稀土礦潛在新菌株KC159的分析鑒定 論文（設(shè)計(jì)）題目稀土礦潛在新菌株KC159的分類(lèi)鑒定摘要稀土和合金被用于許多的設(shè)備中，比如電腦內(nèi)存、消費(fèi)電子產(chǎn)品、熒光燈等等。全球?qū)ο⊥猎氐男枨笸苿?dòng)了稀土礦產(chǎn)資源的開(kāi)發(fā)和生產(chǎn)，尾礦和污染也隨之增多。尾礦微生物對(duì)稀土尾礦的修復(fù)具有重要意義。因此，確定稀土尾礦系統(tǒng)中存在的物種具有重要意義。從我國(guó)白云鄂稀土礦尾礦樣品中分離出一種名為KC159的細(xì)菌。初步的16SrRNA基因序列分析結(jié)果表明，菌株KC159應(yīng)歸屬于奇異球菌屬。本實(shí)驗(yàn)以一株從稀土礦中分離出來(lái)的奇異球菌屬的潛在新種KC159Deinococcussp.進(jìn)行研究，對(duì)其16SrRNA基因序列進(jìn)行分析，構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。從系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)可以發(fā)現(xiàn)該菌株與其它3株菌（DeinococcusgrandisJCM6269、DeinococcusradiotoleransJCM19173、DeinococcusdaejeonensisJCM16918）在一個(gè)分支，它們的親緣關(guān)系較近，將KC159Deinococcussp.分別與這3菌株進(jìn)行核酸分子雜交，雜交結(jié)果表明，KC159與各菌株的DNA同源性低于70%。為了進(jìn)一步確定該菌株的分類(lèi)地位，對(duì)其生理生化特征（產(chǎn)色素、產(chǎn)酸、溫度、pH、鹽濃度、對(duì)碳氮源的利用）進(jìn)行檢測(cè)。以上述3株菌做為參考菌株一同進(jìn)行生理生化特征實(shí)驗(yàn)，通過(guò)產(chǎn)色素、產(chǎn)酸、耐溫、耐酸堿、耐鹽、碳源利用、氮源利用實(shí)驗(yàn)，得出菌株KC159生長(zhǎng)的溫度范圍為20o-40o，pH值為6-8，氯化鈉濃度從0%-3%(w/v)，最佳條件分別是溫度28oC，pH值7和氯化鈉1%。產(chǎn)酸情況以及對(duì)不同碳氮源的利用與3株參考菌株存在不同程度的差異。綜合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，表明該菌株與其它3株參考菌株存在著顯著差異，因此該菌株作為一個(gè)新種獨(dú)立存在于分類(lèi)單元。由于該株菌從稀土礦中分離得到，其生境較為苛刻，可將該菌株應(yīng)用到礦廠開(kāi)采不當(dāng)導(dǎo)致的環(huán)境污染治理中。關(guān)鍵詞：稀土礦；放線菌；奇異球菌屬屬；16SrRNA基因；生理生化AbstractRareearthandalloysareusedinmanydevicesthatpeopleuseeverydaysuchascomputermemory,consumerelectronics,fluorescentlightingandmuchmore.TheglobaldemandforRareearthelementmotivatesnewexploitationandproductionforrareearthmineralresources,andnumbersoftailingsandpollutionfollow.MicroorganismintailingsissignificantforRareearthminetailingsrepairing.Thusitisimportanttoidentifythespeciespresentintheserareearthtailingsystems.Inthecourseofisolatingmicro-organismsfromrareearthminetailingssamplescollectedfromBayanoboinChina,bacteriumdesignatedstrainKC159,wasisolated.StrainKC159ofstudywasisolatedfromarareearthminesamplecollectedfromBayanoboofInnerMongoliaregion,northwestofChina.Fromthesystemevolvedtreesbyanalyzingits16SrRNAgenesequence,strainKC159isfoundinabranchwiththreeotherstrains（DeinococcusgrandisJCM6269、DeinococcusradiotoleransJCM19173、DeinococcusdaejeonensisJCM16918）ofbacteria,andtheirrelativesarecloser.AhybridofstrainKC159iscarriedoutwiththethreestrains,andtheresultsshowthatthehomogeneityoftheDNAislow.Inordertofurtheridentify,nowitsphysicalcharacteristics(solublepigmentproduction,temperature,pH,saltconcentration,carbonandnitrogensourceutilization)isanalyzed.Itsphysicalcharacteristicsarecarriedoutwiththethreestrainsofbacteriaasareferencestrain,AGram-positiveandstrainKC159fromrareearthminewasinvestigatedbyapolyphasictaxonomicapproach.Shortrodsbacteriumwasaerobic,non-motileandnon-spore-forming.StrainKC159grewattemperaturesrangingfrom20to40oC,atpH6to8,andwithNaClconcentrationsfrom0%to3%(w/v),theoptimumconditionswere28oC,pH7andNaCl1%,respectively.Inaddition,theproductionofacidandtheuseofdifferentsourcesofcarbonweredifferentfromthethreestrains.BytheaboveresultsshowthatstrainKC159isremarkabledifferenceswithotherthreereferencestrains.Therefore,strainKC159existsasanewspeciesinthetaxon.Duetothestrainsofbacteriaisolatedfromrareearthmine,thehabitatisrelativelyserious,itsphysicalcharacteristicscanbeappliedtoenvironmentpollutionofminingmine.Keywords:Rareearthmine,Actinomycete,Deinococcus,16SrRNAgenesequence,PhysiologyandBiochemistry②在此基礎(chǔ)培養(yǎng)基分別加入6種氮源：硝酸鹽、色氨酸、谷氨酸、L-絲氨酸、尿素、明膠。pH7.2-7.4，121°C滅菌15min。生理生化測(cè)試選取上述3株菌（DeinococcusgrandisJCM6269、DeinococcusradiotoleransJCM19173、DeinococcusdaejeonensisJCM16918）作為參考菌株與KC159Deinococcussp.一同進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，具體方法如下：（1）耐溫測(cè)試：用參考菌株D.grandisJCM6269以及D.radiotoleransJCM19173和D.daejeonensisJCM16918對(duì)菌株KC159進(jìn)行進(jìn)一步表型鑒定，在ISP2的培養(yǎng)基中以4、15、20、25、28、30、37、40、45、50、55和60℃的溫度下測(cè)試，在7、14、21天觀察其生長(zhǎng)情況并記錄。（2）耐酸堿測(cè)試：將這4株菌分別接種到pH梯度培養(yǎng)基上，在不同pH緩沖液下，ISP2以0.5pH為單位的間隔調(diào)整到pH4-11，置于28℃培養(yǎng)箱連續(xù)培養(yǎng)，在7、14、21天觀察其生長(zhǎng)情況并記錄。（3）耐鹽測(cè)試：將這54株菌分別接種到鹽濃度梯度培養(yǎng)基上，過(guò)添加1-20%(w/v)NaCl來(lái)測(cè)試鹽度依賴(lài)性生長(zhǎng)，在7、14、21天觀察其生長(zhǎng)情況并記錄。（4）過(guò)氧化氫(v/v)溶液和氧化酶試劑(bioMerieux)分別檢測(cè)過(guò)氧化氫酶和氧化酶活性。（5）脂肪酸分析：菌種生長(zhǎng)在相同的條件下，菌種KC159和三個(gè)相關(guān)菌株生長(zhǎng)在TSA(BD)上，并且在28°時(shí)采集。用SherlockVersion6.0(MIDI數(shù)據(jù)庫(kù):TSBA6)鑒定了相應(yīng)的的脂肪酸。（6）對(duì)碳、氮源利用分析：配制基礎(chǔ)培養(yǎng)基，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入不同的碳源或氮源（C20種，N6種），并在碳源培養(yǎng)基中加入溴甲酚紅為指示劑，接種培養(yǎng)，看其是否利用或產(chǎn)酸。第三章結(jié)果與分析3.1.系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析結(jié)果構(gòu)建了系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，下圖3.1則為系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)所展示的結(jié)果：DeinococcusDeinococcusKC159(KU992913)829079999910069637790799999100696377DeinococcusdaejeonensisMJ27T(JF806527)DeinococcusradiotoleransC1T(KC771028)DeinococcusdesertiVCD115T(DeinococcusdesertiVCD115T(AY876378)DeinococcusgrandisDSM3963T(Y11329)99DeinococcusnavajonensisKR-114T(AY743259)Deinococcushohokamensis99DeinococcusnavajonensisKR-114T(AY743259)DeinococcushohokamensisKR-40T(AY743256)100DeinococcuswulumuqiensisR12T(EU025028)100DeinococcuswulumuqiensisR12T(EU025028)100DeinococcusradioduransDSM20539T(Y11332100DeinococcusradioduransDSM20539T(Y11332)DeinococcusxibeiensisR13T(FJ439568)DeinococcusdepolymeransTDMA-24T(AB264134)DeinococcusindicusWt/1aTDeinococcusdepolymeransTDMA-24T(AB264134)DeinococcusindicusWt/1aT(AJ549111)DeinococcuscaeniHo-08T(DeinococcuscaeniHo-08T(DQ017709)DeinococcusaquaticusPB314T(DQ017708)100DeinococcuscitriNCCP-154T(AB558498)100DeinococcuscitriNCCP-154T(AB558498)DeinococcusreticulitermitisTM-1T(HM214546)DeinococcusaquatilisCCUG53370T(DeinococcusaquatilisCCUG53370T(AM940971)DeinococcusgobiensisI-0T(EU427464)DeinococcusyunweiensisYIM007T(DQ344634)Deinococcusmetalli1PNM-19TDeinococcusyunweiensisYIM007T(DQ344634)Deinococcusmetalli1PNM-19T(JQ608330)Deinococcusaerolatus5516T-9T(EU622978)Deinococcusaerolatus5516T-9T(EU622978)Deinococcusaerophilus5516T-11T(EU622979)9985DeinococcusfrigensAA692T(AJ585981)DeinococcushumiMK039985DeinococcusfrigensAA692T(AJ585981)DeinococcushumiMK03T(GQ339889)8084DeinococcusmarmorisAA63T(AJ585986)DeinococcussaxicolaAA14448084DeinococcusmarmorisAA63T(AJ585986)DeinococcussaxicolaAA1444T(AJ585984)DeinococcusradiopugnansATCC19172T(Y11334)10071DeinococcusradiopugnansATCC19172T(Y11334)10071Deinococcusswuensis(JQ991923) Deinococcusswuensis(JQ991923)圖3.1根據(jù)16SrRNA基因序列構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)明確表明，菌株KC159位于奇異球菌屬單系中，與D.grandis、D.radiotolerans和D.daejeonensis的類(lèi)型菌株形成一個(gè)明顯的亞群(高引導(dǎo)支持)。從系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)可以發(fā)現(xiàn)該菌株與其它3株菌（DeinococcusgrandisJCM6269、DeinococcusradiotoleransJCM19173、DeinococcusdaejeonensisJCM16918）在同一個(gè)分支，它們的親緣關(guān)系較近。通過(guò)對(duì)它們的16SrRNA基因序列進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)這3株菌（DeinococcusgrandisJCM6269、DeinococcusradiotoleransJCM19173、DeinococcusdaejeonensisJCM16918）與KC159Deinococcussp.的16SrRNA基因序列相似度均大于97%。3.2.核酸分子雜交結(jié)果將3株菌（DeinococcusgrandisJCM6269、DeinococcusradiotoleransJCM19173、DeinococcusdaejeonensisJCM16918）分別與KC159Deinococcussp.的基因組總DNA進(jìn)行雜交。雜交結(jié)果如下表2.3所示。表2.3核酸雜交結(jié)果雜交菌株DNA的同源性159&626928.8±0.6%159&1917331.2±2.9%159&1691828.4±0.3%由表2.3可以看出，雜交結(jié)果表明，KC159Deinococcussp.與各菌株DNA的同源性均小于70%。因此，KC159Deinococcussp.作為一個(gè)新種獨(dú)立存在于分類(lèi)單元。初步的16SrRNA基因序列分析結(jié)果表明，菌株KC159T應(yīng)歸屬于奇異球菌屬，該屬由57個(gè)物種組成。從空氣、塵埃、土壤、水、礦井和活性污泥等不同生境分離的奇異球菌屬物種以無(wú)運(yùn)動(dòng)、無(wú)孢子形成、需氧菌棒為特征。3.3.不同溫度、pH、鹽濃度對(duì)菌株生長(zhǎng)能力的影響通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)記錄分析得出KC159Deinococcussp.短棒菌屬為好氧菌，無(wú)運(yùn)動(dòng)，無(wú)孢子形成。菌株KC159生長(zhǎng)的溫度范圍為20o-40o，pH值為6-8，氯化鈉濃度從0%-3%(w/v),最佳條件分別是溫度28oC,pH值7和氯化鈉1%。對(duì)各項(xiàng)條件的生理生化反應(yīng)的結(jié)果如表3.1所示。表3.1對(duì)各項(xiàng)條件的生理生化反應(yīng)結(jié)果菌號(hào)15962691917316918厭氧wwwwpH6-86-86-86-8NaCl（％）1-31-31-21-3℃20-4020-4020-4520-40注：“W”代表反應(yīng)較弱。3.4.脂肪酸分析及對(duì)氧化氫酶和氧化酶活性的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明細(xì)胞氧化酶呈陰性，說(shuō)明過(guò)氧化氫酶呈陽(yáng)性，說(shuō)明細(xì)胞KC159Deinococcussp.為好氧菌。KC159Deinococcussp.對(duì)氧化氫酶和氧化酶的反應(yīng)如表3.2所示。表3.2對(duì)氧化氫酶和氧化酶的反應(yīng)菌號(hào)15962691917316918氧化酶++++過(guò)氧化氫酶注：“+”表示陽(yáng)性，“-”表示陰性脂肪酸分析由Sasser描述，菌種生長(zhǎng)在相同的條件下，菌種KC159和三個(gè)相關(guān)菌株（DeinococcusgrandisJCM6269、DeinococcusradiotoleransJCM19173、DeinococcusdaejeonensisJCM16918）生長(zhǎng)在TSA(BD)上和在28°采集。用SherlockVersion6.0(MIDI數(shù)據(jù)庫(kù):TSBA6)鑒定了相應(yīng)的的脂肪酸。對(duì)于其他化學(xué)調(diào)查,生物質(zhì)同樣是來(lái)自24小時(shí)28°下的TSA(BD)。主要細(xì)胞脂肪酸為C15:1ω6c(23.81%)、C17:1ω6c(13.84%)、C17:0(11.53%)和C16:1ω7c/C16:1ω6c(15.03%)。對(duì)細(xì)胞壁肽聚糖進(jìn)行了檢測(cè)。為了提取和分析醌類(lèi)和極性脂質(zhì)，采用Minnikin等人報(bào)道的綜合方法，采用HPLC(Kroppenstedt,1982)進(jìn)行分析。KC159的脂肪酸組成主要為C15:1ω6c(23.81%)、C16:1ω7c/C16:1ω6c(15.03%)、C17:1ω6c(13.84%)和C17:0(11.53%)，脂肪酸的分析如下表3.2所示。表3.2菌株KC159與相關(guān)菌株的脂肪酸含量(>0.1%)比較Fattyacid15962691917316918iso-C10:00.14anteiso-C13:07C13:00.280.970.541.80iso-C14:00.200.440.411.20iso-C15:1F0.150.13iso-C15:03.609.538.3211.46anteiso-C15:00.230.470.540.28C15:1ω8c0.351.430.271.33C15:1ω6c23.8134.3030.6039.10續(xù)表3.2Fattyacid15962691917316918iso-C16:1H1.901.351.971.38iso-C16:04.673.244.335.74C16:1ω9c0.32C16:1ω5c1.061.621.281.26C16:05.934.384.542.84iso-C17:073.65anteiso-C17:08C17:1ω8c4.383.212.311.81C17:1ω6c13.846.887.104.09C17:011.534.925.614.80C16:03OH0.19iso-C18:00.21C18:00.240.57iso-C15:1H/C13:03OH0.631.931.572.25C16:1ω7c/C16:1ω6c15.0313.8216.328.54anteiso-C17:1B/isoI2.872.663.532.063.5對(duì)不同碳氮源的利用及產(chǎn)酸情況通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)記錄分析得出：這4株菌對(duì)甘油、D-半乳糖、D-葡萄糖、果糖、甘露糖、麥芽糖、蔗糖、淀粉、糖原、木糖醇、山梨醇、均能利用；對(duì)赤蘚糖醇、D-阿拉伯糖、L-阿拉伯糖、半乳糖醇、D-甘露醇、乳糖的利用程度不同；對(duì)山梨糖、鼠李糖并不利用。通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)記錄分析得出：這4株菌對(duì)赤蘚糖醇、D-阿拉伯糖、山梨糖、鼠李糖、半乳糖醇、半乳糖醇、肌糖不產(chǎn)酸，對(duì)其他物質(zhì)的產(chǎn)酸情況各不相同，具體請(qǐng)看下表。針對(duì)這4株菌利用碳氮源的情況不同統(tǒng)計(jì)如下：表3.3對(duì)不同碳源的利用及產(chǎn)酸情況6269利用6269產(chǎn)酸19173利用19173產(chǎn)酸159利用159產(chǎn)酸16918利用16918產(chǎn)酸甘油++++++++赤蘚糖醇+-D-阿拉伯糖--+L-阿拉伯糖--++-D-半乳糖+++++++-D-葡萄糖++++++++果糖++++++++甘露糖++++++++山梨糖鼠李糖半乳糖醇--+D-甘露醇--+-++++山梨醇+-+-++++N-乙酰氨基葡萄糖--++++++麥芽糖++++++++乳糖--+-++--蔗糖++++++++淀粉++++++++糖原++++++++木糖醇+++-++++注：“+”表示對(duì)其可利用，“-”表示無(wú)法利用“+”表示產(chǎn)酸，“-”表示不產(chǎn)酸3.6對(duì)不同氮源的利用通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)記錄分析得出：這4株菌對(duì)硝酸鹽還原以及色氨酸、L-絲氨酸的反應(yīng)呈陰性，說(shuō)明菌種對(duì)它們不能利用；對(duì)硝酸鹽、谷氨酸、尿素及明膠反應(yīng)呈現(xiàn)陽(yáng)性，說(shuō)明菌種對(duì)它們可利用。下表3.4即為菌株對(duì)不同氮源的利用情況。表3.4菌株對(duì)不同氮源的利用情況62691917315916198硝酸鹽還原硝酸鹽氧化成NO2-++++硝酸鹽氧化成N2+色氨酸谷氨酸++++L-絲氨酸尿素++++明膠水解++++注：“+”表示對(duì)其可利用，“-”表示無(wú)法利用第四章總結(jié)與討論4.1總結(jié)通過(guò)對(duì)16SrRNA基因序列的測(cè)序分析，驗(yàn)證了菌株KC159的系統(tǒng)發(fā)育位置。KC159與奇異球菌屬菌株的16SrRNA基因序列相似性最高。菌株KC159與大豬奇異球菌屬菌株JCM6269具有98.34%的相似性，98.07%與耐輻射球菌JCM19173相似，97.43%與耐輻射球菌JCM16918相似。16SrRNA基因序列與奇異球菌屬所有其他類(lèi)型菌株相似度均低于97%。系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)明確表明，菌株KC159位于奇異球菌屬單系中，與D.grandis、D.radiotolerans和D.daejeonensis的類(lèi)型菌株形成一個(gè)明顯的分支(高自舉值)。菌株KC159與D.grandisJCM6269、D.radiotolansJCM19173與D.daejeonensisJCM16918進(jìn)行DNA-DNA雜交，DNA-DNA雜交顯示KC159和三個(gè)菌株在基因水平親緣較低，即表明KC159和D.grandisJCM6269(28.8±0.6%),D.radiotolansJCM19173(31.2±2.9%)和D.daejeonensisJCM16918(28.4±0.3%)的低親緣性。測(cè)定菌株KC159T的基因組DNAG+C含量，結(jié)果為66.4mol%。在生理生化實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞氧化酶陰性，過(guò)氧化氫酶陽(yáng)性。短棒細(xì)菌為好氧非能動(dòng)菌，耐溫測(cè)試結(jié)果表明，KC159Deinococcussp.的生長(zhǎng)范圍為20℃-40℃，最適生長(zhǎng)溫度為28℃；耐酸堿測(cè)試結(jié)果表明，KC159Deinococcussp.的生長(zhǎng)范圍為pH6-8，最適pH為7；耐鹽測(cè)試結(jié)果表明，KC159Deinococcussp.的生長(zhǎng)范圍為1%-3%NaCl，最適生長(zhǎng)鹽濃度為1%NaCl，而對(duì)碳氮的源利用以及利用碳源產(chǎn)酸測(cè)試結(jié)果表明，KC159Deinococcussp.和其它的3株菌（DeinococcusgrandisJCM6269、DeinococcusradiotoleransJCM19173、DeinococcusdaejeonensisJCM16918）對(duì)不同碳源和氮源的利用各不相同。脂肪酸分析表明，KC159的脂肪酸組成主要為C15:1ω6c(23.81%)、C16:1ω7c/C16:1ω6c(15.03%)、C17:1ω6c(13.84%)和C17:0(11.53%)綜合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，KC159Deinococcussp.的遺傳特征、生理生化特征與同屬內(nèi)的3株菌（DeinococcusgrandisJCM6269、DeinococcusradiotoleransJCM19173、DeinococcusdaejeonensisJCM16918）存在顯著的差異，因此，表明KC159Deinococcussp.作為一個(gè)新種獨(dú)立存在于分類(lèi)單元。4.2討論本實(shí)驗(yàn)僅對(duì)KC159Deinococcussp.的16SrRNA基因序列、核酸分子雜交、生理生化特征進(jìn)行分析。此外，還需要對(duì)全細(xì)胞水解液的糖型、細(xì)胞壁化學(xué)成分及分枝菌酸、磷脂、醌、多胺等化學(xué)指標(biāo)進(jìn)行分析作為佐證，最終確立KC159Deinococcussp.的分類(lèi)地位。目前，在微生物資源開(kāi)發(fā)的研究中，極端環(huán)境中的微生物是重點(diǎn)研究對(duì)象。極端微生物有許多普通生境微生物所不具備的優(yōu)良的特性，具有廣闊的應(yīng)用前景，可以為人類(lèi)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。在人們的生產(chǎn)生活中，極端微生物被廣泛應(yīng)用到環(huán)境治理、食品加工、藥物開(kāi)發(fā)、能源生產(chǎn)等領(lǐng)域，發(fā)揮著重要的作用。近年來(lái)，由于稀土礦這種生境比較特殊，已經(jīng)成為人們研究極端微生物資源的重要領(lǐng)地，本實(shí)驗(yàn)選取一株稀土礦中分離出來(lái)的放線菌進(jìn)行研究，通過(guò)對(duì)其生理生化特征分析，發(fā)現(xiàn)該菌株產(chǎn)黑色素，可將其作為添加劑廣泛應(yīng)用到食品工業(yè)、化妝品行業(yè)；其次該菌株可生長(zhǎng)的鹽濃度范圍較廣、能在酸性環(huán)境中生長(zhǎng)，可將其應(yīng)用到土壤改良、污水處理、極端環(huán)境污染的治理中。在本次實(shí)驗(yàn)中，還是遇到了很多困難，開(kāi)始著手做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候提取DNA遭到了失敗，電泳檢測(cè)的時(shí)候沒(méi)有條帶出來(lái)，之后幾次才成功，當(dāng)時(shí)失敗的原因可能是溶菌酶添加不夠或失活了，導(dǎo)致細(xì)菌的細(xì)胞壁沒(méi)有破裂，DNA釋放不出來(lái)所以檢測(cè)不出條帶。后面也出現(xiàn)了類(lèi)似的情況才發(fā)現(xiàn)也有可能是由于DNA存放的時(shí)間較長(zhǎng)，導(dǎo)致結(jié)果的失效。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中經(jīng)常出現(xiàn)的問(wèn)題就是，在菌種的培養(yǎng)過(guò)程中被霉菌污染，原因可能是無(wú)菌操作不嚴(yán)格，也有可能是培養(yǎng)基滅菌不徹底。從以上實(shí)驗(yàn)失敗的經(jīng)歷中吸取的教訓(xùn)是，動(dòng)手操作之前都應(yīng)該弄清楚下一步的步驟以及可能出現(xiàn)的問(wèn)題等，實(shí)驗(yàn)操作要嚴(yán)謹(jǐn)，做實(shí)驗(yàn)應(yīng)該趁熱打鐵，不要拖拖拉拉，失去結(jié)果的準(zhǔn)確性從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)的失敗。而且應(yīng)該意識(shí)到實(shí)驗(yàn)室內(nèi)存放著各種菌，空氣中的雜菌很多，目的菌種在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中收到污染的概率很大，所以更要嚴(yán)格地進(jìn)行無(wú)菌操作，減少培養(yǎng)基在空氣中的暴露。本實(shí)驗(yàn)僅對(duì)該潛在菌株生理特征進(jìn)行分析，還需要對(duì)磷脂、胞壁氨基酸、全細(xì)胞糖以及其生物活性等化學(xué)指標(biāo)作為佐證，最終確立KC159的分類(lèi)地位。另外，如今對(duì)該菌株的代謝產(chǎn)物活性、酶學(xué)性質(zhì)、抗菌活性還不十分清楚，希望通過(guò)進(jìn)一步的研究，發(fā)掘其潛能并應(yīng)用到人類(lèi)社會(huì)實(shí)踐中。參考文獻(xiàn)[1]黃秀梨，辛明秀.微生物學(xué)[M].北京：高等教育出版社，2009.[2]李夏.淺談微生物的應(yīng)用與發(fā)展[J].科學(xué)與財(cái)富.[3]]姜成林，李文均，徐麗華，等.極端環(huán)境中的放線菌資源[J].微生物學(xué)通報(bào)，2003，30(4):125-127.[4]神奇的稀土元素[J].功能材料信息，2012，9(4).[5]黃靜麗.世界稀土資源儲(chǔ)量分布及供需現(xiàn)狀分析[J].中國(guó)集體經(jīng)濟(jì)，2015,34(6):109-110．[6]程建忠等.白云鄂博礦床稀土資源開(kāi)發(fā)及綜合利用[J].稀土，2007，28(1):70-74．[7]張冰，崔岱宗，趙敏.宏基因組學(xué)技術(shù)及其在微生物學(xué)研究中應(yīng)用[J].黑龍江醫(yī)藥，2014,27(2):267-270.[8]楊靜，廖美德.放線菌資源及應(yīng)用[J].世界農(nóng)藥，2014,36(1):22-25.[9]徐麗華，姜怡，徐平，等.放線菌藥物資源開(kāi)發(fā)面臨的問(wèn)題與對(duì)策[J].微生物學(xué)通報(bào)，2008,25(2):272-274.[10]張利平，陳冠華.放線菌化學(xué)分類(lèi)學(xué)的現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢(shì)[J].微生物學(xué)通報(bào)，1997,24(5):310-312.[11]李琇,張美容，王靈風(fēng)，等.白云鄂博稀土礦區(qū)若干微生物培養(yǎng)特征研究[J].微生物學(xué)雜志，2007，27(2):92-96.[12]饒振賓，蔡嗣經(jīng).中國(guó)稀土資源整合政策對(duì)市場(chǎng)的影響分析［J].中國(guó)鉬業(yè),2015,39(4):1-5．[13]Kim,O.S.,Cho,Y.J.,Lee,K.,Yoon,S.H.,Kim,M.,Na,H.,Park,S.C.,Jeon,Y.S.,Lee,J.H.,Yi,H.,Won,S.&Chun,J.(2012).IntroducingEzTaxon:aprokaryotic16SrRNAgenesequencedatabasewithphylotypest