課時跟蹤檢測（三）微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)

檢測（一）微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)

一、概念檢測

1.判斷正誤，正確的畫“J”，錯誤的畫“X”。

（1）選擇分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基。（X）

提示：選擇分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基具有分離、姿定作用。

（2）用平板劃線法培養(yǎng)計數(shù)，應(yīng)選擇菌落數(shù)在10?100的平板。（X）

提示：微生物計數(shù)采用稀釋涂布平板法時，為保證結(jié)果準(zhǔn)確，應(yīng)選擇菌落數(shù)在30?300

的平板。

（3）利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計菌落數(shù)目的理論依據(jù)是當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表

面生長的一個單菌落來源于樣品稀釋液中的一個活菌。（J）

（4）分解尿素的細(xì)菌在分解尿素時，可以將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使得培養(yǎng)基的pH降低。（X）

提示：尿素分解菌將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使培養(yǎng)基的pH升高。

（5）在用涂布器涂布平板時，為了操作方便可完全打開培養(yǎng)皿的皿蓋。（X）

提示：為了防止雜菌污染，不能完全打開皿蓋。

2.下列環(huán)境中易得到纖維素分解菌的是（）

A.濕潤的環(huán)境中B.腐殖質(zhì)豐富的環(huán)境中

C.富含無機鹽的環(huán)境中D.養(yǎng)魚的池塘中

解析：選B生物與環(huán)境之間存在相互依存的關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中，更容易尋

找到纖維素分解菌，故纖維素分解菌主要分布在腐殖質(zhì)豐富的環(huán)境中，B正確。

3.微生物接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。下列關(guān)于這兩種接種方

法的敘述，錯誤的是（）

A.都只能用于固體培養(yǎng)基接種

B.都需要對菌液進(jìn)行梯度稀釋

C.接種培養(yǎng)后均可獲得單菌落

D.接種工具使用后均需要滅菌

解析:選B將微生物接種到固體培養(yǎng)基中的方法通常為平板劃線法和稀釋涂布平板法，

A正確；平板劃線法常用來篩選分離微生物，不能用來進(jìn)行微生物的計數(shù)，不需要對菌液進(jìn)

行梯度稀釋，B錯誤；兩種接種方法均可在培養(yǎng)基中形成單菌落，C正確；接種工具使用后

均需要滅菌，以免菌種對環(huán)境造成污染，D正確。

4.某學(xué)者欲研究被石油污染過的土壤中的細(xì)菌數(shù)并從中篩選出能分解石油的細(xì)菌。下

列有關(guān)操作錯誤的是（）

A.利用平板劃線法對細(xì)菌進(jìn)行計數(shù)

B.利用以石油為唯一碳源的培養(yǎng)基篩選能分解石油的細(xì)菌

C.采用稀釋涂布平板法分離菌種

D.稱取土壤和稀釋土壤溶液時應(yīng)在酒精燈火焰旁

解析：選A平板劃線法能對細(xì)菌分離、純化但不能計數(shù)，A錯誤；篩選能分解石油的

細(xì)菌只能利用以石油為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，B正確；通常將被石油污染過的土壤浸出液

稀釋后，采用稀釋涂布平板法分離分解石油的細(xì)菌菌種，并對菌種進(jìn)行計數(shù)，C正確；稱取

土塌和稀釋土壤溶液過程中的每一步都要在酒精燈火焰旁操作，D正確。

5.下列關(guān)于統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法的敘述，錯誤的是（）

A.采用稀釋涂布平板法獲得的菌落數(shù)往往少于實際的活菌數(shù)

B.當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，一個活菌往往會形成一個菌落

C.為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般采用菌落密度較大的平板進(jìn)行計數(shù)

D.在某一濃度下涂布三個平板，若三個平板統(tǒng)計的菌落數(shù)差別不大，則應(yīng)以它們的平

均值作為統(tǒng)計結(jié)果

解析：選C采用平板計數(shù)法獲得的菌落有可能是由多個細(xì)菌形成的，所以用該方法統(tǒng)

計的菌落數(shù)往往少于實際的活菌數(shù)，A正確。當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的

一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，B正確。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選取菌落數(shù)

在30?300之間的平板進(jìn)行計數(shù)，C錯誤。設(shè)計實驗時，應(yīng)至少涂布三個平板做重復(fù)實臉，

才能增強實驗的說服力和準(zhǔn)確性；分析結(jié)果時，一定要考慮所設(shè)置的重復(fù)實臉的結(jié)果是否一

致，差別不大時，取平均值作為統(tǒng)計結(jié)果，D正確。

二、綜合遷移

6.某實驗小組欲從土壤中篩選出能分解淀粉的芽抱桿菌。下列敘述錯誤的是（）

A.采樣與培養(yǎng)：稱量1g土樣置于剛配制的液體培養(yǎng)基中，30℃振蕩培養(yǎng)

B.接種：為避免培養(yǎng)液中菌體濃度過高，需經(jīng)過系列梯度稀釋后接種

C.選擇：選用淀粉作唯一碳源的固體培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)

D.篩選：將適量的碘液滴加到平板中的菌落周圍，出現(xiàn)透明圈說明此種菌能分解淀粉

解析：選A配制的液體培養(yǎng)基需要經(jīng)過高壓蒸汽法滅菌后才能使用，A錯誤；接種時

為避免培養(yǎng)液中菌體濃度過高，需經(jīng)過系列梯度稀釋降低細(xì)菌的濃度后，再用涂布平板法接

種，B正確；實驗?zāi)康氖蔷嗊x出能分解淀粉的芽花桿菌，所以需要選用淀粉作唯一碳源的固

體培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)，C正確；淀粉遇碘液變成藍(lán)色，所以為了篩選目的菌株，將適量的

碘液滴加到平板中的菌落周圍，出現(xiàn)透明圖說明淀粉被分解，則此種菌能分解淀粉，D正確。

7.如圖所示，科研人員利用誘變方式選育可高產(chǎn)P胡蘿卜素的三胞布拉霉負(fù)菌。未突

變菌不能在含有P紫羅酮的培養(yǎng)基上生長。隨P胡蘿卜素含量增加，菌體顏色從黃色加深至

橙紅色。圖甲為選育菌種及獲得。胡蘿卜素的流程，以下相關(guān)敘述錯誤的是（）

選取

紫

④

外①

線

一接種之接種

照

射場麟液體培養(yǎng)萃取

胡蘿卜素的鑒定一⑥一過濁

甲

A.要得到圖乙所示的菌落，可用稀釋涂布平板法遂行②操作，然后培養(yǎng)

B.經(jīng)過程①紫外線照射的三抱布拉霉負(fù)菌都能在含p紫羅酮培養(yǎng)基上生長

C.進(jìn)行③操作時，應(yīng)選擇較大的橙紅色菌落中的菌株繼續(xù)接種培養(yǎng)

D.能在添加了。紫羅酮的乙上長成菌落的細(xì)菌，其遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變

解析：選B圖乙中的菌落均勻分布于平板，說明采用的接種方法是稀釋涂布平板法，

A正確；過程①紫外線照射的作用是利用物理因素誘導(dǎo)基因發(fā)生突變，由于突變的不定向性,

被照射的三匏布拉霉負(fù)菌不可能都能在含0紫羅酮的培養(yǎng)基上生長，B錯誤；橙紅色的菌體

為高產(chǎn)菌，進(jìn)行③操作時，應(yīng)選擇較大的橙紅包菌落中的菌株繼續(xù)接種培養(yǎng)，C正確；能在

添加了。紫羅酮的乙上長成菌落的細(xì)菌是經(jīng)過紫外線照射后的高產(chǎn)菌，其遺傳物質(zhì)發(fā)生了改

變，D正確。

8.下圖是從土壤中分離能降解纖維素的微生物實驗過程流程圖。下列有關(guān)敘述正確的

是（）

A.該實驗所用的牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基中一定要添加適量的纖維素

B.過程①不能提高所選微生物在培養(yǎng)物中的比例

C.過程②純化經(jīng)過③培養(yǎng)后獲得的單細(xì)胞菌落屬于種群層次

D.④的操作是挑取單菌落進(jìn)行菌種鑒定并在皿蓋及時做上標(biāo)記

解析：選C由于該實驗需從土壤中分離能降解纖維素的微生物，故所用培養(yǎng)基應(yīng)以纖

維素為唯一碳源，A錯誤；過程①利用以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，可進(jìn)一步提

高能降解纖維索的微生物在培養(yǎng)物中的比例，B錯誤；過程②純化經(jīng)過③培養(yǎng)后獲得的單細(xì)

胞菌落是同一物種，屬于種群層次，C正確；④的操作是挑取單菌落進(jìn)行菌種塞定并在皿底

及時做上標(biāo)記，D錯誤。

9.尿素［CO（NH2）d含氮量高，化學(xué)性質(zhì)相對穩(wěn)定，是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中一種重要的氮肥。

尿素施入土壤后，會被土壤中的某些好氧微生物分解。為分離土壤中能分解尿素的細(xì)窗，操

作過程如圖，并成功篩選到能高效降解尿素的細(xì)菌（目的菌），培養(yǎng)基成分如下表所示。下列

敘述錯誤的是（）

葡萄糖尿素瓊脂

KH2PO4Na2HPO4MgSO4-7H2O

l.4g2.1g0.2g10g1g15g

將上述物質(zhì)溶解后，用蒸儲水定容到1000mL,調(diào)pH為7.2

稀擇倍數(shù)為1（）3?10,的試管

I接種

含尿素培養(yǎng)基

A.目的菌生長所需的氮源和碳源分別來自培養(yǎng)基中的尿素和葡萄糖

B.為滿足目的菌對氧氣的需求，應(yīng)對錐形瓶進(jìn)行振蕩或攪拌

C.將細(xì)菌轉(zhuǎn)到固體培養(yǎng)基上時，應(yīng)采用稀釋涂布平板法接種獲得單個菌落

D.若接種菌種的培養(yǎng)基pH降低，則說明該菌種能夠分解尿素

解析：選D分析表格可知，目的菌（降解尿素的細(xì)菌）在培養(yǎng)基上生長所需要的氟源來

自尿素，碳源來自葡萄糖，A正確；分解尿素的細(xì)菌是需氧型微生物，因此在培養(yǎng)時應(yīng)對錐

形瓶充分振蕩或攪拌，使目的菌與氧氣充分接觸，B正確；為獲得單個菌落，可采用稀釋涂

布平板法將錐形瓶中的細(xì)菌接種到固體培養(yǎng)基上，C正確；尿素分解菌能將尿素分解成氨，

而氨呈堿性，若接種菌種的培養(yǎng)基pH升高，則說明該菌種能夠分解尿素，D錯誤。

10.某同學(xué)完成了“培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化”實驗，下圖為利用血細(xì)胞計數(shù)板

（1mmXlmmX0.1mm）通過顯微鏡觀察時，實驗第6天對酵母菌培養(yǎng)液稀釋100倍后的統(tǒng)

計結(jié)果。圖2為培養(yǎng)液中的酵母菌數(shù)量的變化情況。下列相關(guān)敘述錯誤的是（）

A.圖1的中格內(nèi)酵母菌的數(shù)量約計為24個

B.取樣時為避免吸到培養(yǎng)液底部的死菌，滴管應(yīng)輕輕吸取，避免溶液晃動

C.圖2中de段發(fā)生的原因可能與營養(yǎng)物質(zhì)的消耗、pH的改變等有關(guān)

D.制片時，先將蓋玻片放在血細(xì)胞計數(shù)板的計數(shù)室上，用吸管吸取培養(yǎng)液，滴于蓋玻

片邊緣，讓培養(yǎng)液自行滲入

解析：選B計數(shù)過程中，位于格線上的菌體一般只數(shù)上方和左邊線上的（或下方和右邊

線上的），所以困1的中格內(nèi)酵母菌的數(shù)量約計為24個，A正確；取樣時為了使計數(shù)準(zhǔn)確，

培養(yǎng)液要搖勻，計數(shù)過程中死菌、活菌全部進(jìn)行計數(shù)，B錯誤；分析題圖可知，圖2中de

段種群在有限的空間中競爭激烈，由于空間資源有限，營養(yǎng)物質(zhì)消耗殆盡，而且代謝產(chǎn)物積

累導(dǎo)致培養(yǎng)瓶中pH改變，導(dǎo)致酵母菌種群數(shù)量下降，C正確；制片時，先將蓋玻片放在血

細(xì)胞計數(shù)板的計數(shù)室上，用吸管吸取培養(yǎng)液，滴于蓋玻片邊緣，讓培養(yǎng)液自行滲入，這樣可

以使細(xì)胞單層分布不堆積，D正確。

11.為了分離和純化高效分解石油的細(xì)菌，科研人員利用被石油污染過的土壤進(jìn)行了如

圖1所示的實驗。請據(jù)圖回答下列問題：

石油定石油

A的含量

上墩①制取上②擴(kuò)大③無機液④無機固

壤懸液培養(yǎng)體培養(yǎng)基體培養(yǎng)基一

+石油段三齡⑤麻強體培養(yǎng)

蕩培養(yǎng)溫培養(yǎng)基+石油震蕩培養(yǎng)

圖2

(1)步驟③的培養(yǎng)基成分與普通液體培養(yǎng)基相比，最大的區(qū)別是步驟③培養(yǎng)基中以

為唯一碳源。從功能上講，步驟③中使用的培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基。

(2)配制好的培養(yǎng)基通常使用法滅菌。接種時，若在培養(yǎng)基表面連續(xù)進(jìn)行

4次劃線(如圖2),則需要對接種環(huán)灼燒次。

(3)為了對石油分解菌進(jìn)行計數(shù)采用法，得到了如圖3所示的平板。運

用這種方法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目(填“偏高”或“偏低”)。將1mL

樣品稀釋】。0倍，在3個平板上分別接入0.1mL稀釋液，經(jīng)過適當(dāng)培養(yǎng)后，3個平板上的菌

落分別為56、58和57。據(jù)此可得出每升樣品中的活菌數(shù)為個。

(4)若想要長期保存優(yōu)質(zhì)菌種，可以采用的方法。

解析：(1)分析題圖可知，步驟③的培養(yǎng)基是篩選能分解石油的細(xì)菌的培養(yǎng)基，與普通液

體培養(yǎng)基相比，最大的區(qū)別是步麻③培養(yǎng)基中以石油為喳一碳源。從功能上講，步驟③中使

用的培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基，能分解石油的細(xì)菌能夠在該培養(yǎng)基生長，其他細(xì)菌不能生長。

⑵培養(yǎng)基的滅菌常使用高壓中蒸汽滅菌。接種時，在每次劃線前后都要對接種環(huán)進(jìn)行滅菌，

因此按照國中劃線順序進(jìn)行4次劃線，整個劃線過程中需要對接種環(huán)進(jìn)行5次灼燒。⑶為了

對石油分解菌進(jìn)行計數(shù)，采用稀釋涂布平板法，得到了如國3所示的平板。由于稀釋涂布平

板法統(tǒng)計的是活菌數(shù)目，當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，因

此運用這種方法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目偏低。將1mL樣品稀釋100倍，在3

個平板上分別接入0.1mL稀釋液，經(jīng)過適當(dāng)培養(yǎng)后，3個平板上的菌落分別為56、58和57,

則每升樣品中的活菌數(shù)為(56+58+57)+3X).1X100X1000=5.7X101個)。(4)甘油管冷凍保

藏法是利用微生物在甘油中生長和代謝受到抑制的原理達(dá)到保藏目的，若想要長期保存優(yōu)質(zhì)

菌種，可以采用甘油管藏的方法。

答案：（1）石油選擇（2）高壓蒸汽滅菌5（3）稀釋涂布平板偏低5.7X107（%甘

油管藏

三、應(yīng)用創(chuàng)新

12.下圖為分離以尿素為氮源的微生物的實驗結(jié)果，下列敘述正確的是（）

①稀狎度106②稀杼度10"③林擇度10,④稀稗度10

A.圖中采用平板劃線法接種

B.圖中①和②表示尿素培養(yǎng)基長出的菌落

C.圖中③④培養(yǎng)基中菌落生長代謝時，會釋放CO?

D.實驗結(jié)果表明，自然界中能合成胭酶的微生物比例較高

解析：選C根據(jù)圖示實驗結(jié)果可知，圖中采用的接種方法為稀釋涂布平板法，A錯誤；

由圖中①和②的菌落特征可知，①稀釋度為10"的菌落數(shù)明顯多于②稀釋度為IO"時的菌

落數(shù)，很可能是由于雜菌污染導(dǎo)致的，而不是分離出以尿素為氮源的微生物，B錯誤；③④

已經(jīng)分離出單個細(xì)菌繁殖而來的尿素分解菌的菌落，尿素分解菌含有腺酶，能夠催化尿素分

解成氨、CO2和水，C正確；根據(jù)實驗結(jié)果，無法判斷自然界中能合成麻酶的微生物比例的

高低，D錯誤。

13.下圖所示為分離某種以尿素為氮源的細(xì)菌實驗過程，下列敘述錯誤的是（

0.5mL

0.52a

cI)7?;.1各種濃度做三個培養(yǎng)皿

胃酸歌OOO-?

1g上樣99mLL0.1mL

無菌水

A.土樣從有哺乳動物排泄物的地方取，獲得目的菌種的概率很高

B.取不同稀釋倍數(shù)的土壤稀釋液各0.1mL,分別涂布于全營養(yǎng)LB固體培養(yǎng)基、尿素

固體培養(yǎng)基上

C.將實驗組和對照組37℃恒溫培養(yǎng)24至481】時，需將平板倒置

D.在尿素固體培養(yǎng)基上生長的細(xì)菌都是以尿素為氮源的細(xì)菌

解析：選D在含哺乳動物排泄物的土壤中有較多能合成腺酶的細(xì)菌，因此土樣從有哺

乳動物排泄物的地方取，獲得目的菌種的概率很高，A正確；取不同稀釋倍數(shù)的土壤稀釋液

各0.1mL,分別涂布于全營養(yǎng)LB固體培養(yǎng)基、尿素固體培養(yǎng)基上，其中全營養(yǎng)LB固體培

養(yǎng)基作為對照，B正確；將實驗組和對照組37C恒溫培米24至48h時，需將平板倒置，即

培養(yǎng)皿皿蓋在下皿底在上，c正確；在尿素固體培養(yǎng)基上生長的細(xì)菌大多數(shù)是以尿素為氮源

的細(xì)菌，還有一些利用空氣中氮的微生物等也能在該培養(yǎng)基生存，D錯誤。

14.據(jù)傳言細(xì)菌比馬桶多，下圖是兩個小組的同學(xué)通過實驗展示的調(diào)查結(jié)果?；卮?/p>

下列相關(guān)問題：

無菌棉取樣

（1）圖中兩小組均采用法接種，接種前需要采用法對培養(yǎng)基

進(jìn)行滅菌。

⑵通過觀察菌落的（填寫2項）等特征,初步鑒定屏幕和馬梢按鈕

上的微生物類群。兩小組實驗操作均正確且完全一致，但實驗結(jié)果截然不同，最可能的原因

是o

（3）在上發(fā)現(xiàn)的有害細(xì)菌中，最為常見的當(dāng)屬金黃色葡萄球菌。這種細(xì)菌可導(dǎo)致一系

列感染，例如食物中毒和膿皰病，嚴(yán)重時可導(dǎo)致敗血癥。該菌有高度耐鹽性，可在10%?15%

的NaCI肉湯中生長，這種肉湯屬于（從物理性質(zhì)和功能兩方面回答）培養(yǎng)基，

（4）按圖操作取樣面積，某同學(xué)測定某屏幕的細(xì)菌量，將10inL菌懸液進(jìn)行梯度稀釋,

分別取0.1mL稀釋倍數(shù)為103的樣品液