A連/min為0.070±0.002。A.2.4.3試樣溶液（A.2.2.8）抑制連苯三酚自氧化速率測定取3mLTris-HCl緩沖液（A.2.2.6加入適量體積預(yù)熱的試樣溶液（A.2.2.8混合均勻，再加入A.2.4.2步驟所得V連體積的連苯三酚溶液（A.2.2.7）后混合均勻，混合液轉(zhuǎn)入石英比色皿中，4min內(nèi)每隔30s測定一次325nm波長處光吸收A值，計算每分鐘光吸收變化值，記錄為△A酶/min。根據(jù)測定結(jié)果，調(diào)整試樣溶液（A.2.2.8）體積V樣，使得自氧化率△A酶/min為0.035±0.001。7T/CBPIA0010—2025為減少加樣誤差，可適當(dāng)稀釋試樣溶液，使試樣溶液的加入量在5-10μL范圍內(nèi)。記錄稀釋倍數(shù)D。A.2.5