第2節(jié)微生物的培養(yǎng)技術及應用

第1課時微生物的基本培養(yǎng)技術

課程內容標準核心素養(yǎng)對接

1科.學思維——根據(jù)微生物的代謝類型

1.概述培養(yǎng)基的配制方法和微生物純培

分析培養(yǎng)基營養(yǎng)物質的組成。

養(yǎng)的基本操作要求。

2科.學探究——設計制備馬鈴薯固體培

2.掌握無菌技術的操作。

養(yǎng)基的實驗步驟，并嘗試運用平板劃線

3.掌握酵母菌純培養(yǎng)的方法及步驟。

法進行純化酵母菌。

門課前?自主預習自主梳理夯基礎

知識點1培養(yǎng)基的配制

1.培養(yǎng)基的概念、用途和類型

年、人們按照微生物對營養(yǎng)物用的不同需求.

也勿配制出供其生箕繁筮的營養(yǎng)基質

用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或積

累其邈物病胞中科生生

.........治,不能用節(jié)逢塔,基來培

普鬻(下「液入體培凝養(yǎng)固基劑,如瓊脂不)能總接牌件

性質分儲本培養(yǎng)基/

2.培養(yǎng)基的配方

(1)主要營養(yǎng)物質：水、碳遮、氮源、無機鹽。

⑵其他條件：pH、特殊營養(yǎng)物質和氧氣。如下表:

微生物乳酸桿菌霉菌細菌厭氧微生物

DH調至中性或

特殊需求添加維生素pH調至酸性無氧

弱堿性

知識點2無菌技術

1.獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關鍵：防止雜菌污類。

2.消毒和滅菌

,————、

:道.1滅的

▼'v'

較為溫和的物理、

[WI強烈的理化方法

化學或生物等方法［強度］

殺死物體表面或內[n^ri殺死物體內外

部一部分微生物「程度1所有微生物

一

(

需

一般不能殺滅子能殺滅

-

一-

用微生物培養(yǎng)的器

操作的空間、操作

鹿

象皿、接種用具和

者衣著和雙手一

培養(yǎng)基等

邈消毒法、小麗嘿盟E、

消毒法等方法”現(xiàn)火萌法工

七三"灼燒滅菌法等

還有涌籽強多法、手外故謂多注—

3.注意事項

(1)實驗操作時應避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品接觸C

⑵為了避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應在超凈工作臺上并在酒精燈

火焰附近進行。

知識點3微生物的純培養(yǎng)

1.純培養(yǎng)的概念

、在微生物學中，將接種于培養(yǎng)基內，

培養(yǎng)物卜在合適條件下形成的含特定種類微生

?物的群體

［純培養(yǎng)物卜由單一個體繁殖所獲得的微生物群體

［純欣養(yǎng)F獲得純培養(yǎng)物的過程

2.純培養(yǎng)的過程(以酵母菌為例)

包括配制培養(yǎng)基、滅菌、接種、分離和培養(yǎng)等步驟0

(1)制備培養(yǎng)基

培養(yǎng)基斤稱取一煮沸一過濾一加瓊脂一定容

培養(yǎng)基:高壓蒸汽滅菌

培養(yǎng)皿:「?熱滅菌

魚強A如卜?圖

庖過約現(xiàn)又西，防立機匕的微生秒污果培為基

①拔出錐形

②將瓶

瓶的棉塞

口迅速

&港料行通過火

火后玲］\庭一

①

③用拇指和食'④

指將培養(yǎng)皿打

開一條梢大干④等待培養(yǎng)基冷卻

瓶口的縫隙.凝固后，將培養(yǎng)皿

將培養(yǎng)基(1。~熙逑放置J

防工玲流水一滴落￡玲

20EL)倒入培養(yǎng)皿，立即蓋

上皿蓋洋弟上引發(fā)污果

(2)平板劃線法接種和分離酵母菌

_通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基衣面連續(xù)劃線

逸虹的操作,將聚集的菌種逐步稀稀分散到

培養(yǎng)基的表面經(jīng)數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可

以分離得到單菌落

(步蛆

畬

將

③試

①冷接種環(huán)放②在火焰旁冷卻雀

口

通

在火焰上灼燒,種環(huán)。同時，拔出管

火

焰

由

直到接種環(huán)的裝有酵母菌培養(yǎng)液

金屬絲燒紅C的試管的棉塞。

法奎號年劃破塔外基表面

⑥在火焰附近將皿蓋打⑤將試管

④在火焰

開一條縫隙JH接種環(huán)在口通過火

培養(yǎng)基表面迅速劃三至焰.并塞附近用接

種環(huán)蘸取，

五條平行線，蓋上恥蓋。上棉塞。

一環(huán)菌液。

以免玨科環(huán)溫度太氤東無函鐘T

一、⑦灼燒接種環(huán)，待其途理后,從第一

修⑥次劃線的末端開始作第二次劃線里

復以上操作，作第三、四、五次劃線。

T%.不車將吳育一次的不雋,與第一次的對囁和得

(3)培養(yǎng)酵母菌

將接種后的平板和一個耒接種的平板倒置，放入28℃左右的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

24-48ho

?自查自糾

(1)培養(yǎng)基中的碳源物質有可能同時是氮源(J)

(2)只要培養(yǎng)基中的物質含有氮元素，就可作為氮源(X)

(3)微生物在液體培養(yǎng)基中生長可形成菌落(義)

(4)滅菌相比消毒對微生物的殺滅更徹底(J)

(5)只要是沒有生物活性的材料均可進行高壓蒸汽滅菌(X)

(6)培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)UI后再進行濕熱滅菌(X)

(7)為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應趁熱快速挑取菌落(X)

?教材邊角

教材Pu“資料卡”拓展

1.將無菌技術類型、常用方法和適用對象用線連起來。

域型，：方法，河生

VV

產(chǎn)灼燒滅菌^——1.接種針(環(huán))

U—二jb.干熱滅菌

/II.操作空間(接種室)

阿可.巴氏消毒<ID.培養(yǎng)皿

卜.紫外線消毒彳：

、IV'.牛奶等不耐高溫

p/\c.化學藥物\液體

鋰郵\(酒精).V.操作者雙手

\f.高壓蒸汽一一

培養(yǎng)基

滅菌\\口.試管口

教材Pl1圖示拓展訓練

2.下圖為接種環(huán)灼燒滅菌的示意圖，請據(jù)圖回答：

/￡/

A①②③

(1)酒精燈火焰A、B代表充分燃燒層的是

(2)滅菌先后的正常順序是③一①一②(用序號和箭頭表示)。

I教材P2“探究?實驗”拓展

3.下圖表示倒平板的正確操作步驟是③f④f②f①(用序號和箭頭表示)。

①②③④

門課中?合作探究任務驅動重思維

探究點一培養(yǎng)基的配制

■情境探疑

1.下表是某培養(yǎng)基的配方，分析回答：

材料牛肉膏蛋白陳NaCl瓊脂水

用量5g10g5g20g定容至1()00mL

(1)根據(jù)培養(yǎng)基的物理性質，該培養(yǎng)基屬于哪類培養(yǎng)基，理由是什么？

提示固體培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基的配方中含有凝固劑瓊脂。

⑵該培養(yǎng)基中提供碳源和氮源的物質是什么？屬于有機物還是無機物？為什么

培養(yǎng)基需要氮源？

提示牛肉膏和蛋白豚提供碳源和氮源。二者均屬于有機物。培養(yǎng)基中的氮元素

是微生物合成蛋白質、核酸等物質必需的。

(3)該培養(yǎng)基培養(yǎng)的微生物同化作用類型是_______,理由是什么？。

提示異養(yǎng)型微生物該微生物的碳源和氮源是有機物。

2.下表是某微生物培養(yǎng)基的成分，請分析該培養(yǎng)基可用來培養(yǎng)哪種微生物？若除

去①，此培養(yǎng)基可用來培養(yǎng)圓褐固氮菌嗎？

編號?@@⑤

成分(NH4)2SO4KH2PO4FeSO4CaChH2O

含量/g0.44.0().5().5100mL

提示此培養(yǎng)基可用來培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物。圓褐固氮菌雖可以固氮，但其同化作

用類型為異養(yǎng)型，培養(yǎng)基中必須提供含碳有機物，所以該培養(yǎng)基不能用來培養(yǎng)圓

褐固氮菌。

名師批注

1.幾種微生物的營養(yǎng)和能量來源

微生物j:氮源：:能源：

VVVV

藍細菌>CO2NH；、NO：等光能

1

硝化細菌>CO,NH,NH,的氧化（

1

根瘍菌糖類等為機物用機物

N2

1

糖類、蛋白蛋白質等有機物

大腸桿菌>

質等有機物

2.巧記培養(yǎng)基的種類和作用

按物理狀態(tài)分類

,商：舒看萬王

V▼V

不加凝固劑?（液體培養(yǎng)基）■工業(yè)生產(chǎn)

加凝固劑半固體觀察微生物的運動、分

（如晾脂）培養(yǎng)基類鑒定

加凝固劑微生物的分離、鑒定，

*固體培養(yǎng)基

（如瓊脂）活菌計數(shù)，菌種保藏等

［例1］下列有關微生物營養(yǎng)物質的敘述中，正確的是（）

A.是碳源的物質不可能同時是氮源

BJ股生物的培養(yǎng)都需要提供碳源、氮源、水、無機鹽，缺一不可

C.牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基屬于合成培養(yǎng)基，營養(yǎng)全面

D.液體培養(yǎng)基有利于營養(yǎng)物質的吸收，可用于微生物的擴增培養(yǎng)

答案D

解析同一種物質可以既作碳源又作氮源，如牛肉膏，A錯誤；不同的微生物所

需的條件不同，如培養(yǎng)自生固氮菌時不需要加入氮源，B錯誤；牛肉膏蛋白陳培

養(yǎng)基屬于天然培養(yǎng)基，營養(yǎng)全面，C錯誤；液體培養(yǎng)基有利于營養(yǎng)物質的吸收，

可用于微生物的擴增培養(yǎng)，D正確。

［例2］回答下列與細菌培養(yǎng)相關的問題。

（1）在細菌培養(yǎng)時，培養(yǎng)基中能同時提供碳源、氮源的成分是_______（填“蛋白

月東”“葡萄糖”或“NaNCh"）。通常，制備培養(yǎng)基時要根據(jù)所培養(yǎng)細菌的不司來

調節(jié)培養(yǎng)基的pH,其原因是o

硝化細菌在沒有碳源的培養(yǎng)基上_______（填“能夠”或“不能”）生長，原因是

⑵用平板培養(yǎng)細菌時一般需要將平板（填“倒置”或“正置”）。

⑶單個細菌在平板上會形成菌落，研究人員通?？筛鶕?jù)菌落的形狀、大小、顏

色等特征來初步區(qū)分不同種的微生物，原因是

______________________________________________________________________0

（4）有些使用后的培養(yǎng)基在丟棄前需要經(jīng)過_______處理，這種處理可以殺死丟

棄物中所有的微生物。

答案（1）蛋白陳不同細菌生長繁殖所需的最適pH不同能夠硝化細菌可

以利用空氣中的CO2作為碳源（2）倒置

⑶在一定的培養(yǎng)條件下，不同種微生物表現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特征

（4）滅菌

解析（1）細菌培養(yǎng)時常用牛肉膏蛋白腺培養(yǎng)基，牛肉膏能提供碳源、氮源、磷

酸鹽、維生素，蛋白陳能提供碳源、氮源、維生素，而葡萄糖不能提供氮源，

NaNCh不能為微生物提供碳源。不同細菌生長繁殖所需要的最適pH是不同的，

應該根據(jù)培養(yǎng)細菌的不同來調節(jié)培養(yǎng)基的pH。硝化細菌是化能自養(yǎng)型細菌，可

以利用空氣中的CO2為碳源，因此在沒有碳源的培養(yǎng)基上能夠生長。（2）在平板

培養(yǎng)基上培養(yǎng)細菌時，一般需將平板倒置，這樣可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)

基造成污染。（3）不同種類的細菌所形成的菌落，在大小、形狀、光澤度、顏色、

硬度、透明度等方面具有一定的特征，不同種細菌在一定培養(yǎng)條件下表現(xiàn)出各自

穩(wěn)定的菌落特征，可以作為菌種鑒定的重要依據(jù)。（4）使用后的培養(yǎng)基在丟棄前

需進行滅菌處理，以免污染環(huán)境。

學霸感悟

1.微生物在固體培養(yǎng)基表面生長，可以形成肉眼可見的菌落。

2.擴大培養(yǎng)獲得大量菌種時常用液體培養(yǎng)基。

3.不是所有微生物的培養(yǎng)基中都需要加入碳源、氮源。

（1）自養(yǎng)型微生物能利用無機碳源（如空氣中的CCh）,故培養(yǎng)基中不用添加碳源。

（2）固氮微生物可利用N2作為氮源，故培養(yǎng)基中不用加入氮源。

氨是硝化細菌的氮源，硝化細菌利用、氧化環(huán)境占的氫所釋放的化學能，將C02

最終還原為儲存能量的有機物，進行化能合成作用。

對異養(yǎng)微生物來說，含C、H、0、N的有機化合物（尿素除外）既可能是碳源，又

可能是氮源和能源。

探究點二無菌技術

＞情境探疑

1.通過學習無菌技術，關注生活中的現(xiàn)象和人類健康。

（1）“無菌操作”與人們的生活休戚相關，無時無處不在。在日常生活、生產(chǎn)實

踐、自身健康防護中，分別有哪些“無菌操作”的例子？

提示在日常生活、生產(chǎn)實踐、自身健康防護中“無菌操作”的例子分別有：

①被褥、鞋襪要常曬；肉制品儲存時用鹽腌等。②家畜閹割后，要在其傷口處涂

抹一些酒精或白酒；初冬楊樹樹干涂刷生石灰水等。③打針時，注射部位要用酒

精棉球擦拭；在皮膚傷口處涂抹一些碘酒。

⑵常用酒精擦拭雙手是預防新冠肺炎的日常防護措施之一，這是消毒還是滅

菌？體積分數(shù)為70%和95%的酒精，哪種效果更好？為什么？

提示酒精擦拭屬于消毒。酒精消毒時，70%的酒精殺菌效果最好。濃度過高，

使菌體表面蛋白質凝固成一層保護膜，酒精分子不能滲入其中；濃度過低，殺菌

能力減弱。

2.對培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實驗者的雙手、空氣和牛奶常采用的滅菌或消毒

方法分別是什么？

提示分別為高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、灼燒滅菌、化學藥物消毒、紫外線消毒、

巴氏消毒法。

3.消毒和滅菌的原理是什么？能否殺死所有的微生物？

提示消毒和滅菌都是使微生物的蛋白質變性，借此殺死微生物。滅菌可殺死處

理材料中的全部微生物（包括芽泡和抱子）。而消毒僅殺死部分微生物（一般不包括

芽袍和抱子）。

名師批注

1.不同消毒方法的特點

高溫避高溫可以使菌體細胞內的蛋白質、核酸變

消毒7性失活，從而達到消毒的目的

巴氏L”與貳沸消毒法相比，巴氏消毒法的優(yōu)點是

消兼》達到消毒目的的同時營養(yǎng)物質損失較少

I體積分數(shù)為70%的酒精殺菌放果最好，

而劇70%若酒精濃度過高，菌體表面蛋白質變性

消毒前過快而凝固成一層保護膜，酒精不能滲

入其中；濃度過低，殺菌能力減弱

I紫外線主要是通過對微生物的輻射損傷和

紫外］破壞核酸的功能使微生物致死，從而達到

線消卜消毒的目的.在用紫外線照射前，適量噴

毒I灑石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以加

強消毒效果

2.高壓蒸汽濕熱滅菌問題分析

(I)高壓蒸汽滅菌開始之前要將鍋內的冷空氣排盡。滅菌完畢后，要待壓力降到0

時才能打開排氣閥。

(2)在同一溫度下，濕熱的殺菌效力比干熱大。

(3)在使用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時，滅菌鍋內冷空氣的排出是否完全極為重要，

因為空氣的膨脹壓大于水蒸氣的膨脹壓，所以，當水蒸氣中含有空氣時，在同一

壓力下，含空氣蒸汽的溫度低于飽和蒸汽的溫度。

(4)如果在壓力未降到0時打開排氣閥，會導致鍋內壓力突然下降，使容器內的

培養(yǎng)基由于內外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生

污染。

［例3］在微生物培養(yǎng)過程中，關于滅菌和消毒的理解，錯誤的是()

A.消毒是指殺死物體表面或內部一部分微生物

B.滅菌是殺死物體內外所有的微生物，包括芽胞和泡子

C.實驗中使用后的培養(yǎng)基丟棄前一定要進行消毒處理，以免污染環(huán)境

D.吸管和培養(yǎng)皿可以采用干熱滅菌法

答案C

解析消毒只能殺死物體表面或內部的一部分微生物，不能殺死抱子和芽抱，A

正確；滅菌是指使用強烈的理化方法殺死物體內外所有的微生物，在經(jīng)過滅菌后

的物體中，不再存在任何活著的生命，包括芽狗和狗子，B正確：實驗中使用后

的培養(yǎng)基丟棄前一定要進行滅菌處理，以免污染環(huán)境，C錯誤；常用的滅菌方法

有灼燒滅菌、干熱滅菌和濕熱滅菌等，吸管和培養(yǎng)皿可以采用干熱滅菌法，D正

確。

［例4］在生產(chǎn)、生活和科研實踐中，經(jīng)常通過消毒和滅菌來避免雜菌的污染。回

答下列問題：

⑴在實驗室中，玻璃和金屬材質的實驗器具（填“可以”或“不可以”）

放入干熱滅菌箱中進行干熱滅菌。

（2）牛奶的消毒常采用巳氏消毒法或高溫瞬時消毒法，與煮沸消毒法相比，這兩

種方法的優(yōu)點是________________________________________________________

⑶密閉空間內的空氣可采用紫外線照射消毒，其原因是紫外線能

0在照射前，適量噴灑,可強化消毒效果.

（4）水廠供應的自來水通常是經(jīng)過_______（填“氯氣”“乙醇”或“高鎰酸鉀”）

消毒的。

答案（1）可以（2）在達到消毒目的的同時，營養(yǎng)物質損失較少（3）破壞微生物

DNA結構消毒液（4）氯氣

解析（1）在實驗室中，能耐高溫的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿和金屬

材質的實驗器具等可以放入干熱滅菌箱中進行干熱滅菌。（2）巴氏消毒法或高溫

瞬時消毒法與煮沸消毒法相比，其優(yōu)點表現(xiàn)在達到消毒目的的同時，營養(yǎng)物質損

失較少。（3）紫外線照射能消毒的原因是其能夠破壞微生物細胞中的DNA分子。

在利用紫外線照射前，適量噴灑消毒液，可強化消毒效果。（4）自來水通常采用

氯氣消毒。

探究點三微生物的純培養(yǎng)

＞情境探疑

1.結合倒平板的操作程序請?zhí)骄浚?/p>

圖一圖二

（1）如圖一所示，為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？

提示通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基C

(2汝I圖二所示，從防止雜菌污染的角度思考，為什么培養(yǎng)基冷卻凝固后將平板

倒置？

提示可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。

(3)培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到5()°C左右時，才能用來倒平板。可用什么辦法來

估計培養(yǎng)基的溫度？

提示可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺溫度下降到剛剛不燙手即可。

2.下圖是平板劃線操作的示意圖，據(jù)圖回答下列問題：

小婪*廣

abcd

efgh

(1)用字母和箭頭表示平板劃線操作的正確步驟：

提示d—b-f—a—e—c—h-g

(2)為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結束

時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？

提示操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培

養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結束后，接種環(huán)上殘留的菌種,

使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次

數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到單個菌落。劃線結束后

需要灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操

作者。

⑶在第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃

線？

提示劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末

端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細

菌繁殖而來的菌落。

(4)接種結束后，為什么要將一個未接種的培養(yǎng)基和一個己接種的培養(yǎng)基放在一

起培養(yǎng)，未接種的培養(yǎng)基表面如果有菌落生長，說明了什么？

?o

①②

將接種后的平板①和一個

未接種的平板②倒置，

放入28C左右的恒溫培

養(yǎng)箱中培養(yǎng)24~48h

提示培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基的作用是對照，未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1?2d

后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的。若有菌落形成，說明培養(yǎng)基滅菌不

徹底，或培養(yǎng)基被污染了，需要重新制備。

?歸納提升

1.平板劃線操作及培養(yǎng)結果

接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線，將聚集的菌種逐步分散到培養(yǎng)基的表面。平

板劃線示意圖(A)及培多后菌落分布示意圖(B)如下圖所示。

AB

2.平板劃線操作的注意事項

(1)蘸取菌液前及每次劃線之前都需要灼燒接種環(huán)，劃線操作結束后仍需灼燒接

種環(huán)，三種灼燒的目的不同。

目的項目

慈取菌液前灼燒避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染菌種

殺死上一次劃線結束后接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃

每次劃線前灼燒

線時接種環(huán)上的菌種直接來源于上一次劃線的末端

及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免菌種污染環(huán)境和感染

劃線操作結束后灼燒

操作者

(2)在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進行劃線，以免溫度過高殺死菌種。

(3)除第一次劃線外，每次劃線都從上一次劃線的末端開始，這樣能使細菌的數(shù)

目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。

(4)劃線時用力大小要適當，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。

［例5］下列關于制備固體培養(yǎng)基時倒平板的敘述，正確的是（）

A.倒好的培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿要進行干熱滅菌

B.應將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上

C.為防止微生物侵入培養(yǎng)基，要在酒精燈火焰旁進行操作

D.倒好培養(yǎng)基后，立即將平板倒過來放置，不需要冷凝

答案C

解析應該在倒平板之前將培養(yǎng)基進行高壓蒸汽滅菌，將培養(yǎng)皿進行干熱滅菌，

A錯誤；倒平板時，用左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶

中的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)瓜，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋，B錯誤；為防止微生物侵

入培養(yǎng)基，要在酒精燈火焰旁進行操作，C正確；倒好培養(yǎng)基后，等培養(yǎng)基冷凝

后再將平板倒過來放置，D錯誤。

［例6］為純化菌種，在固體培養(yǎng)基上劃線接種分解尿素的細菌，培養(yǎng)結果如圖所

示。下列敘述錯誤的是（）

A.為保證無菌操作，接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌

B.倒平板后需間歇晃動，以保證表面平整

C.圖中I、II區(qū)的細菌數(shù)量均太多，應從III區(qū)挑取單菌落

D.該實驗結果因出現(xiàn)單菌落，能達到菌種純化的目的

答案B

解析為保證無菌操作，接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌，A正確；倒平板時

需左三圈，右三圈的輕輕晃動，以保證表面平整，B錯誤；圖中I、H區(qū)的細菌

數(shù)量均太多，應從ni區(qū)挑取單菌落，c正確；該實驗的in區(qū)已經(jīng)出現(xiàn)由單個細菌

繁殖而形成的菌落，因此已經(jīng)達到菌種純化的目的，D正確。

I課堂小結

思維導圖晨讀必背

1.培養(yǎng)基中一般都含有碳源、氮源、水和無機鹽等營養(yǎng)物質。

2.消毒的目的是殺死物體表面或內部一部分微生物；滅菌則

是殺死物體內外所有的微生物，包括芽抱和抱子。

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3.實驗室常用煮沸消毒法、巴氏消毒法和使用化學藥劑或紫

?網(wǎng):

外線進行消毒，常用的滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌和

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濕熱滅菌等。

4.微生物的純培養(yǎng)包括配制培養(yǎng)基、滅菌、接種、分離和培

養(yǎng)等步驟。

隨堂檢測

1.微生物培養(yǎng)過程中，要十分重視無菌操作，現(xiàn)代生物學實驗中的許多方面也要

進行無菌操作，防止雜菌污染。請分析下列操作中錯誤的是（）

A.自來水常用氯氣進行消毒

B.接種操作要在酒精燈火焰附近進行

C.大多數(shù)培養(yǎng)基要進行濕熱滅菌

D.加入培養(yǎng)基中的指示劑和染料不需要滅菌

答案D

解析水源常用氯氣消毒，A正確；酒精燈火焰附近存在一個無菌區(qū)，為了避免

雜菌污染，接種操作要在酒精燈火焰附近進行，B正確；大多數(shù)培養(yǎng)基要進行濕

熱滅菌，C正確；加入培養(yǎng)基中的指示劑和染料也需要滅菌，D錯誤。

2.下列是對四種微生物的能源、碳源、氮源、新陳代謝類型的描述，正確的一組

是（）

選項微生物種類乳酸菌根瘤菌硝化細菌衣藻

能源糖類光能光能

ANH3

B碳源糖類CO2CO2CO2

C氮源NOJN2NH?NCh

D代謝類型異養(yǎng)厭氧型自養(yǎng)好氧型自養(yǎng)好氧型自養(yǎng)好氧型

答案C

解析根瘤菌不能利用光能，A錯誤；根瘤菌能固氮，但不能自己制造有機物，

它的碳源不是CO2,B錯誤；乳酸菌的氮源是NO"根瘤菌能固氮、氮源是N2,

硝化細菌的氮源是NFh,衣藻的氮源是NCK,C正確；根瘤菌的代謝類型是異

養(yǎng)好氧型，D錯誤。

3.A?D依次表示倒平板、接種的位置，以及劃線法接種的路徑示意圖，錯誤的

是（）

答案D

解析倒平板時，用左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大干瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中

的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋，防止空氣中的雜菌污染，A

正確；接種時，在酒精燈火焰附近，左手將培養(yǎng)皿打開一條縫隙，右手將沾有菌

種的接種環(huán)迅速伸入平板內，B正確；劃線時要從上一次劃線的末端開始進行，

讓菌種來源于上一次劃線末端，C正確、D錯誤c

4.下圖為實驗室培養(yǎng)和純化大腸桿菌過程中的部分操作步驟，下列說法錯誤的是

)

④

A.①②③步驟操作時需要在酒精燈火焰旁進行

B.步驟①中待倒入的培養(yǎng)基冷卻后蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋

C.步驟③中，每次劃線前后都需對接種環(huán)進行滅菌處理

D.劃線結束后，將圖④平板倒置后放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

答案B

解析分析題圖可知，①是倒平板，②是用接種環(huán)蘸取菌液，③是進行平板劃線,

④是培養(yǎng)。①②③步驟操作時需要在酒精燈火焰旁進行，以防止雜菌污染，A正

確；倒完平板后應立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋，以防止雜菌污染，B錯誤；每次劃線

前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線

時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使

每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到單菌落，C正確；劃線結束后，將平

板倒置后放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，可以避免培養(yǎng)基中的水分過快地揮發(fā)和防止皿蓋上

的水珠落入培養(yǎng)基造成污染，D正確。

課后?分層訓練

（時間:30分鐘）

基礎對點

知識點1培養(yǎng)基的配制

1.關于微生物的營養(yǎng)，下列說法正確的是（）

A.同一種物質不可能既作碳源又作氮源

B.除水以外的無機物僅提供無機鹽

CJL是碳源都能提供能量

D.無機氮源也可能提供能量

答案D

解析對異養(yǎng)微生物來說，含C、H、0、N的化合物既是碳源，又是氮源，如

牛肉膏，A錯誤；CO2和N2是無機物，也是某些微生物的碳源和氮源，B錯誤;

有機碳源能提供能量，無機碳源不能提供能量，C錯誤；硝化細菌可利用體外

NH3氧化獲得能量，D正確。

2.下列關于微生物實驗室培養(yǎng)的敘述，正確的是（）

A.制備培養(yǎng)基時，應先滅菌后定容再倒平板

B.培養(yǎng)霉菌時需將培養(yǎng)基的pH調至中性或弱堿性

C.培養(yǎng)乳酸桿菌時需要在培養(yǎng)基中添加維生素

D.培養(yǎng)破傷風芽抱桿菌時需要提供有氧的條件

答案C

解析制備培養(yǎng)基時，應先定容后滅菌再倒平板，A錯誤；培養(yǎng)霉菌時需將培養(yǎng)

基的pH調至酸性，B錯誤；維生素是乳酸桿菌生長繁殖所必需的，但其自身不

能合成，因此培養(yǎng)乳酸桿菌時需要在培養(yǎng)基中添和維生素，C正確：破傷風芽狗

桿菌屬于厭氧菌，培養(yǎng)破傷風芽泡桿菌時需要提供無氧的條件，D錯誤。

知識點2無菌技術

3.防止雜菌入侵，獲得純凈的培養(yǎng)物是研究和應用微生物的前提。下列敘述錯誤

的是（）

A.實驗室里可用化學藥物或紫外線對物體表面或空氣進行消毒

B.實驗室里不可吃東西，離開時一定要洗手以防被微生物感染

C.接種環(huán)、接種針等用具應在酒精燈火焰的內焰部位灼燒滅菌

D.使用后的培養(yǎng)基在丟棄前一定要進行滅菌處理，以免污染環(huán)境

答案C

解析實驗室里可以用紫外線或化學藥物進行消毒，A正確；實驗室中，不可吃

東西、喝水，離開實驗室時一定要洗手，以防被微生物感染，B正確；接種環(huán)、

接種針等金屬用具，應在酒精燈火焰的充分燃燒層（外焰）灼燒滅菌，C錯誤；使

用后的培養(yǎng)基丟棄前一定要進行滅菌處理，以免污染環(huán)境，D正確。

4.金黃色葡萄球菌有很強的致病力，可能引起食物中毒，利用該菌進行實驗，結

束后的做法不正確的是（）

A.對接種環(huán)進行灼燒處理

B.帶菌培養(yǎng)基經(jīng)高壓蒸汽鍋滅菌后倒掉

C.帶菌培養(yǎng)基經(jīng)加熱后才能倒掉

D.接種后雙手必須用肥皂洗凈，再用體積分數(shù)為75%的酒精棉球擦拭

答案C

解析接種環(huán)屬于金屬用具，所以要用灼燒滅菌的方法進行滅菌處理，A正確；

為了避免對環(huán)境造成污染，帶菌培養(yǎng)基必須經(jīng)過高壓蒸汽滅菌后才能被倒掉，加

熱后不一定能將細菌殺死，B正確、C錯誤；實驗結束后，對實驗者的雙手必須

進行消毒，一般用洗滌劑洗滌或者酒精擦拭，D上確。

5.下列有關無菌技術的說法，正確的是（）

A.無菌技術的關鍵是殺滅實驗室中所有的微生物

B.培養(yǎng)微生物的試劑和器具都要進行高壓蒸汽滅菌

C.經(jīng)巴氏消毒法處理的食品因微生物未被徹底消滅，不能在常溫下長期保存

D.在無菌技術中，若處理對象為液體，則只能消毒，不能滅菌

答案c

解析無菌技術的關鍵是防止雜菌的污染，A錯誤；培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基一般用

高壓蒸汽滅菌，微生物的接種工具，如接種針、接種環(huán)或其他金屬用具一般通過

酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒來滅菌，B錯誤；經(jīng)巴氏消毒法處理的食品因微生

物未被徹底消滅，不能在常溫下長期保存，C正確；在無菌技術中，若處理對象

為液體，可以用高壓蒸汽滅菌法滅菌，D錯誤。

知識點3微生物的純培養(yǎng)

6.如圖是實驗室培養(yǎng)和純化酵母菌過程中的部分操作步驟，下列說法錯誤的是

()

①②③④

A.①步驟使用的培養(yǎng)基已經(jīng)滅菌

B.①②③步驟操作時均需要在酒精燈火焰旁進行

C.④在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)時需要將平板倒置

D.④操作過程中，需灼燒接種環(huán)5次

答案D

解析①為倒平板，該步驟使用的培養(yǎng)基已經(jīng)滅菌，A正確；①②③步驟操作時

需要在酒精燈火焰旁進行，防止被雜菌污染，B正確；④在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)時

需要將平板倒置，防止冷凝水滴入培養(yǎng)基，造成污染，C正確；每次劃線前后都

要灼燒接種環(huán)，因此④操作過程中，需灼燒接種環(huán)6次，D錯誤。

7.如圖是倒平板的操作，下列相關敘述錯誤的是()

甲乙丙丁

A.正確的操作順序應該是丙一乙一甲一丁

B.甲在酒精燈火焰附近進行可以避免雜菌污染

C.丁操作必須要等待平板冷卻凝固后才能進行

D.培養(yǎng)基應冷卻到50C倒平板是因為該溫度下不易受雜菌污染

答案D

解析倒平板正確的操作順序應該是丙一乙一甲一丁，A正確；將培養(yǎng)基倒入培

養(yǎng)皿（甲），在酒精燈火焰附近進行可以避免雜菌污染，B正確；丁操作為將培養(yǎng)

基倒置，必須要等待平板冷卻凝固后才能進行，C正確；培養(yǎng)基冷卻到5（）C時

既不燙手，也不發(fā)生凝固，適宜進行倒平板，而不是防止雜菌污染，D錯誤。

8.下列有關微生物的分離與培養(yǎng)的敘述，錯誤的是（）

A.獲得純培養(yǎng)物的關鍵是防止雜菌污染

B.倒置平板可防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水滴落造成污染

C.倒平板時將培養(yǎng)皿的蓋拿開，以便于將錐形瓶中的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿

D.檢驗培養(yǎng)基是否被雜菌污染的最有效方法是將未接種的培養(yǎng)基放在恒溫箱中

培養(yǎng)

答案C

解析倒平板時用食指和拇指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，使其恰好能

讓錐形瓶瓶口伸入，隨后倒入培養(yǎng)基，C錯誤。

綜合提升

9.接種微生物的方法很多，平板劃線法是最常用的一利％如圖是平板劃線示意圖,

劃線的順序為①②③④。操作方法中錯誤的是（）

A.劃線操作時，將沾有菌種的接種環(huán)插入培養(yǎng)基

B.平板劃線后培養(yǎng)微生物時要倒置培養(yǎng)

C.不