2025年pcr檢測上崗證考試題及答案一、單項選擇題（共20題，每題2分，共40分）1.以下哪項是PCR反應中TaqDNA聚合酶的最適反應溫度？A.55℃B.72℃C.95℃D.60℃答案：B2.實時熒光定量PCR（qPCR）中，Ct值的定義是：A.熒光信號達到設定閾值時的循環(huán)數(shù)B.擴增產(chǎn)物濃度達到平臺期的循環(huán)數(shù)C.引物與模板結(jié)合的最佳溫度點D.熒光信號首次檢測到的循環(huán)數(shù)答案：A3.實驗室進行PCR檢測時，樣本處理區(qū)（第二區(qū)）的主要功能是：A.配制PCR反應體系B.核酸提取與純化C.PCR擴增反應D.擴增產(chǎn)物分析答案：B4.用于檢測RNA病毒的PCR方法需首先進行：A.逆轉(zhuǎn)錄反應（RT）B.熱啟動反應C.巢式PCRD.多重PCR答案：A5.以下哪種物質(zhì)會抑制TaqDNA聚合酶活性？A.EDTA（乙二胺四乙酸）B.dNTP（脫氧核苷酸三磷酸）C.Mg2+（鎂離子）D.BSA（牛血清白蛋白）答案：A6.引物設計時，避免3’端互補的主要目的是：A.減少引物二聚體形成B.提高退火溫度C.增加擴增產(chǎn)物長度D.降低非特異性擴增答案：A7.實驗室使用UNG酶（尿嘧啶-N-糖基化酶）的主要作用是：A.降解擴增產(chǎn)物中的dUTP標記DNA，防止污染B.提高Taq酶的熱穩(wěn)定性C.增強引物與模板的結(jié)合效率D.促進逆轉(zhuǎn)錄反應的完成答案：A8.實時熒光定量PCR中，SYBRGreenI染料的檢測原理是：A.與雙鏈DNA小溝結(jié)合后發(fā)出熒光B.與特異性探針雜交后發(fā)出熒光C.與引物結(jié)合后激發(fā)熒光D.與單鏈DNA結(jié)合后淬滅熒光答案：A9.PCR擴增儀的溫度準確性校準應至少每多久進行一次？A.1個月B.3個月C.6個月D.12個月答案：C10.進行核酸提取時，若樣本為全血，常用的抗凝劑是：A.肝素B.EDTA-K2C.枸櫞酸鈉D.草酸鉀答案：B（注：肝素會抑制PCR反應，故不選）11.以下哪項是實驗室生物安全二級（BSL-2）的基本要求？A.必須設置獨立的空氣凈化系統(tǒng)B.操作時需佩戴N95口罩C.實驗室內(nèi)應配備生物安全柜D.廢棄物需經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘答案：C12.檢測結(jié)果出現(xiàn)“假陰性”的可能原因不包括：A.樣本采集量不足B.擴增儀溫度失控（退火溫度過高）C.引物與模板發(fā)生錯配D.樣本中存在大量PCR抑制物答案：C（錯配可能導致假陽性或無擴增，而非假陰性）13.多重PCR與常規(guī)PCR的主要區(qū)別是：A.使用更高濃度的Taq酶B.在同一反應體系中加入多對引物C.擴增產(chǎn)物長度更長D.需進行兩次PCR擴增答案：B14.核酸提取過程中，75%乙醇的主要作用是：A.裂解細胞釋放核酸B.沉淀核酸C.去除蛋白質(zhì)等雜質(zhì)D.洗脫純化的核酸答案：C（注：乙醇用于洗滌核酸，去除鹽離子和蛋白）15.以下哪種方法可用于驗證PCR引物的特異性？A.瓊脂糖凝膠電泳觀察單一條帶B.測定引物的Tm值C.計算引物的GC含量D.檢測引物的長度答案：A16.實驗室質(zhì)量控制中，“陰性質(zhì)控品”應選擇：A.已知陽性的樣本B.不含目標核酸的空白樣本C.低濃度陽性樣本D.高濃度陽性樣本答案：B17.PCR反應體系中，Mg2+濃度過高可能導致：A.引物二聚體減少B.非特異性擴增增加C.擴增效率降低D.產(chǎn)物量減少答案：B18.實時熒光定量PCR的標準曲線斜率反映的是：A.擴增效率B.檢測靈敏度C.線性范圍D.特異性答案：A19.進行核酸提取時，若使用磁珠法，磁珠的作用是：A.裂解細胞B.吸附核酸C.去除蛋白質(zhì)D.洗脫核酸答案：B20.實驗室發(fā)生擴增產(chǎn)物泄漏時，應立即采取的措施是：A.用75%乙醇擦拭污染區(qū)域B.用含1%次氯酸鈉的溶液覆蓋污染區(qū)域30分鐘C.開啟紫外燈照射1小時D.通風30分鐘后繼續(xù)實驗答案：B（次氯酸鈉可有效降解DNA/RNA）二、多項選擇題（共10題，每題3分，共30分。每題至少2個正確選項，錯選、漏選均不得分）1.PCR實驗室分區(qū)管理的核心目的包括：A.防止擴增產(chǎn)物污染前區(qū)B.提高檢測效率C.確保各區(qū)域功能獨立D.減少人員流動帶來的交叉污染答案：ACD2.影響PCR擴增效率的因素有：A.引物設計的特異性B.dNTP濃度C.模板的純度D.擴增儀的溫度均勻性答案：ABCD3.核酸提取質(zhì)量控制的指標包括：A.核酸濃度（OD260值）B.核酸純度（OD260/OD280比值）C.核酸完整性（電泳條帶清晰程度）D.樣本采集時間答案：ABC4.實驗室生物安全防護的基本措施包括：A.操作前進行風險評估B.穿戴實驗室專用防護服、手套、口罩C.銳器使用后直接丟棄于普通垃圾桶D.實驗結(jié)束后對臺面進行消毒答案：ABD5.實時熒光定量PCR結(jié)果判讀時，需關注的參數(shù)有：A.Ct值B.擴增曲線的形態(tài)（是否呈S型）C.陰性對照是否無擴增D.陽性對照的Ct值是否在預期范圍內(nèi)答案：ABCD6.以下哪些情況可能導致擴增曲線出現(xiàn)“平臺期提前”？A.模板濃度過高B.dNTP濃度不足C.Taq酶量過多D.擴增循環(huán)數(shù)設置過多答案：AB7.引物設計的基本原則包括：A.避免引物內(nèi)部形成二級結(jié)構(gòu)B.引物長度通常為18-25個核苷酸C.引物3’端盡量避免連續(xù)相同堿基D.引物GC含量控制在40%-60%答案：ABCD8.實驗室廢棄物處理的正確方法有：A.感染性廢物（如樣本管）需裝入黃色醫(yī)療廢物袋B.銳器（如移液器吸頭）放入專用利器盒C.廢棄的PCR產(chǎn)物直接倒入下水道D.所有廢棄物需經(jīng)高壓蒸汽滅菌后再處理答案：ABD9.以下屬于PCR質(zhì)量控制“室內(nèi)質(zhì)控”內(nèi)容的是：A.使用商品化的陰/陽性質(zhì)控品B.定期校準擴增儀C.參加室間質(zhì)量評價（EQA）D.每批次檢測均設置空白對照答案：ABD10.逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）中，常用的逆轉(zhuǎn)錄酶有：A.AMV（鳥類成髓細胞白血病病毒逆轉(zhuǎn)錄酶）B.M-MLV（莫洛尼鼠白血病病毒逆轉(zhuǎn)錄酶）C.TaqDNA聚合酶D.T4DNA連接酶答案：AB三、判斷題（共10題，每題1分，共10分。正確填“√”，錯誤填“×”）1.PCR實驗室各區(qū)域可共用移液器，但需定期消毒。（×）（注：各區(qū)域應配備專用移液器，避免交叉污染）2.核酸提取時，離心管未蓋緊可能導致氣溶膠污染。（√）3.實時熒光定量PCR中，內(nèi)參基因的作用是校正樣本上樣量差異。（√）4.擴增儀的孔間溫度差異不影響檢測結(jié)果，無需校準。（×）5.使用同一批號的試劑時，無需每次檢測都做陰陽性對照。（×）6.樣本保存時間過長（如超過72小時未提取核酸）可能導致檢測結(jié)果假陰性。（√）7.為提高檢測靈敏度，可隨意增加PCR循環(huán)數(shù)（如從40循環(huán)增加至50循環(huán)）。（×）（注：循環(huán)數(shù)過多會增加非特異性擴增風險）8.實驗室空氣消毒可使用紫外燈照射，照射時間不少于30分鐘。（√）9.核酸提取時，若樣本量不足，可將多個樣本合并提取以節(jié)省試劑。（×）10.擴增產(chǎn)物分析區(qū)（第四區(qū)）可與樣本處理區(qū)（第二區(qū)）共用，只要加強消毒即可。（×）四、簡答題（共3題，每題5分，共15分）1.簡述PCR實驗室“四區(qū)一室”的功能劃分及氣流方向要求。答案：PCR實驗室通常劃分為四個獨立工作區(qū)域：①試劑準備區(qū)（第一區(qū)）：用于配制和分裝PCR反應試劑；②樣本處理區(qū)（第二區(qū)）：用于樣本的接收、處理及核酸提?。虎蹟U增區(qū)（第三區(qū)）：用于PCR擴增反應；④產(chǎn)物分析區(qū)（第四區(qū)）：用于擴增產(chǎn)物的檢測與分析。此外需設置緩沖區(qū)（如各區(qū)域之間的過渡間）。氣流方向應遵循從清潔區(qū)到污染區(qū)，即第一區(qū)→第二區(qū)→第三區(qū)→第四區(qū)，保持負壓梯度（或單向流動），防止擴增產(chǎn)物反向污染前區(qū)。2.列舉3種常見的PCR污染類型及對應的預防措施。答案：常見污染類型及預防措施：（1）氣溶膠污染：擴增產(chǎn)物形成的微小顆粒擴散到空氣中。預防措施：操作時蓋緊離心管，使用帶濾芯的移液器吸頭，實驗后用次氯酸鈉溶液或紫外燈消毒。（2）交叉污染：樣本間相互污染。預防措施：嚴格分區(qū)操作，使用專用移液器，樣本處理時避免反復抽吸。（3）試劑污染：配制試劑時混入目標核酸。預防措施：試劑分裝時使用專用移液器，避免多次開蓋，使用UNG酶降解含dUTP的舊擴增產(chǎn)物。3.實時熒光定量PCR中，如何通過標準曲線評估檢測方法的性能？答案：通過標準曲線可評估以下性能：（1）擴增效率（E）：根據(jù)斜率計算（E=10^(-1/斜率)-1），理想范圍為90%-110%（斜率-3.1至-3.6）。（2）線性范圍：標準曲線的R2值（相關系數(shù)）應≥0.99，表明濃度與Ct值呈良好線性關系。（3）檢測靈敏度：最低檢測限（LOD）為標準曲線中能穩(wěn)定擴增的最低濃度樣本。五、案例分析題（共1題，5分）某實驗室進行新冠病毒核酸檢測時，發(fā)現(xiàn)同一批次檢測中，所有樣本的Ct值均比預期高5-8個循環(huán)，且陰性質(zhì)控品出現(xiàn)弱擴增（Ct=38）。請分析可能原因及解決措施。答案：可能原因：（1）試劑問題：引物/探針失效（如保存不當導致降解）、dNTP或Taq酶濃度不足。（2）樣本處理問題：核酸提取效率低（如裂解不充分、磁珠吸附時間不足），導致模板量減少。（3）擴增儀問題：溫度準確性下降（如退火溫度偏高