臨床病原學(xué)檢查

病原體檢查的作用

1.感染性疾病的明確診斷2.通過藥敏試驗(yàn)指導(dǎo)臨床合理用藥3.病原體監(jiān)控和耐藥性監(jiān)控

第一節(jié)標(biāo)本采集、運(yùn)送和檢查方法一.標(biāo)本采集和運(yùn)送采集標(biāo)本注意點(diǎn)：1.標(biāo)本容器必須無菌或清潔容器2.選擇最佳時(shí)間采集標(biāo)本，在抗菌藥物使用前3.獲取標(biāo)本時(shí)，須嚴(yán)格無菌操作4.標(biāo)本采集后，應(yīng)盡快送實(shí)驗(yàn)室㈠血液發(fā)熱初期和高峰期采集抗菌藥物治療前成人每次10-20ml，嬰幼兒1-2ml標(biāo)本不用抗凝劑24小時(shí)內(nèi)，可在不同部位采血3次㈡尿液無菌采集清潔中段尿?qū)蚧虬螂状┐太@得㈢糞便取含膿、血或粘液糞便置于清潔容器內(nèi)排便困難者或嬰幼兒可用直腸拭子對傳染性腹瀉須三次送檢㈣呼吸道標(biāo)本1.痰：⑴自然咳痰法

⑵氣管鏡采集法2.鼻咽拭標(biāo)本：同痰標(biāo)本用清水漱口后采集㈤腦脊液與其他無菌體液腦脊液標(biāo)本應(yīng)立即保溫送檢胸腹水等體液標(biāo)本應(yīng)抽取2-5ml送檢㈥泌尿生殖道標(biāo)本性傳播疾病取尿道口分泌物、陰道宮頸口分泌物生殖道皰疹常穿刺取皰疹液㈦創(chuàng)傷、組織和膿腫標(biāo)本開放性膿腫：無菌棉拭采集膿液封閉性膿腫：無菌注射器穿刺抽取二.病原體檢查的基本方法1.臨床標(biāo)本細(xì)菌檢驗(yàn)一般程序一般程序

標(biāo)本直接涂片，染色鏡檢分離培養(yǎng)增菌培養(yǎng)需氧培養(yǎng)

二氧化碳培養(yǎng)厭氧培養(yǎng)觀察菌落形態(tài)

單個(gè)菌落涂片、染色鏡檢

血清學(xué)鑒定生化鑒定藥敏試驗(yàn)

確定致病菌發(fā)出報(bào)告2.病原體診斷的基本方法

直接顯微鏡檢測（microscopicexamination）⑴染色標(biāo)本檢查法：革蘭染色和抗酸染色⑵不染色標(biāo)本檢查法：懸滴法和壓滴法2.病原體診斷的基本方法病原體分離培養(yǎng)(isolationandculture)和鑒定(identification)培養(yǎng)基選擇生長條件：一般大氣條件厭氧條件微需氧條件2.病原體診斷的基本方法鑒定技術(shù)：生化鑒定血清學(xué)鑒定數(shù)碼鑒定自動(dòng)化鑒定2.病原體診斷的基本方法血清學(xué)診斷：查特異性抗體——肥達(dá)氏試驗(yàn)病原體特異性抗原檢測病原體核酸檢測：查特異基因片段DNA/RNA——PCR、DNA探針雜交技術(shù)

第二節(jié)細(xì)菌耐藥性檢查

一.抗微生物藥物敏感性試驗(yàn)（AST）

1.定義：對敏感性不能預(yù)測的臨床分離菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，以指導(dǎo)臨床選擇治療藥物和了解區(qū)域或醫(yī)院內(nèi)常見病原菌耐藥性變遷，有助于臨床經(jīng)驗(yàn)性治療選藥。一.抗微生物藥物敏感性試驗(yàn)（AST）2.常用敏感性試驗(yàn)方法⑴手工試驗(yàn):①K-B紙片瓊脂擴(kuò)散法結(jié)果表示:S-SusceptibleI-IntermediateR-Resistant②稀釋法（MIC）

③Etest④聯(lián)合藥敏試驗(yàn)一.抗微生物藥物敏感性試驗(yàn)（AST）⑵自動(dòng)化儀器Vitek，Microscan⑶分子試驗(yàn)PCR直接檢測mecA基因⑷補(bǔ)充試驗(yàn)Nitrocefin一.抗微生物藥物敏感性試驗(yàn)（AST）3.藥敏試驗(yàn)結(jié)果與臨床抗生素劑量關(guān)系敏感(S)——一般劑量有效，推薦使用該抗生素用于臨床治療中介(I)——大劑量有效，提示藥物MIC接近體液或組織可達(dá)到藥物濃度耐藥(R)——大劑量無效,即常規(guī)用藥劑量不能達(dá)到MIC一.抗微生物藥物敏感性試驗(yàn)（AST）4.K-B紙片擴(kuò)散試驗(yàn)的影響因素瓊脂厚度與抑菌圈直徑成反比菌液濃度與抑菌圈直徑成反比藥敏試紙含量–與抑菌圈直徑成反比保存溫度–20℃，使用前室溫平衡

30min后開啟濕度-密封容器，硅膠防潮NCCLS標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)種類(MH),厚度(4mm)

接種量(0.5MF)

選藥標(biāo)準(zhǔn),判讀標(biāo)準(zhǔn),質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

質(zhì)控參考菌金黃色葡萄球菌ATCC25923大腸埃希菌ATCC25922銅綠假單胞菌ATCC26853二.耐藥機(jī)制及耐藥性監(jiān)測試驗(yàn)1.耐藥菌株：耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）耐青霉素肺炎鏈球菌（PRSP）耐萬古霉素腸球菌（VRE）質(zhì)粒介導(dǎo)的超廣譜-內(nèi)酰胺酶（ESBL）多重耐藥的銅綠假單胞菌、嗜麥芽假單胞菌和不動(dòng)桿菌二.耐藥機(jī)制及耐藥性監(jiān)測試驗(yàn)2.耐藥機(jī)制：⑴藥物滲入細(xì)菌減少⑵產(chǎn)生滅火酶和鈍化酶(-內(nèi)酰胺酶)⑶細(xì)菌抗生素結(jié)合蛋白發(fā)生改變（PBP）⑷代謝拮抗劑產(chǎn)生二.耐藥機(jī)制及耐藥性監(jiān)測試驗(yàn)3.耐藥性監(jiān)測的特殊試驗(yàn)⑴-內(nèi)酰胺酶檢測方法:頭孢哨噻吩濾紙片法(nitrocefin)意義:-內(nèi)酰胺酶檢測陽性,即對青霉素、氨卞西林等抗生素耐藥二.耐藥機(jī)制及耐藥性監(jiān)測試驗(yàn)⑵超廣譜-內(nèi)酰胺酶檢測（ESBL）定義：是水解青霉素，一代、二代和三代頭孢菌及單酰胺類藥物的酶，產(chǎn)生ESBL的細(xì)菌對上述抗生素耐藥。

ESBL主要存在于大腸桿菌和肺炎克雷伯菌等革蘭陰性菌中。二.耐藥機(jī)制及耐藥性監(jiān)測試驗(yàn)⑵超廣譜-內(nèi)酰胺酶檢測（ESBL）方法：紙片擴(kuò)散法和稀釋法意義：ESBL陽性預(yù)示對頭孢泊肟、頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢曲松和氨曲南等抗菌藥物無效。二.耐藥機(jī)制及耐藥性監(jiān)測試驗(yàn)⑶瓊脂篩選試驗(yàn)（agarscreentest）是以單一藥物單一濃度檢測細(xì)菌耐藥性，如耐甲氧西林葡萄球菌和耐萬古霉素腸球菌檢測。二.耐藥機(jī)制及耐藥性監(jiān)測試驗(yàn)⑷耐藥基因檢測如MRSA中mecA基因檢測耐藥性統(tǒng)計(jì)和分析

WHONET

建立本院、本地區(qū)和本國的細(xì)菌耐藥性監(jiān)測數(shù)據(jù)庫和網(wǎng)絡(luò)

第三節(jié)

醫(yī)院感染檢查（NosocomialInfection）醫(yī)院感染檢查1.定義:病人入院時(shí)不存在,也不處于潛伏期，而在醫(yī)院內(nèi)發(fā)生的感染，包括醫(yī)院內(nèi)獲得而在出院后發(fā)病的感染。醫(yī)院感染檢查2.醫(yī)院感染常見病原體（細(xì)菌）：革蘭陰性桿菌、革蘭陽性球菌（MRSA）、厭氧菌和深部真菌等醫(yī)院感染檢查3.感染源:外源或內(nèi)源性病原體外源性：其他住院患者、醫(yī)務(wù)人員、探望者（多為條件致病菌）內(nèi)源性：患者自身皮膚、口腔、咽部和胃腸道固有的正常菌群等（免疫力低下患者）醫(yī)院感染檢查4.常見臨床類型下呼吸道感染尿路感染手術(shù)切口感染胃腸道感染血液感染皮膚和組織感染醫(yī)院感染檢查5.感染途徑：接觸傳播空氣、飛沫傳播經(jīng)注射或輸液、輸血傳播經(jīng)口傳播醫(yī)院感染檢查6.易感因素：年齡：老年和嬰幼兒慢性疾病患者基礎(chǔ)疾病或醫(yī)源性燒傷或創(chuàng)傷產(chǎn)生壞死性組織大量使用抗生素接受侵襲性治療操作醫(yī)院感染檢查7.醫(yī)院感染常見病原菌監(jiān)測尿液標(biāo)本病原菌——大腸埃希菌，變形桿菌，肺炎克雷伯氏菌，腸球菌，金黃色葡萄球菌，銅綠色假單胞菌菌落計(jì)數(shù)>104/ml以上——尿路感染醫(yī)院感染檢查7.醫(yī)院感染常見病原菌監(jiān)測痰（咽拭子）培養(yǎng)病原菌——肺炎鏈球菌，肺炎克雷伯氏菌，大腸埃希菌，腸球菌，金黃色葡萄球菌，銅綠色假單胞菌等半定量3+~4+為致病菌，1+~2+懷疑為污染菌醫(yī)院感染檢查7.醫(yī)院感染常見病原菌監(jiān)測痰（咽拭子）培養(yǎng)

甲型溶血性鏈球菌是亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎的主要致病菌醫(yī)院感染檢查7.醫(yī)院感染常見病原菌監(jiān)測糞培養(yǎng)病原菌——金黃色葡萄球菌，傷寒及其他沙門氏菌，志賀氏菌屬，致病性大腸埃希菌，霍亂弧菌，副溶血性弧菌，彎曲菌，念珠菌等醫(yī)院感染檢查7.醫(yī)院感染常見病原菌監(jiān)測血培養(yǎng)：病原菌：金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等單次血培養(yǎng)不易區(qū)分污染菌或感染菌。兩次培養(yǎng)均為同種皮膚正常菌群可認(rèn)為感染菌。醫(yī)院感染檢查8.醫(yī)院環(huán)境監(jiān)測和消毒滅菌監(jiān)測空氣培養(yǎng)：沉降法采樣物體表面監(jiān)測：壓印法醫(yī)務(wù)人員手部細(xì)菌監(jiān)測消毒滅菌效果監(jiān)測小結(jié)復(fù)習(xí)思考題：名詞解釋：微生物直接檢測、微生物非培養(yǎng)檢測、醫(yī)院感染、