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15I兒師范高等?？茖W(xué)校、鄂爾多斯市農(nóng)牧業(yè)生態(tài)與1類病毒viroids反轉(zhuǎn)錄reversetranscription（RT）2模板的特定區(qū)域進(jìn)行體外擴(kuò)增的技術(shù)。反應(yīng)混合物通常由DNA聚合酶、脫氧核苷三磷酸、引物和緩沖液組成，反應(yīng)過(guò)程主要包括變性、退火和延為復(fù)制延伸的起始位點(diǎn)。4.1主要RNA病毒種類黃瓜花葉病毒(Cucumbermos馬鈴薯奧古巴花葉病毒(Potato馬鈴薯卷葉病毒(Potatoleafrollvirus,PLRV)。馬鈴薯帚頂病毒(Potato馬鈴薯A病毒(PotatovirusA,PVA)。馬鈴薯M病毒(Potatovirus馬鈴薯X病毒(PotatovirusX,PVX)。馬鈴薯Y病毒(PotatovirusY,PVY)。馬鈴薯紡錘塊莖類病毒(Potatospindle注：類病毒雖然不具有病毒所具有的蛋白質(zhì)外殼，但具有RNA基因組，檢測(cè)方法與RNA病毒一致。因此，列為本標(biāo)準(zhǔn)采用5點(diǎn)法抽樣。種植面積小于2001m2(含2001m2),抽檢100株。種植面積在2001m2到20010m2之間(含20010m2),之后每增加2001m2增檢20株。置于自封采樣袋內(nèi)。運(yùn)輸。樣品在檢測(cè)點(diǎn)存儲(chǔ)時(shí)間較短時(shí)(一般不超過(guò)24h),在4℃存放即可。長(zhǎng)期存放樣品時(shí)，需要將樣品用液氮預(yù)冷后，保存于-80℃超低溫保存箱。3ab4兩個(gè)引物退火溫度不一致時(shí)，取較低溫度；72℃延伸，延伸時(shí)間根據(jù)所選產(chǎn)品說(shuō)明書提供的參數(shù)進(jìn)行計(jì)算。最后，72℃終延伸5min。7.5瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)用Tris-乙酸緩沖液溶解瓊脂糖，制備質(zhì)量體積比為1%的瓊脂糖凝膠。瓊脂糖凝膠的制備按照SN/T2497.21執(zhí)行。時(shí)，凝膠置于紫外燈或凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行觀測(cè)和拍照，獲取的圖片用于結(jié)果判定。8.1異常結(jié)果根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳圖，與圖中DNA相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)品相比，從陰性對(duì)照樣品擴(kuò)增到了預(yù)期大小8.3

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