2022-12-09實(shí)施2022-12-09實(shí)施I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由新疆維吾爾自治區(qū)動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心提本文件由新疆維吾爾自治區(qū)畜牧獸醫(yī)局歸口并組織實(shí)本文件起草單位：新疆維吾爾自治區(qū)動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心。本文件主要起草人：任娟、劉亞濤、惠志華、王文、李舵、薛文、秦菊、李彥芳、符玉涓、李琴、丁劍。本文件實(shí)施應(yīng)用中的疑問(wèn)，請(qǐng)咨詢新疆維吾爾自治區(qū)動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心。對(duì)本文件的修改意見(jiàn)和建議，請(qǐng)反饋至新疆維吾爾自治區(qū)畜牧獸醫(yī)局(烏魯木齊市天山區(qū)新華南路408號(hào))、新疆維吾爾自治區(qū)動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心(新疆烏魯木齊市高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)區(qū)藍(lán)天路268號(hào))、新疆維吾爾自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局(新疆烏魯木齊市天山區(qū)新華南路167號(hào))。新疆維吾爾自治區(qū)畜牧獸醫(yī)局聯(lián)系電話傳真郵編：830004新疆維吾爾自治區(qū)動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心聯(lián)系電話傳真郵編：830011新疆維吾爾自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局聯(lián)系電話傳真郵編：1本文件規(guī)定了重大動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)樣品的采樣原則、采樣前準(zhǔn)備和樣品采集、送檢、保存與包裝。本文件適用于各級(jí)動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)及相關(guān)單位重大動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)樣品采集工作。僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T18935口蹄疫診斷技術(shù)NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范NY/T561動(dòng)物炭疽診斷技術(shù)一、二、三類動(dòng)物疫病病種名錄農(nóng)業(yè)部公告第1125號(hào)中華人民共和國(guó)動(dòng)物防疫法中華人民共和國(guó)主席病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例國(guó)務(wù)院令第424號(hào)，2018修訂版獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室生物安全技術(shù)管理規(guī)范農(nóng)業(yè)部公告第302號(hào)高致病性動(dòng)物病原微生物菌(毒)種或者樣本運(yùn)輸包裝規(guī)范農(nóng)業(yè)部公告第503號(hào)長(zhǎng)期地、連續(xù)地收集、核對(duì)、分析疾病的動(dòng)態(tài)分布和影響因素的資料，并將信息及時(shí)上報(bào)和反饋，通過(guò)一定的方法，按照特定的程序和要求，對(duì)樣品進(jìn)行收集、處理及整理的過(guò)程。取自動(dòng)物或環(huán)境，擬通過(guò)檢測(cè)反映動(dòng)物個(gè)體、群體或環(huán)境有關(guān)狀況的材料或物品。動(dòng)物傳染病、寄生蟲病。2高致病性禽流感等發(fā)病率或者死亡率高的動(dòng)物疫病突然發(fā)生，迅重威脅、危害，以及可能對(duì)公眾身體健康與生命安全造成危害的情形，包括特別重大動(dòng)物疫情?！兑?、二、三類動(dòng)物疫病病種名錄》規(guī)定的非洲豬瘟、皮膚病等二類動(dòng)物疫??；我國(guó)尚未發(fā)現(xiàn)的及我國(guó)已消滅的動(dòng)物疫病。食道-咽部分泌物4采樣原則4.1先排除炭疽后采樣根據(jù)動(dòng)物的實(shí)際情況和實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，選擇適當(dāng)?shù)牟蓸訒r(shí)機(jī)。對(duì)疫苗免疫動(dòng)物進(jìn)行抗體監(jiān)測(cè)，免疫后24.4典型采樣選取未經(jīng)藥物治療、癥狀明顯的動(dòng)物，在病變明顯的部位采樣，采樣部位不應(yīng)用消毒劑處理。3樣。每份樣品的體積應(yīng)滿足所有檢測(cè)項(xiàng)目的需要，并有剩余樣品。疑似陽(yáng)性動(dòng)物的樣本應(yīng)平行采集2份，一份送檢，一份留樣備檢。4.7減少應(yīng)激和傷密活體動(dòng)物采樣時(shí)，應(yīng)考慮動(dòng)物福利，避免過(guò)度刺激或傷害動(dòng)物。4.8生物安全防護(hù)采樣人員加強(qiáng)個(gè)人防護(hù)，使用合格的醫(yī)用防護(hù)用品(防護(hù)服、口罩、帽子、手套、鞋套等),避免病。5.1.1采樣人員經(jīng)生物安全知識(shí)培訓(xùn)，熟悉樣品采集方法，熟練掌握樣品采集操作技術(shù)。5.1.2采樣人員做好生物安全防護(hù)，需佩戴防護(hù)口罩、護(hù)目鏡、連體防護(hù)服、雙層乳膠手套、防水靴套，防止感染人畜共患病和污染環(huán)境，造成動(dòng)物疫病擴(kuò)散。5.2.1保溫箱、探杯、開(kāi)口器、采樣槍、解剖刀、剪刀、鑷子、酒精燈、酒精棉、棉簽、注射器及針頭。5.2.2樣品容器：離心管、封口袋、帶螺帽的塑料離心管，盛放同批樣品的容器類型、大小須統(tǒng)一。5.2.3試管架、鋁飯盒、無(wú)菌聚丙烯纖維頭塑料桿拭子或棉拭子、封口膜、封條、冰袋。5.2.4采樣刀剪等器具和樣品容器應(yīng)潔凈、干燥，并提前消毒。刀、剪、鑷子應(yīng)經(jīng)103kPa高壓蒸汽滅菌或者煮沸消毒30min,使用前用酒精擦拭或者進(jìn)行火焰滅菌處理。器皿(玻制、陶制等)應(yīng)經(jīng)103kPa高壓蒸汽滅菌或者160℃干烤2h滅菌。根據(jù)監(jiān)測(cè)目的和樣品的種類準(zhǔn)備保存試劑，并提前分裝好。0.01mol/L或0.04mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS,ph7.4)、30%或50%甘油磷酸鹽保存液(用于病毒檢測(cè)時(shí)，應(yīng)加入雙抗)、0-P液保存液配置4541的規(guī)定。主要重大動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)采樣部位見(jiàn)表1。高致病性禽流感/新城疫咽喉/泄殖腔拭子、氣管分泌物、肺、新鮮糞使、血清等口蹄疫高致病性豬藍(lán)耳病小反芻獸疫牛結(jié)節(jié)性皮膚病6.1.1全血樣品采集大型哺乳動(dòng)物可通過(guò)頸靜脈或尾靜脈采血。豬可通過(guò)前腔靜脈或耳靜脈采血?？赏ㄟ^(guò)翅靜脈或心臟采血?？赏ㄟ^(guò)耳靜脈、頸靜脈或心臟采血。少量采血可穿刺耳尖或者耳外側(cè)靜脈，也可劃破腳墊剪短，多量采血可通過(guò)隱靜脈采集。對(duì)采血部位的皮膚先剃毛，用1%～2%碘酊消毒后，再用75%酒精棉球由內(nèi)向外螺旋式擦拭，干燥后使用含有EDTA抗凝劑的真空采血管采集血液樣品3mL～4mL。5分離和培養(yǎng)外周血中淋巴細(xì)胞的樣本，使用含有肝素抗凝劑的真空采血管采集血液。6.1.2血清樣品采集用一次性采血器或儲(chǔ)血器采集血液樣本3mL～4mL(采血器體積的2/3),不應(yīng)暴曬，室溫下傾斜30°靜置2h～4h,待血液凝固有血清析出時(shí)，置4℃冰箱過(guò)夜；或?qū)⑹⒎叛旱娜萜鞣旁诤銣叵?37℃)中靜置4h～6h,待大部分血清析出后，無(wú)菌操作取出血清，必要時(shí)1000rpm～300離出血清于離心管中。應(yīng)避免采集過(guò)于肥胖的動(dòng)物的血液用于分離血清。血在眼結(jié)膜表面用拭子輕輕擦拭后，立即將拭子浸入滅菌的30%或50%甘油磷酸鹽保存液(也可使用等滲鹽溶液、組織培養(yǎng)液)的離心管中，將拭子尾部棄去，蓋緊管蓋。使用聚丙烯纖維頭的塑料桿(或棉簽)拭子，貼鼻孔進(jìn)入，輕輕擦拭并緩慢旋轉(zhuǎn)2圈或3圈，沾取鼻腔分泌物，立即將拭子浸入滅菌的30%或50%甘油磷酸鹽保存液(也可使用等滲鹽溶液、組織培養(yǎng)液)的離心管中，將拭子尾部棄去，蓋緊管蓋。使用聚丙烯纖維頭的塑料桿(或棉簽)拭子，插入家禽口腔至咽的后部，輕輕擦拭并緩慢旋轉(zhuǎn)2圈或3圈，沾取咽喉分泌物后取出，立即將拭子浸入滅菌的30%或50%甘油磷酸鹽保存液(也可使用等滲鹽溶液、組織培養(yǎng)液)的離心管中，將拭子尾部棄去，蓋緊管蓋。使用聚丙烯纖維頭的塑料桿(或棉簽)拭子，插入家禽口腔至咽的后部直達(dá)喉氣管處，輕輕擦拭并緩慢旋轉(zhuǎn)2圈或3圈，沾取氣管分泌物后取出，立即將拭子浸入滅菌的30%或50%甘油磷酸鹽保存液(也可使用等滲鹽溶液、組織培養(yǎng)液)的離心管中，將拭子尾部棄去，蓋緊管蓋。采集發(fā)病動(dòng)物(牛、羊或豬)未破裂的水泡皮和水泡液，樣品采集部位可用清水清洗(不應(yīng)使用酒精、碘酒等消毒劑消毒、擦拭)。用滅菌注射器吸出水泡液≥1mL,置于滅菌容器(可加雙抗)中送檢。剪取新鮮水泡皮3g～5g放入滅菌容器中，置于滅菌的30%或50%甘油磷酸鹽6采集新鮮的糞便≥10g,保存于帶螺帽的容器或滅菌塑料袋中送檢，采集腸道內(nèi)容物樣品，可將病變最明顯的胃腸部分兩端結(jié)扎，從兩端剪斷，置于滅菌的30%或50%甘油磷酸鹽保存液中送檢。6.1.5.1組織塊或50%甘油磷酸鹽保存液中送檢。滅菌牙簽挑至滅菌離心管中保存。采樣器使用前用2%氫子放回采樣管浸潤(rùn)，取出后再次涂抹采樣，重復(fù)3次以上。采集血槽、泔水等污水樣品時(shí)，用拭子直接浸入吸附污水，應(yīng)多點(diǎn)分布式采樣。6.1.6.3同一動(dòng)物的環(huán)境樣品同一動(dòng)物的環(huán)境樣品可置于同一容器中，置于滅菌的30%或50%甘油磷酸鹽保存液中送檢。6.3采樣記錄6.3.1采樣人員做好樣品信息記錄，填寫采樣登記表，確保樣品及相關(guān)信息可追溯。6.3.2采樣登記表應(yīng)準(zhǔn)確記錄采樣時(shí)間、地點(diǎn)，畜主姓名、聯(lián)系方式，樣品種類、數(shù)量、編號(hào)，采樣動(dòng)物信息(畜種、品種、年齡、性別及標(biāo)示號(hào))及免疫狀況(免疫時(shí)間、疫苗和類、疫苗生產(chǎn)廠家及批號(hào)等)。6.3.3疑似感染動(dòng)物采樣時(shí)，記錄同群動(dòng)物數(shù)量、飼養(yǎng)管理情況、發(fā)病過(guò)程、臨床癥狀、用藥情況。6.3.4采樣登記表用鋼筆或簽字筆填寫，采樣人和被采樣單位簽章，一式三份，采樣單位一份、被采7樣單位一份、隨樣一份。7.1樣品送檢應(yīng)符合《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》第2章的規(guī)定。7.2采取有效措施確保樣品安全、完整、無(wú)泄漏，嚴(yán)防發(fā)生被盜、丟失7.3樣品由專人管理，運(yùn)送人員和接收人員對(duì)樣品進(jìn)行雙簽收，核對(duì)樣品來(lái)源、種類、數(shù)量、保存方法、送檢單位和送檢人的聯(lián)系方式、送檢日期等信息。接收人員在現(xiàn)場(chǎng)對(duì)樣品進(jìn)行編號(hào)、登記。7.4疑似陽(yáng)性樣品送至省級(jí)動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)附采樣登記表及相關(guān)情況說(shuō)明。8樣品保存與包裝樣品采集后應(yīng)盡快送往實(shí)驗(yàn)室，24h內(nèi)能檢測(cè)的樣品可置于4℃冷藏保存；24h內(nèi)無(wú)法檢測(cè)的樣品置于-20℃冷凍保存(細(xì)菌類檢測(cè)樣品除外)。設(shè)立專柜單獨(dú)保存樣品。如需長(zhǎng)途運(yùn)輸，樣品應(yīng)在冷藏和密封狀態(tài)下運(yùn)輸，于保溫箱中加冰袋保存。樣品運(yùn)輸期間應(yīng)避免反復(fù)凍融。8.2樣品包裝8.2.1樣品處理的生物安全措施應(yīng)符合《獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室生物安全技術(shù)管理規(guī)范》第6章的規(guī)定。8.2.2樣品盛放在密封、無(wú)菌、耐冷凍的容器里，容器外注明樣品種類、編號(hào)及采樣日期。血清、拭子放在離心管里，食道-咽部分泌物(0-P液)放在帶螺旋蓋的樣品采集管里，組織、糞便樣品放在大小適合的帶螺旋蓋的樣品采集管或密封袋，每管/袋限一份樣品。8.2.3將密閉后的樣品裝入密封袋，同一采樣地點(diǎn)的同類型樣品可裝入同一個(gè)密封袋，不同類型樣品分別包裝，避免樣品間交叉污染。密封袋外貼封條和標(biāo)簽，注明采樣地點(diǎn)、樣日期等信息，封條上有采樣人簽章和貼封日期。8.2.4樣品運(yùn)輸包裝應(yīng)符合《高致病性動(dòng)物病原微生物菌(毒)種或者樣本運(yùn)輸包裝規(guī)范》的規(guī)定，使用密封三層包裝，外包裝上貼生物危險(xiǎn)標(biāo)識(shí)。8.2.5將采樣登記表放入一個(gè)獨(dú)立的密封、防水的包裝袋內(nèi)，隨樣品一起送達(dá)實(shí)驗(yàn)室。8(規(guī)范性)相關(guān)試劑的配制A.10.1mol/L磷酸鹽緩沖液(ph7.4)稱取NaC180.0g、KC12.0g、Na?HPO?·12H?030.0g、KH?后加蒸餾水定容至1000mL,4℃冰箱保存。A.20.01mol/L磷酸鹽緩沖液(ph7.4)量取0.1mol/L磷酸鹽緩沖液(ph7.4)100mL,加入900mL蒸餾水，混勻，103kPa高壓蒸汽A.30.04mol/L磷酸鹽緩沖液(ph7.4)量取0.01mol/L磷酸鹽緩沖液400mL