基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)課程實(shí)驗(yàn)教學(xué)指導(dǎo)手冊(cè)前言本手冊(cè)旨在為基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)相關(guān)課程的實(shí)驗(yàn)教學(xué)提供系統(tǒng)性指導(dǎo)，幫助學(xué)生更好地理解實(shí)驗(yàn)原理、掌握實(shí)驗(yàn)技能、培養(yǎng)科學(xué)思維與創(chuàng)新能力?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)是連接理論知識(shí)與臨床實(shí)踐的橋梁，是醫(yī)學(xué)教育中不可或缺的重要環(huán)節(jié)。通過(guò)本手冊(cè)，期望學(xué)生能夠規(guī)范操作，認(rèn)真觀察，如實(shí)記錄，深入分析，并最終形成嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的科學(xué)態(tài)度和獨(dú)立開(kāi)展科研工作的初步能力。本手冊(cè)適用于醫(yī)學(xué)各專業(yè)本科生及相關(guān)教學(xué)人員，各院校可根據(jù)自身教學(xué)大綱和實(shí)驗(yàn)室條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整與補(bǔ)充。第一章實(shí)驗(yàn)室規(guī)則與安全1.1實(shí)驗(yàn)室基本行為規(guī)范進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室前，必須認(rèn)真預(yù)習(xí)相關(guān)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、原理、步驟及注意事項(xiàng)。穿著實(shí)驗(yàn)服是基本要求，長(zhǎng)發(fā)者需束發(fā)，禁止穿拖鞋、背心等暴露衣物。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)保持安靜、整潔，不得進(jìn)行與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的活動(dòng)，嚴(yán)禁吸煙、飲食及飲用任何飲品。實(shí)驗(yàn)臺(tái)面應(yīng)及時(shí)清理，實(shí)驗(yàn)物品擺放有序。1.2實(shí)驗(yàn)安全通用原則安全是實(shí)驗(yàn)工作的首要前提。必須嚴(yán)格遵守各項(xiàng)操作規(guī)程，對(duì)不明確的操作步驟，應(yīng)及時(shí)向指導(dǎo)教師請(qǐng)教，不得擅自嘗試。熟悉實(shí)驗(yàn)室消防器材（如滅火器、消防栓）、緊急噴淋、洗眼器及急救箱的位置和使用方法。涉及有毒、有害、易燃、易爆、腐蝕性或放射性物質(zhì)時(shí)，務(wù)必在教師指導(dǎo)下進(jìn)行操作，并采取必要的防護(hù)措施（如佩戴手套、護(hù)目鏡、防毒面具等）。了解所用試劑的安全技術(shù)說(shuō)明書（SDS/MSDS）信息。1.3生物安全特別注意事項(xiàng)對(duì)于涉及病原微生物、人體組織、血液或體液等生物材料的實(shí)驗(yàn)，必須嚴(yán)格遵守生物安全等級(jí)要求。操作此類材料時(shí)，應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行（如適用），避免產(chǎn)生氣溶膠。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，雙手及操作臺(tái)需徹底消毒。生物廢棄物（如污染的吸管、培養(yǎng)皿、針頭、動(dòng)物尸體等）必須分類收集于指定容器內(nèi)，由專人按照規(guī)定程序處理，嚴(yán)禁隨意丟棄或與生活垃圾混放。1.4化學(xué)品安全與用電安全使用化學(xué)試劑前，務(wù)必仔細(xì)閱讀標(biāo)簽，確認(rèn)品名、濃度及危害標(biāo)識(shí)。取用試劑時(shí)，應(yīng)遵循“只出不進(jìn)”原則，防止污染原瓶。揮發(fā)性、刺激性試劑應(yīng)在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。妥善保管各類化學(xué)品，特別是強(qiáng)酸、強(qiáng)堿及易燃易爆品，防止誤用或意外泄漏。使用電器設(shè)備前，檢查線路是否完好，插頭插座是否匹配。濕手不得操作電器。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，不得擅自離開(kāi)正在運(yùn)行的實(shí)驗(yàn)設(shè)備。如遇漏電或觸電事故，應(yīng)立即切斷電源，并報(bào)告教師。1.5實(shí)驗(yàn)廢棄物處理實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生的廢液、固體廢棄物等必須嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室規(guī)定分類處理。不得將實(shí)驗(yàn)室廢棄物隨意倒入下水道或與生活垃圾混放。有機(jī)溶劑、重金屬?gòu)U液、含病原體廢液等應(yīng)倒入專用回收容器，并貼好標(biāo)簽注明成分和產(chǎn)生日期。破碎玻璃器皿應(yīng)放入專用利器盒或防刺破容器中。1.6意外事故處理與報(bào)告一旦發(fā)生實(shí)驗(yàn)事故（如灼傷、割傷、化學(xué)試劑濺灑、火災(zāi)、爆炸等），應(yīng)立即采取適當(dāng)?shù)膽?yīng)急處理措施，并第一時(shí)間向指導(dǎo)教師報(bào)告。輕微割傷應(yīng)立即用清水沖洗，然后用消毒液消毒并包扎；化學(xué)試劑濺到皮膚或眼睛，應(yīng)立即用大量流動(dòng)清水沖洗，必要時(shí)尋求醫(yī)療救助。不得隱瞞或擅自處理嚴(yán)重事故。第二章通用實(shí)驗(yàn)技能2.1常用玻璃儀器的清洗與干燥清潔的玻璃儀器是保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的基礎(chǔ)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和污物性質(zhì)選擇合適的清洗方法。一般先用自來(lái)水沖洗，再用毛刷蘸取洗滌劑刷洗，最后用蒸餾水或去離子水潤(rùn)洗2-3次。對(duì)于難以洗凈的油污或有機(jī)物，可用鉻酸洗液浸泡（注意安全，現(xiàn)用現(xiàn)配）。洗凈的儀器倒置時(shí)，器壁應(yīng)均勻濕潤(rùn)，不掛水珠。儀器干燥方法包括自然晾干、烘干（烘箱溫度一般控制在適當(dāng)范圍，精密量器不宜高溫烘干）、吹干（用吹風(fēng)機(jī)或氣流烘干器）及有機(jī)溶劑快干（如用少量乙醇或丙酮沖洗后晾干或吹干，適用于急需使用的儀器）。2.2基本測(cè)量?jī)x器的使用2.2.1移液器（移液槍）移液器是精確量取小體積液體的常用工具，使用時(shí)應(yīng)根據(jù)所需體積選擇合適量程的移液器，嚴(yán)禁超過(guò)量程使用。安裝吸頭時(shí)應(yīng)緊套牢固，避免漏氣。吸取液體時(shí)，緩慢按壓按鈕至第一停點(diǎn)，將吸頭垂直浸入液面下適當(dāng)深度（不宜過(guò)深，避免液體進(jìn)入移液器內(nèi)部），緩慢釋放按鈕，待液體完全吸入后移出。排放液體時(shí)，將吸頭貼壁，按壓按鈕至第一停點(diǎn)后稍作停頓，再按壓至第二停點(diǎn)以排空吸頭內(nèi)殘留液體。使用完畢后，調(diào)回最大量程，豎直放置于移液器架上。2.2.2天平實(shí)驗(yàn)室常用分析天平和托盤天平。使用天平前應(yīng)檢查水平，調(diào)零。稱量時(shí)，遵循“左物右碼”原則，不可直接用手接觸稱量物和砝碼，應(yīng)使用稱量紙或稱量瓶。揮發(fā)性、腐蝕性物品必須放在密閉容器中稱量。稱量完畢，及時(shí)清理天平，將砝碼歸位。2.2.3pH計(jì)用于測(cè)量溶液的酸堿度。使用前需用標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液進(jìn)行校準(zhǔn)。測(cè)量時(shí)，將電極浸入待測(cè)溶液中，輕輕攪拌，待讀數(shù)穩(wěn)定后記錄。測(cè)量完畢，用蒸餾水沖洗電極，吸干水分后妥善保存（長(zhǎng)期不用應(yīng)浸泡在特定保存液中，短期可浸泡在蒸餾水中）。2.3基本操作技術(shù)2.3.1溶液的配制根據(jù)所需濃度（物質(zhì)的量濃度、質(zhì)量濃度、體積分?jǐn)?shù)等）和體積，準(zhǔn)確計(jì)算溶質(zhì)的用量。固體溶質(zhì)用分析天平稱量后溶解于適量溶劑中，再轉(zhuǎn)移至容量瓶定容；液體溶質(zhì)用量筒或移液管量取后稀釋定容。配制過(guò)程中需注意攪拌溶解，轉(zhuǎn)移時(shí)確保溶質(zhì)完全轉(zhuǎn)入容量瓶，定容時(shí)視線與刻度線相切。2.3.2離心技術(shù)離心是分離沉淀與上清液、密度不同的組分的常用方法。使用離心機(jī)時(shí)，樣品應(yīng)平衡（質(zhì)量相近，對(duì)稱放置），蓋好蓋子。根據(jù)離心目的選擇合適的離心速度和時(shí)間。離心過(guò)程中若發(fā)生異常震動(dòng)或噪音，應(yīng)立即停機(jī)檢查。離心結(jié)束后，待離心機(jī)完全停止方可打開(kāi)蓋子取出樣品。2.3.3過(guò)濾技術(shù)用于分離液體中的不溶性雜質(zhì)。常用濾紙過(guò)濾和減壓過(guò)濾（布氏漏斗、抽濾瓶、真空泵）。濾紙應(yīng)緊貼漏斗內(nèi)壁，濾紙邊緣低于漏斗邊緣。傾倒濾液時(shí)應(yīng)使用玻璃棒引流，液面低于濾紙邊緣。2.3.4顯微鏡使用顯微鏡是觀察微觀結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵工具。使用時(shí)，先低倍鏡觀察，調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋找到物象，再轉(zhuǎn)換高倍鏡，用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋調(diào)焦至清晰。觀察時(shí)，雙眼睜開(kāi)，左眼觀察目鏡，右眼可用于繪圖或記錄。注意保護(hù)鏡頭，避免物鏡與玻片碰撞。使用油鏡時(shí)，需在載玻片上滴加香柏油，使用后立即用擦鏡紙蘸取專用清潔劑擦拭干凈。第三章具體實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目指導(dǎo)（本章將根據(jù)不同基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)課程，如《醫(yī)學(xué)微生物學(xué)》、《醫(yī)學(xué)免疫學(xué)》、《生理學(xué)》、《生物化學(xué)》、《組織胚胎學(xué)》等，分設(shè)小節(jié)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目應(yīng)包含以下內(nèi)容：實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)材料與試劑、實(shí)驗(yàn)儀器與器材、實(shí)驗(yàn)步驟、預(yù)期結(jié)果與注意事項(xiàng)、思考題。此處以示例形式展示一個(gè)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的結(jié)構(gòu)，實(shí)際編寫時(shí)需詳細(xì)展開(kāi)。）3.1醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)示例：細(xì)菌的形態(tài)觀察與革蘭染色3.1.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握顯微鏡（油鏡）的正確使用方法。2.學(xué)習(xí)并掌握革蘭染色的原理、步驟及結(jié)果判斷。3.觀察常見(jiàn)細(xì)菌的基本形態(tài)、排列方式及革蘭染色特性。3.1.2實(shí)驗(yàn)原理細(xì)菌個(gè)體微小，需借助顯微鏡觀察。革蘭染色法是細(xì)菌學(xué)中最常用的鑒別染色法之一，基于細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成的差異，將細(xì)菌分為革蘭陽(yáng)性菌（G+）和革蘭陰性菌（G-）。G+菌細(xì)胞壁肽聚糖層厚，交聯(lián)度高，乙醇脫色時(shí)肽聚糖層脫水使孔徑縮小，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物不易被洗脫，仍保留紫色；G-菌細(xì)胞壁肽聚糖層薄，交聯(lián)度低，且外膜層含脂質(zhì)較多，乙醇脫色時(shí)脂質(zhì)被溶解，細(xì)胞壁通透性增加，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物被洗脫，復(fù)染后呈紅色。3.1.3實(shí)驗(yàn)材料與試劑1.菌種：葡萄球菌（G+）、大腸桿菌（G-）的斜面培養(yǎng)物。2.試劑：革蘭染色液（結(jié)晶紫染液、盧戈碘液、95%乙醇、稀釋復(fù)紅染液）、生理鹽水、香柏油、二甲苯（或鏡頭清潔劑）。3.1.4實(shí)驗(yàn)儀器與器材普通光學(xué)顯微鏡、載玻片、接種環(huán)、酒精燈、火柴、試管架、記號(hào)筆、擦鏡紙、吸水紙。3.1.5實(shí)驗(yàn)步驟1.涂片：取潔凈載玻片一張，中央滴一小滴生理鹽水。無(wú)菌操作下，用接種環(huán)分別取少量葡萄球菌和大腸桿菌菌落，分別在生理鹽水中研磨混勻，制成直徑約1cm的均勻薄層涂片。若為液體培養(yǎng)物，可直接取一環(huán)菌液涂片。2.干燥：將涂片自然晾干或在酒精燈火焰上方（勿直接烘烤）輕微加熱烘干。3.固定：手持載玻片一端，標(biāo)本面朝上，在酒精燈火焰外焰上來(lái)回快速通過(guò)2-3次，以玻片背面觸及皮膚不燙為宜。目的是殺死細(xì)菌，固定標(biāo)本，增加細(xì)胞對(duì)玻片的黏附力。4.染色：*初染：滴加結(jié)晶紫染液覆蓋標(biāo)本，染色1分鐘，水洗。*媒染：滴加盧戈碘液覆蓋標(biāo)本，作用1分鐘，水洗。*脫色：滴加95%乙醇，輕輕晃動(dòng)載玻片數(shù)秒至流下的乙醇無(wú)紫色（約30秒，視涂片厚度調(diào)整），立即水洗，終止脫色。*復(fù)染：滴加稀釋復(fù)紅染液，染色30秒，水洗。5.鏡檢：用吸水紙吸干或自然晾干后，滴加一滴香柏油于標(biāo)本處，用油鏡觀察。3.1.6預(yù)期結(jié)果與注意事項(xiàng)*預(yù)期結(jié)果：葡萄球菌（G+）呈紫色，球菌，常呈葡萄串狀排列；大腸桿菌（G-）呈紅色，桿菌，散在或短鏈狀排列。*注意事項(xiàng)：*涂片厚薄要適宜，過(guò)厚易造成脫色不完全，過(guò)薄則難以找到細(xì)菌。*固定時(shí)溫度不宜過(guò)高，以免菌體變形。*脫色是關(guān)鍵步驟，時(shí)間過(guò)短，G-菌可染成紫色；時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，G+菌可染成紅色。*油鏡使用后立即用擦鏡紙蘸取少量二甲苯（或鏡頭清潔劑）擦拭干凈。3.1.7思考題1.革蘭染色中，各步驟的作用是什么？哪一步是最關(guān)鍵的步驟，為什么？2.如果涂片未經(jīng)固定直接染色，會(huì)出現(xiàn)什么結(jié)果？3.除了革蘭染色，還有哪些常用的細(xì)菌鑒別染色法？（后續(xù)章節(jié)將繼續(xù)按照此模式編寫其他實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目，如生理學(xué)的“神經(jīng)干動(dòng)作電位的引導(dǎo)與觀察”、生物化學(xué)的“血糖濃度測(cè)定”、組織胚胎學(xué)的“上皮組織的觀察”等。）第四章實(shí)驗(yàn)報(bào)告撰寫規(guī)范實(shí)驗(yàn)報(bào)告是實(shí)驗(yàn)工作的總結(jié)與升華，是培養(yǎng)科學(xué)寫作能力的重要途徑。一份規(guī)范的實(shí)驗(yàn)報(bào)告應(yīng)包括以下幾個(gè)主要部分：4.1實(shí)驗(yàn)名稱、實(shí)驗(yàn)日期、實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)、實(shí)驗(yàn)者、學(xué)號(hào)、班級(jí)、指導(dǎo)教師4.2實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮?jiǎn)述本次實(shí)驗(yàn)希望達(dá)成的目標(biāo)和期望掌握的知識(shí)技能。4.3實(shí)驗(yàn)原理簡(jiǎn)明扼要地闡述實(shí)驗(yàn)所依據(jù)的核心理論知識(shí)和基本原理，必要時(shí)可輔以公式或簡(jiǎn)圖。4.4實(shí)驗(yàn)材料與方法列出實(shí)驗(yàn)所用的主要儀器、試劑、標(biāo)本等。方法部分應(yīng)簡(jiǎn)要描述實(shí)驗(yàn)的主要步驟和操作要點(diǎn)，重點(diǎn)突出，不必照抄實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)，但應(yīng)使他人能夠根據(jù)此描述重復(fù)實(shí)驗(yàn)。4.5實(shí)驗(yàn)結(jié)果這是實(shí)驗(yàn)報(bào)告的核心部分。應(yīng)客觀、真實(shí)、準(zhǔn)確地記錄實(shí)驗(yàn)過(guò)程中觀察到的現(xiàn)象、測(cè)量的數(shù)據(jù)、繪制的圖表（如曲線圖、直方圖、顯微鏡繪圖等）。數(shù)據(jù)應(yīng)進(jìn)行必要的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理（如計(jì)算平均值、標(biāo)準(zhǔn)差等）。圖表應(yīng)有明確的標(biāo)題和必要的標(biāo)注。對(duì)于陰性結(jié)果或異常結(jié)果，也應(yīng)如實(shí)記錄并分析原因。4.6討論對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行深入分析、解釋和闡述。將實(shí)驗(yàn)結(jié)果與預(yù)期結(jié)果進(jìn)行比較，分析其異同及原因。討論實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的問(wèn)題、誤差來(lái)源及改進(jìn)措施。結(jié)合所學(xué)理論知識(shí)，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的意義進(jìn)行探討，提出自己的見(jiàn)解。討論應(yīng)言之有物，避免空泛。4.7結(jié)論根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論，簡(jiǎn)明扼要地總結(jié)本次實(shí)驗(yàn)所獲得的主要認(rèn)識(shí)和最終結(jié)論，應(yīng)與實(shí)驗(yàn)?zāi)康南嗪魬?yīng)。4.8參考文獻(xiàn)（可選）若引用了相關(guān)文獻(xiàn)資料，應(yīng)列出參考文獻(xiàn)。第五章附錄5.1常用試劑的配制方法（如PBS緩沖液、生理鹽水、各種染色液等的具體配制步驟和注意事項(xiàng)）5.2常用儀器的維護(hù)與保養(yǎng)（如顯微鏡、離心機(jī)、移液器等的日常