張家口市中醫(yī)院酶聯(lián)免疫技術(shù)專項(xiàng)考核一、單選題（共10題，每題2分，共20分）1.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）中，辣根過氧化物酶（HRP）常用的底物是？A.TMBB.ABTSC.DABD.BCIP/NBTE.HRP-conjugatedstreptavidin2.在ELISA操作中，包被抗體時(shí)常用的pH值為？A.7.4B.9.6C.11.0D.5.0E.3.03.以下哪種方法不屬于ELISA的常見干擾因素？A.假陽性（鉤狀效應(yīng)）B.溶血現(xiàn)象C.抗體交叉反應(yīng)D.封閉液濃度過高E.溫度控制不當(dāng)4.ELISA中，終止液常用的種類是？A.HCl溶液B.NaOH溶液C.SDS溶液D.醋酸溶液E.甲醇溶液5.雙抗體夾心法ELISA主要用于檢測(cè)？A.可溶性抗原B.固定在膜上的抗原C.補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)D.細(xì)胞表面抗原E.蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物6.以下哪種試劑常用于ELISA的封閉步驟？A.HRP標(biāo)記的二抗B.氯化鈉溶液C.牛血清白蛋白（BSA）D.洗滌液E.辣根過氧化物酶7.ELISA結(jié)果判讀時(shí)，以下哪種情況可能提示鉤狀效應(yīng)？A.樣本濃度過高導(dǎo)致吸光度值偏低B.試劑失效導(dǎo)致吸光度值偏低C.溫度過低導(dǎo)致吸光度值偏低D.封閉不充分導(dǎo)致吸光度值偏高E.洗滌不徹底導(dǎo)致吸光度值偏高8.在ELISA中，酶標(biāo)板的孔底材質(zhì)通常是？A.金屬板B.塑料板（聚苯乙烯）C.玻璃板D.陶瓷板E.石英板9.以下哪種方法可用于提高ELISA的特異性？A.增加抗體濃度B.降低孵育時(shí)間C.使用多克隆抗體D.優(yōu)化封閉液配方E.選擇更敏感的底物10.ELISA檢測(cè)中，背景值過高可能的原因是？A.試劑純度低B.溫度控制不當(dāng)C.封閉不充分D.洗滌不徹底E.以上都是二、多選題（共5題，每題3分，共15分）1.ELISA實(shí)驗(yàn)中，以下哪些步驟需要嚴(yán)格控制溫度？A.包被抗體B.樣本孵育C.加入酶標(biāo)二抗D.終止反應(yīng)E.洗滌步驟2.以下哪些因素可能導(dǎo)致ELISA結(jié)果假陰性？A.抗原濃度過低B.抗體效價(jià)不足C.封閉不充分D.洗滌次數(shù)過多E.試劑失效3.ELISA中常用的洗滌液成分包括？A.Tris-HCl緩沖液B.Tween-20C.氯化鈉D.蛋白質(zhì)溶液E.酶標(biāo)二抗4.以下哪些方法可用于減少ELISA的干擾？A.高效洗滌B.優(yōu)化抗體濃度C.使用預(yù)包被板D.避免鉤狀效應(yīng)E.提高樣本稀釋倍數(shù)5.ELISA實(shí)驗(yàn)中，以下哪些情況需要重新實(shí)驗(yàn)？A.背景值過高B.線性范圍不寬C.鉤狀效應(yīng)明顯D.重復(fù)性差E.酶標(biāo)板孔間差異大三、判斷題（共10題，每題1分，共10分）1.ELISA實(shí)驗(yàn)中，封閉液的主要作用是防止非特異性吸附。（√）2.雙抗體夾心法ELISA只能檢測(cè)多克隆抗體。（×）3.鉤狀效應(yīng)會(huì)導(dǎo)致結(jié)果假陰性。（√）4.ELISA實(shí)驗(yàn)中，酶標(biāo)板的孔底材質(zhì)必須為聚苯乙烯。（×）5.終止液的作用是終止酶的催化反應(yīng)。（√）6.ELISA實(shí)驗(yàn)中，pH值過高會(huì)影響抗體活性。（√）7.洗滌不徹底會(huì)導(dǎo)致背景值升高。（√）8.ELISA實(shí)驗(yàn)中，封閉液濃度越高越好。（×）9.高效洗滌液可以提高實(shí)驗(yàn)特異性。（√）10.酶標(biāo)二抗的優(yōu)化可以減少交叉反應(yīng)。（√）四、簡(jiǎn)答題（共5題，每題5分，共25分）1.簡(jiǎn)述ELISA實(shí)驗(yàn)中鉤狀效應(yīng)的原理及避免方法。2.解釋ELISA實(shí)驗(yàn)中封閉步驟的重要性及常用封閉液成分。3.比較雙抗體夾心法與間接法ELISA的優(yōu)缺點(diǎn)。4.列舉三種提高ELISA實(shí)驗(yàn)特異性的方法。5.說明ELISA實(shí)驗(yàn)中洗滌步驟的作用及注意事項(xiàng)。五、論述題（共2題，每題10分，共20分）1.結(jié)合張家口市中醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況，論述如何優(yōu)化ELISA實(shí)驗(yàn)條件以提高檢測(cè)準(zhǔn)確性。2.分析ELISA實(shí)驗(yàn)中常見的干擾因素及其應(yīng)對(duì)措施，并舉例說明。答案與解析一、單選題1.A解析：TMB（3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯胺）是ELISA中HRP最常用的底物，顯色穩(wěn)定且靈敏度較高。2.A解析：ELISA包被抗體通常在pH7.4的磷酸鹽緩沖液中進(jìn)行，以維持抗體活性。3.D解析：封閉液濃度過高可能導(dǎo)致非特異性吸附，但并非干擾因素本身。4.A解析：HCl溶液（通常是2MHCl）常用作ELISA終止液，可終止酶的催化反應(yīng)。5.A解析：雙抗體夾心法適用于檢測(cè)可溶性抗原，通過抗體-抗原-抗體形成夾心結(jié)構(gòu)。6.C解析：BSA（牛血清白蛋白）是常用的封閉劑，可覆蓋包被板表面非特異性位點(diǎn)。7.A解析：鉤狀效應(yīng)指高濃度樣本競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合位點(diǎn)，導(dǎo)致吸光度值偏低。8.B解析：ELISA酶標(biāo)板通常使用聚苯乙烯材質(zhì)，因其對(duì)酶和抗體有良好的吸附性。9.D解析：優(yōu)化封閉液配方（如BSA濃度）可減少非特異性吸附，提高特異性。10.E解析：背景值過高可能由試劑純度低、溫度控制不當(dāng)、封閉不充分或洗滌不徹底引起。二、多選題1.ABC解析：包被抗體、樣本孵育、酶標(biāo)二抗孵育需嚴(yán)格控制溫度（通常37℃），終止反應(yīng)需冰浴終止。2.ABDE解析：假陰性可能由抗原濃度低、抗體效價(jià)不足、洗滌過度或試劑失效引起。3.ABC解析：洗滌液通常含Tris-HCl緩沖液、Tween-20（表面活性劑）和NaCl（維持離子強(qiáng)度）。4.ABCD解析：高效洗滌、優(yōu)化抗體濃度、避免鉤狀效應(yīng)、提高樣本稀釋倍數(shù)均有助于減少干擾。5.ABCDE解析：背景值過高、線性范圍窄、鉤狀效應(yīng)、重復(fù)性差、孔間差異大均需重新實(shí)驗(yàn)。三、判斷題1.√2.×（雙抗體夾心法可使用單克隆或多克隆抗體）3.√4.×（可使用其他材質(zhì)，如聚丙烯）5.√6.√7.√8.×（過高可能導(dǎo)致封閉過度）9.√10.√四、簡(jiǎn)答題1.鉤狀效應(yīng)原理及避免方法原理：高濃度抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合位點(diǎn)，導(dǎo)致低濃度抗原無法與二抗結(jié)合，吸光度值偏低。避免方法：樣本適當(dāng)稀釋、分步孵育、優(yōu)化抗體濃度。2.封閉步驟的重要性及常用成分重要性：防止非特異性吸附。常用成分：BSA、脫脂奶粉、明膠。3.雙抗體夾心法與間接法的比較雙抗體夾心法特異性高，間接法靈敏度高，但間接法易受干擾。4.提高特異性的方法優(yōu)化抗體親和力、使用高純度試劑、避免鉤狀效應(yīng)、增加封閉時(shí)間。5.洗滌步驟的作用及注意事項(xiàng)作用：去除游離試劑，降低背景值。注意事項(xiàng)：洗滌次數(shù)和體積一致，避免氣泡。五、論述題1.優(yōu)化ELISA實(shí)驗(yàn)條件結(jié)合張家口市中醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室特點(diǎn)，建議：-使用本地試劑供應(yīng)商的優(yōu)質(zhì)抗體，降低運(yùn)輸成本；-優(yōu)化包被濃度