pcr上崗考試及答案

一、單項選擇題（每題2分，共20分）1.PCR技術(shù)的中文全稱是（）A.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)B.核酸擴(kuò)增反應(yīng)C.基因復(fù)制反應(yīng)D.蛋白質(zhì)合成反應(yīng)2.PCR反應(yīng)體系中不包括以下哪種成分（）A.模板DNAB.Taq酶C.dNTPD.限制性內(nèi)切酶3.PCR反應(yīng)的基本步驟不包括（）A.變性B.退火C.延伸D.轉(zhuǎn)錄4.引物設(shè)計時，其長度一般為（）A.5-10bpB.15-30bpC.30-50bpD.50-100bp5.Taq酶的最適反應(yīng)溫度是（）A.55℃B.72℃C.94℃D.60℃6.以下哪種物質(zhì)可以作為PCR反應(yīng)的模板（）A.蛋白質(zhì)B.多糖C.DNAD.脂肪7.PCR技術(shù)主要用于（）A.蛋白質(zhì)測序B.基因克隆C.細(xì)胞培養(yǎng)D.抗體檢測8.在PCR反應(yīng)中，決定擴(kuò)增片段特異性的是（）A.Taq酶B.模板DNAC.引物D.dNTP9.進(jìn)行PCR反應(yīng)時，需要使用的儀器是（）A.離心機(jī)B.紫外可見分光光度計C.PCR儀D.氣相色譜儀10.關(guān)于PCR技術(shù)，下列說法錯誤的是（）A.靈敏度高B.特異性強(qiáng)C.可擴(kuò)增任意長度的DNA片段D.操作相對簡便答案：1.A2.D3.D4.B5.B6.C7.B8.C9.C10.C二、多項選擇題（每題2分，共20分）1.PCR反應(yīng)體系中包含的成分有（）A.模板DNAB.引物C.Taq酶D.dNTPE.Mg2?2.引物設(shè)計的基本原則包括（）A.長度合適B.避免引物自身互補(bǔ)C.引物之間避免互補(bǔ)D.GC含量適中E.3’端不能有發(fā)夾結(jié)構(gòu)3.影響PCR反應(yīng)的因素有（）A.模板濃度B.引物濃度C.反應(yīng)溫度D.循環(huán)次數(shù)E.Taq酶活性4.PCR技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域包括（）A.疾病診斷B.法醫(yī)鑒定C.基因工程D.物種鑒定E.藥物研發(fā)5.在PCR反應(yīng)中，可能出現(xiàn)的問題有（）A.假陽性B.假陰性C.擴(kuò)增效率低D.引物二聚體形成E.非特異性擴(kuò)增6.以下哪些是常用的PCR緩沖液成分（）A.Tris-HClB.KClC.MgCl?D.NaClE.EDTA7.實(shí)時熒光定量PCR可以用于（）A.基因表達(dá)分析B.病原體定量檢測C.腫瘤標(biāo)志物檢測D.甲基化分析E.單核苷酸多態(tài)性檢測8.巢式PCR的優(yōu)點(diǎn)有（）A.提高特異性B.提高靈敏度C.減少非特異性擴(kuò)增D.增加擴(kuò)增片段長度E.降低引物設(shè)計難度9.降落PCR的特點(diǎn)包括（）A.提高特異性B.減少引物二聚體形成C.優(yōu)化退火溫度D.適用于未知序列擴(kuò)增E.增加擴(kuò)增效率10.數(shù)字PCR的優(yōu)勢在于（）A.絕對定量B.檢測低豐度核酸C.不受PCR抑制物影響D.高通量E.可進(jìn)行多重檢測答案：1.ABCDE2.ABCDE3.ABCDE4.ABCDE5.ABCDE6.ABC7.ABC8.ABC9.ABC10.ABC三、判斷題（每題2分，共20分）1.PCR技術(shù)可以擴(kuò)增RNA片段。（）2.引物的GC含量越高，其退火溫度越高。（）3.Taq酶具有3’→5’外切酶活性。（）4.PCR反應(yīng)的循環(huán)次數(shù)越多，擴(kuò)增產(chǎn)物的量就一定越多。（）5.模板DNA的純度對PCR反應(yīng)結(jié)果沒有影響。（）6.實(shí)時熒光定量PCR可以對核酸進(jìn)行絕對定量。（）7.引物的5’端可以進(jìn)行修飾。（）8.降落PCR是在反應(yīng)開始時采用較高的退火溫度。（）9.數(shù)字PCR不需要標(biāo)準(zhǔn)曲線即可進(jìn)行定量分析。（）10.PCR技術(shù)只能用于擴(kuò)增已知序列的DNA片段。（）答案：1.×2.√3.×4.×5.×6.√7.√8.√9.√10.×四、簡答題（每題5分，共20分）1.簡述PCR技術(shù)的基本原理。答案：PCR技術(shù)以擬擴(kuò)增的DNA為模板，在引物、dNTP、Taq酶等作用下，經(jīng)過變性使模板雙鏈解開，退火讓引物與模板結(jié)合，延伸由Taq酶催化合成新的DNA鏈，通過多次循環(huán)實(shí)現(xiàn)特定DNA片段的大量擴(kuò)增。2.引物設(shè)計時需要注意哪些問題？答案：長度15-30bp為宜，避免自身互補(bǔ)及引物間互補(bǔ)，GC含量40%-60%，3’端不能有發(fā)夾結(jié)構(gòu)，且盡量避開重復(fù)序列，保證特異性。3.分析PCR反應(yīng)出現(xiàn)假陽性結(jié)果的可能原因。答案：可能是引物設(shè)計不當(dāng)產(chǎn)生非特異性結(jié)合，模板DNA污染，PCR試劑污染，操作環(huán)境有核酸殘留，或者循環(huán)次數(shù)過多等原因?qū)е录訇栃浴?.簡述實(shí)時熒光定量PCR的原理。答案：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，隨著PCR擴(kuò)增，熒光信號強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物量成正比。通過對熒光信號的實(shí)時監(jiān)測，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)現(xiàn)對起始模板核酸的定量分析。五、討論題（每題5分，共20分）1.在臨床診斷中，PCR技術(shù)有哪些優(yōu)勢和局限性？答案：優(yōu)勢是靈敏度高、特異性強(qiáng)，能快速檢測病原體基因。局限性在于易受污染致假陽性，對操作要求高，檢測成本相對較高，且有些病原體基因變異快，引物設(shè)計困難。2.如何優(yōu)化PCR反應(yīng)條件以提高擴(kuò)增效果？答案：優(yōu)化模板和引物濃度，調(diào)整Mg2?濃度，合理設(shè)置變性、退火、延伸溫度及時間，根據(jù)情況選擇合適的Taq酶，還可采用降落PCR等特殊策略提高擴(kuò)增特異性和效率。3.數(shù)字PCR與傳統(tǒng)定量PCR在應(yīng)用上有何不同？答案：數(shù)字PCR可絕對定量，更適合低豐度核酸檢測且不受抑制物影響；傳統(tǒng)定量PCR需標(biāo)準(zhǔn)曲線，