1寵物曼氏迭宮絳蟲(chóng)檢驗(yàn)技術(shù)規(guī)范本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了寵物曼氏迭宮絳蟲(chóng)蟲(chóng)卵、幼蟲(chóng)、成蟲(chóng)的檢查方法與判定結(jié)GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和4符號(hào)和縮略語(yǔ)PCR：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReactio5樣本的采集及檢測(cè)100目尼龍網(wǎng)過(guò)濾，并用清水反復(fù)沖洗至濾液清亮，收集尼龍網(wǎng)中的殘?jiān)⒓忧逅♂?，吸取混合?大小、形態(tài)和內(nèi)部結(jié)構(gòu)。蟲(chóng)卵呈橢圓形，兩端稍尖，長(zhǎng)53～76較薄，有明顯的刺突，一端有卵蓋，內(nèi)有一個(gè)卵細(xì)胞和若干個(gè)卵黃寬0.5～0.8mm，其背、腹面各具一個(gè)縱行吸槽。體節(jié)數(shù)量較多，通常有數(shù)十個(gè)節(jié)段，節(jié)片一3試劑材料：PCR管、水（按照GB/T6682的規(guī)定執(zhí)行，二級(jí)水）、1×TA制）、核酸染料、瓊脂糖凝膠（按照附錄A.2配制）、DNA提取試劑盒、PCR擴(kuò)增試劑盒、上下游引物NC5、NC2GTAGGTGAACCT利用組織DNA提取試劑盒進(jìn)行樣本DNA的提取，嚴(yán)格按照試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，確保提取的DNA質(zhì)量和純度。提取的DNA樣品，應(yīng)立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增。若當(dāng)前實(shí)驗(yàn)條件無(wú)法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，可存放至1曼氏迭宮裂頭蚴和曼氏迭宮絳蟲(chóng)成蟲(chóng)的PCR擴(kuò)增ITS:95℃初始變性5min；94℃變性40s、50℃退火40s、7泳，恒壓120V，電泳約35min，經(jīng)凝膠成像分析系統(tǒng)觀察結(jié)果并成像。4A.11×TAE配制50×TAE貯存液的方法如下：）：）：）：調(diào)節(jié)pH值：用濃度為1M的HCl溶液調(diào)節(jié)溶液補(bǔ)足至1L：將溶液轉(zhuǎn)移至1L的容量瓶，使用去離子水將體積補(bǔ)足至1L。儲(chǔ)存：將制備好的50×TAE緩沖液分裝，并保存在室溫下。A.2瓊脂糖凝膠稱取1g瓊脂糖粉，將瓊脂糖粉加入到100mLTAE緩沖液中，然后加熱溶解約50-60°C（用手感受溫度，以免過(guò)熱導(dǎo)致膠免氣泡。凝膠的厚度一般為3-5mm。等待大約20-30min，直到瓊脂糖凝5曼氏迭宮裂頭蚴和曼氏迭宮絳蟲(chóng)成蟲(chóng)cox1基因M：DL500DNAMarkerM：DL2000DNAMarker67[1]譚磊,王愛(ài)兵,周湘,等.基于ITS基因分析黑斑蛙裂頭蚴種系發(fā)育關(guān)系[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào),2017,37(10):1924-[2]劉自逵,劉國(guó)華,戴榮四,等.湖南省猬迭宮絳蟲(chóng)ITS及5.8SrDNA的克隆