基于分子印跡技術(shù)的蕓香苷與丹參酮ⅡA毛細(xì)管電泳分離分析研究一、引言1.1研究背景蕓香苷，又稱蘆丁，是一種廣泛存在于植物中的黃酮類化合物，具有多種重要的生物活性。在抗氧化方面，蕓香苷能夠有效清除體內(nèi)的自由基，減少氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞的損傷，其作用機(jī)制主要是通過(guò)提供氫原子來(lái)穩(wěn)定自由基，從而中斷氧化鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。有研究表明，在對(duì)氧化損傷的細(xì)胞模型實(shí)驗(yàn)中，加入蕓香苷后，細(xì)胞內(nèi)的活性氧水平顯著降低，細(xì)胞的存活率明顯提高。在抗炎領(lǐng)域，蕓香苷可以抑制炎癥介質(zhì)的釋放，調(diào)節(jié)炎癥相關(guān)信號(hào)通路，進(jìn)而減輕炎癥反應(yīng)。臨床研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)于一些炎癥相關(guān)疾病患者，使用含有蕓香苷的藥物后，炎癥指標(biāo)得到了有效改善。此外，蕓香苷在心血管保護(hù)方面也發(fā)揮著重要作用，它能夠降低血脂、抑制血小板聚集，從而預(yù)防心血管疾病的發(fā)生。相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，長(zhǎng)期攝入一定劑量蕓香苷的動(dòng)物，其血脂水平和血小板聚集率明顯低于對(duì)照組。由于其出色的生物活性，蕓香苷在醫(yī)藥、食品、保健品等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用前景。在醫(yī)藥領(lǐng)域，它被用于開(kāi)發(fā)治療心血管疾病、炎癥性疾病等的藥物；在食品領(lǐng)域，常被添加到功能性食品中，以增強(qiáng)食品的保健功能；在保健品領(lǐng)域，以蕓香苷為主要成分的保健品也備受消費(fèi)者青睞。丹參酮ⅡA是從中藥丹參中提取的主要脂溶性成分之一，是一種櫻紅色針狀結(jié)晶，分子式為C19H18O3，相對(duì)分子質(zhì)量為294.33，不溶或微溶于水，易溶于乙醇、乙醚和苯等有機(jī)溶劑。因其含有醌的結(jié)構(gòu)，容易被氧化還原，可參與機(jī)體的多種生化反應(yīng)，在多個(gè)領(lǐng)域展現(xiàn)出重要價(jià)值。在醫(yī)學(xué)研究中，丹參酮ⅡA具有顯著的抗炎作用，它能夠抑制炎癥細(xì)胞的活化和炎癥介質(zhì)的釋放，減輕炎癥對(duì)組織的損傷。在一項(xiàng)關(guān)于炎癥模型小鼠的實(shí)驗(yàn)中，給予丹參酮ⅡA處理后，小鼠體內(nèi)的炎癥因子水平明顯下降，炎癥癥狀得到緩解。在抗腫瘤方面，丹參酮ⅡA可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。研究發(fā)現(xiàn)，丹參酮ⅡA能夠通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，促使腫瘤細(xì)胞走向凋亡。在心血管保護(hù)方面，它可以改善心肌缺血、抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖，對(duì)心血管系統(tǒng)起到保護(hù)作用。臨床實(shí)踐中，含有丹參酮ⅡA的藥物在治療心血管疾病方面取得了良好的效果。丹參酮ⅡA還具有抗氧化、抗纖維化等作用，在神經(jīng)保護(hù)、肝臟保護(hù)等方面也有潛在的應(yīng)用價(jià)值。分子印跡技術(shù)（MolecularImprintingTechnology，MIT）是一種用于合成具備特定分子識(shí)別能力聚合物的先進(jìn)方法。該技術(shù)通過(guò)在聚合物中引入模板分子，再經(jīng)過(guò)一系列化學(xué)反應(yīng)和物理處理步驟，形成具有選擇性識(shí)別能力的分子印跡聚合物（MolecularlyImprintedPolymers，MIPs）。其原理基于分子識(shí)別理論，當(dāng)體系中存在模板分子時(shí)，功能單體可以通過(guò)聚合使這種模板分子以互補(bǔ)的方式固定下來(lái)，聚合結(jié)束后，模板分子被除去，從而使獲得的分子組裝能專一性地鍵合模板分子以及它們的類似物。在藥物分離與檢測(cè)領(lǐng)域，分子印跡技術(shù)可用于從復(fù)雜的生物樣品中特異性地分離和檢測(cè)目標(biāo)藥物，提高檢測(cè)的靈敏度和選擇性。例如，對(duì)于一些痕量藥物的檢測(cè)，傳統(tǒng)方法往往難以準(zhǔn)確檢測(cè)，而利用分子印跡技術(shù)制備的印跡聚合物，可以高效地富集目標(biāo)藥物，實(shí)現(xiàn)對(duì)其準(zhǔn)確檢測(cè)。在環(huán)境監(jiān)測(cè)方面，該技術(shù)可用于檢測(cè)環(huán)境中的污染物、農(nóng)藥及藥物殘留等。以檢測(cè)水中的農(nóng)藥殘留為例，分子印跡聚合物能夠從復(fù)雜的水樣中選擇性地吸附目標(biāo)農(nóng)藥，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)。分子印跡技術(shù)在生物傳感器、固相萃取等領(lǐng)域也有廣泛應(yīng)用，為相關(guān)領(lǐng)域的發(fā)展提供了有力支持。毛細(xì)管電泳（CapillaryElectrophoresis，CE）分離分析技術(shù)是一類以毛細(xì)管為分離通道、以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，根據(jù)樣品中各組分之間遷移速度和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離的液相分離技術(shù)。其基本原理是在電場(chǎng)作用下，離子遷移的速度不同，從而對(duì)組分進(jìn)行分離和分析。毛細(xì)管電泳具有分離速度快的特點(diǎn)，在很短的時(shí)間內(nèi)就能完成樣品的分離，例如在3.1min內(nèi)可分離36種無(wú)機(jī)及有機(jī)陰離子，4.1min內(nèi)可分離24種陽(yáng)離子。它的分離效率高，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)復(fù)雜樣品中各組分的高效分離。同時(shí)，毛細(xì)管電泳的運(yùn)行成本低，樣品與試劑消耗量少，一般樣品用量?jī)H為150nL左右。此外，該技術(shù)可供選擇的分離模式多，包括毛細(xì)管區(qū)帶電泳、膠束電動(dòng)色譜、毛細(xì)管凝膠電泳等，應(yīng)用范圍廣泛，可用于氨基酸、肽、蛋白質(zhì)和核酸等離子型生物大分子的分離分析，加入表面活性劑還可擴(kuò)大到中性粒子，甚至應(yīng)用到細(xì)胞和病毒等的分離，在小分子化合物的分離分析方面也取得了重大進(jìn)展。在生物醫(yī)藥領(lǐng)域，毛細(xì)管電泳可用于DNA片段分離、蛋白質(zhì)檢測(cè)、藥物分析等，為基因檢測(cè)、疾病診斷和藥物研發(fā)提供了重要的技術(shù)手段。在環(huán)境監(jiān)測(cè)領(lǐng)域，可用于水質(zhì)監(jiān)測(cè)中對(duì)微量有機(jī)物、金屬離子等污染物的檢測(cè)，以及食品安全領(lǐng)域中對(duì)食品添加劑、農(nóng)藥殘留等物質(zhì)的檢測(cè)。蕓香苷和丹參酮ⅡA在醫(yī)藥等領(lǐng)域具有重要價(jià)值，但從復(fù)雜體系中分離和分析它們存在一定難度。分子印跡技術(shù)的高選擇性和毛細(xì)管電泳的高效分離能力為解決這一問(wèn)題提供了新的思路和方法。通過(guò)分子印跡技術(shù)制備對(duì)蕓香苷和丹參酮ⅡA具有特異性識(shí)別能力的分子印跡聚合物，再結(jié)合毛細(xì)管電泳的高效分離特性，有望實(shí)現(xiàn)對(duì)蕓香苷和丹參酮ⅡA的高效分離和準(zhǔn)確分析。本研究對(duì)于深入了解蕓香苷和丹參酮ⅡA的性質(zhì)和應(yīng)用，推動(dòng)相關(guān)領(lǐng)域的發(fā)展具有重要意義。1.2研究目的與創(chuàng)新點(diǎn)本研究旨在深入探究分子印跡技術(shù)在蕓香苷和丹參酮ⅡA毛細(xì)管電泳分離分析中的應(yīng)用，通過(guò)優(yōu)化分子印跡聚合物的制備條件和毛細(xì)管電泳的分離參數(shù)，實(shí)現(xiàn)對(duì)蕓香苷和丹參酮ⅡA的高效、準(zhǔn)確分離與分析。具體而言，本研究期望制備出對(duì)蕓香苷和丹參酮ⅡA具有高選擇性和親和力的分子印跡聚合物，顯著提高毛細(xì)管電泳分離分析的效率和準(zhǔn)確性，為蕓香苷和丹參酮ⅡA在醫(yī)藥、食品等領(lǐng)域的質(zhì)量控制和研究提供更為可靠的分析方法。本研究的創(chuàng)新點(diǎn)主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：首次將分子印跡技術(shù)與毛細(xì)管電泳相結(jié)合，用于蕓香苷和丹參酮ⅡA的分離分析，充分發(fā)揮兩種技術(shù)的優(yōu)勢(shì)，為復(fù)雜體系中目標(biāo)化合物的分離分析提供了新的策略。在分子印跡聚合物的制備過(guò)程中，引入新型功能單體和交聯(lián)劑，通過(guò)分子設(shè)計(jì)和優(yōu)化反應(yīng)條件，有望制備出性能更優(yōu)異的分子印跡聚合物，提高對(duì)蕓香苷和丹參酮ⅡA的識(shí)別能力和選擇性。對(duì)毛細(xì)管電泳的分離條件進(jìn)行系統(tǒng)優(yōu)化，包括緩沖溶液的組成、pH值、電壓等參數(shù)，結(jié)合分子印跡聚合物的特性，建立高效的毛細(xì)管電泳分離方法，實(shí)現(xiàn)對(duì)蕓香苷和丹參酮ⅡA的快速、準(zhǔn)確分離。1.3研究方法與技術(shù)路線本研究綜合運(yùn)用多種研究方法，以確保研究的科學(xué)性和有效性。實(shí)驗(yàn)研究法是本研究的核心方法，通過(guò)精心設(shè)計(jì)并實(shí)施一系列實(shí)驗(yàn)，制備分子印跡聚合物，并對(duì)其性能進(jìn)行全面表征，同時(shí)深入探究毛細(xì)管電泳的分離條件，為研究提供堅(jiān)實(shí)的數(shù)據(jù)支撐。對(duì)比分析法也是重要的研究手段，通過(guò)將分子印跡聚合物與非印跡聚合物在吸附性能、選擇性等方面進(jìn)行細(xì)致對(duì)比，清晰地凸顯分子印跡聚合物的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。同時(shí)，在毛細(xì)管電泳分離分析中，對(duì)不同緩沖溶液組成、pH值、電壓等條件下的分離效果展開(kāi)對(duì)比，從而篩選出最佳的分離條件，提高研究的準(zhǔn)確性和可靠性。文獻(xiàn)研究法也貫穿于整個(gè)研究過(guò)程，廣泛查閱國(guó)內(nèi)外關(guān)于分子印跡技術(shù)、毛細(xì)管電泳以及蕓香苷和丹參酮ⅡA的相關(guān)文獻(xiàn)，全面了解該領(lǐng)域的研究現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢(shì)，為研究提供豐富的理論依據(jù)和研究思路，避免研究的盲目性，確保研究在已有成果的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)創(chuàng)新和突破。本研究的技術(shù)路線如下：首先，進(jìn)行分子印跡聚合物的制備。通過(guò)大量的文獻(xiàn)調(diào)研和前期預(yù)實(shí)驗(yàn)，篩選出適合蕓香苷和丹參酮ⅡA的功能單體、交聯(lián)劑和致孔劑。采用本體聚合法，將模板分子（蕓香苷或丹參酮ⅡA）、功能單體、交聯(lián)劑和致孔劑按一定比例混合，在引發(fā)劑的作用下進(jìn)行聚合反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，通過(guò)索氏提取等方法去除模板分子，得到分子印跡聚合物。接著，對(duì)制備得到的分子印跡聚合物進(jìn)行全面的性能表征。運(yùn)用紅外光譜分析，確定聚合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，明確功能單體和交聯(lián)劑是否成功聚合以及聚合物中各官能團(tuán)的存在情況。利用掃描電子顯微鏡觀察聚合物的表面形貌，了解其微觀結(jié)構(gòu)特征，如孔徑大小、孔分布情況等，這些微觀結(jié)構(gòu)與聚合物的吸附性能密切相關(guān)。通過(guò)熱重分析測(cè)試聚合物的熱穩(wěn)定性，確定其在不同溫度下的質(zhì)量變化情況，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的溫度條件選擇提供參考。采用靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)，測(cè)定聚合物對(duì)蕓香苷和丹參酮ⅡA的吸附容量和吸附平衡時(shí)間，評(píng)估其吸附性能。進(jìn)行選擇性吸附實(shí)驗(yàn)，考察聚合物對(duì)結(jié)構(gòu)類似物的選擇性，以確定其識(shí)別能力。然后，將分子印跡聚合物應(yīng)用于毛細(xì)管電泳分離分析。對(duì)毛細(xì)管電泳的分離條件進(jìn)行系統(tǒng)優(yōu)化，包括緩沖溶液的組成、pH值、電壓等參數(shù)。通過(guò)改變緩沖溶液的種類和濃度，研究其對(duì)分離效果的影響，尋找最適合蕓香苷和丹參酮ⅡA分離的緩沖體系。調(diào)節(jié)pH值，探究其對(duì)樣品離子化程度和遷移速度的影響，確定最佳的pH值條件。改變電壓大小，分析其對(duì)分離時(shí)間和分離效率的作用，找到最優(yōu)的電壓設(shè)置。最后，建立基于分子印跡技術(shù)的毛細(xì)管電泳分離分析方法，并對(duì)實(shí)際樣品中的蕓香苷和丹參酮ⅡA進(jìn)行分離和測(cè)定。對(duì)方法的準(zhǔn)確性、精密度、重復(fù)性等進(jìn)行全面驗(yàn)證，確保該方法能夠準(zhǔn)確、可靠地用于實(shí)際樣品的分析，為蕓香苷和丹參酮ⅡA的研究和應(yīng)用提供有力的技術(shù)支持。二、分子印跡技術(shù)與毛細(xì)管電泳分離分析技術(shù)原理2.1分子印跡技術(shù)原理與分類2.1.1基本原理分子印跡技術(shù)是一種制備對(duì)特定目標(biāo)分子（模板分子）具有特異性識(shí)別能力聚合物的技術(shù)，其核心在于構(gòu)建具有特定空間結(jié)構(gòu)和功能基團(tuán)的分子印跡聚合物（MIPs），以實(shí)現(xiàn)對(duì)模板分子的精準(zhǔn)識(shí)別與捕獲。在分子印跡技術(shù)的實(shí)施過(guò)程中，首先將模板分子與功能單體混合，模板分子與功能單體之間通過(guò)共價(jià)鍵或非共價(jià)鍵相互作用，形成穩(wěn)定的主客體復(fù)合物。這些相互作用為后續(xù)聚合物結(jié)構(gòu)的構(gòu)建提供了關(guān)鍵的分子基礎(chǔ)。以非共價(jià)鍵作用為例，常見(jiàn)的非共價(jià)鍵包括靜電引力、氫鍵、金屬鰲合、電荷轉(zhuǎn)移、疏水作用以及范德華力等。在蕓香苷分子印跡聚合物的制備中，功能單體可能通過(guò)氫鍵與蕓香苷分子上的羥基等官能團(tuán)相互作用，形成初步的結(jié)合結(jié)構(gòu)。隨后，加入交聯(lián)劑并在引發(fā)劑的作用下，通過(guò)光聚合或熱聚合等方式，使主客體復(fù)合物與交聯(lián)劑發(fā)生自由基共聚合反應(yīng)。這一過(guò)程使得功能單體圍繞模板分子周圍形成高度交聯(lián)的剛性聚合物網(wǎng)絡(luò)，將模板分子固定在聚合物內(nèi)部，同時(shí)確定了聚合物的三維空間結(jié)構(gòu)。交聯(lián)劑的選擇和用量對(duì)聚合物的性能有著重要影響，不同的交聯(lián)劑結(jié)構(gòu)和交聯(lián)程度會(huì)改變聚合物的剛性、孔徑大小和分布等特性。聚合反應(yīng)完成后，采用適當(dāng)?shù)南疵摲椒?，如索氏提取、超聲洗脫等，將聚合物中的模板分子完全洗脫或解離出來(lái)。此時(shí)，在聚合物中便留下了與模板分子大小、形狀和官能團(tuán)分布精確匹配的立體孔穴，這些孔穴內(nèi)部包含了由功能單體提供的、與模板分子官能團(tuán)互補(bǔ)排列的功能基團(tuán)。當(dāng)再次遇到模板分子或其結(jié)構(gòu)類似物時(shí)，這些孔穴能夠通過(guò)特異性的相互作用，選擇性地識(shí)別和結(jié)合目標(biāo)分子，就如同鑰匙與鎖的精準(zhǔn)匹配一樣，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)分子的特異性識(shí)別和分離。這種特異性識(shí)別能力賦予了分子印跡聚合物在眾多領(lǐng)域的應(yīng)用潛力。在藥物分析中，能夠從復(fù)雜的生物樣品中高效地分離和檢測(cè)目標(biāo)藥物；在環(huán)境監(jiān)測(cè)領(lǐng)域，可以選擇性地富集和檢測(cè)環(huán)境中的痕量污染物；在色譜分離中，作為固定相實(shí)現(xiàn)對(duì)復(fù)雜混合物中目標(biāo)組分的高選擇性分離。分子印跡技術(shù)的基本原理為其在各個(gè)領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，為解決復(fù)雜體系中目標(biāo)分子的分離和分析問(wèn)題提供了一種高效、可靠的手段。2.1.2共價(jià)鍵法與非共價(jià)鍵法根據(jù)模板分子與功能單體之間形成相互作用的方式不同，分子印跡技術(shù)主要分為共價(jià)鍵法和非共價(jià)鍵法，這兩種方法在分子印跡聚合物的制備和應(yīng)用中各具特點(diǎn)。共價(jià)鍵法，又稱預(yù)組裝方式。在聚合前，印跡分子與功能單體通過(guò)可逆的共價(jià)鍵結(jié)合，形成硼酸酯、西佛堿、亞胺、縮醛等衍生物。以硼酸酯為例，當(dāng)模板分子含有順式二醇結(jié)構(gòu)時(shí)，可與含有硼酸基團(tuán)的功能單體在特定條件下發(fā)生反應(yīng)，形成穩(wěn)定的硼酸酯共價(jià)鍵。隨后加入交聯(lián)劑進(jìn)行共聚反應(yīng)，待聚合完成后，通過(guò)水解等化學(xué)方法將印跡分子從聚合物上斷開(kāi)，并使用極性溶劑將其洗脫下來(lái)，從而得到具有高密度空腔的共價(jià)結(jié)合型分子印跡聚合物。共價(jià)鍵法的顯著優(yōu)點(diǎn)是模板分子與功能單體之間的結(jié)合力強(qiáng)，空間位置固定精確，使得制備得到的分子印跡聚合物對(duì)模板分子具有極高的選擇性，在色譜分離等應(yīng)用中，能夠有效減少峰展寬和脫尾現(xiàn)象，實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)分子的高純度分離。在對(duì)糖類、氨基酸類、芳基酮類等化合物的分離分析中，共價(jià)鍵法制備的分子印跡聚合物展現(xiàn)出了出色的特異性識(shí)別能力。由于共價(jià)鍵的穩(wěn)定性較高，在聚合過(guò)程中會(huì)生成較多的鍵合位點(diǎn)，使得印跡效率相對(duì)較高。共價(jià)鍵法也存在一些局限性。功能單體的選擇受到模板分子結(jié)構(gòu)的嚴(yán)格限制，只有特定結(jié)構(gòu)的模板分子才能與相應(yīng)的功能單體形成合適的共價(jià)鍵，這在一定程度上限制了該方法的應(yīng)用范圍。此外，模板分子的除去過(guò)程相對(duì)復(fù)雜，需要較為苛刻的化學(xué)條件，這可能會(huì)對(duì)聚合物的結(jié)構(gòu)和性能產(chǎn)生一定的影響，同時(shí)，在識(shí)別過(guò)程中，模板分子與聚合物之間的結(jié)合與解離速度相對(duì)較慢，難以快速達(dá)到熱力學(xué)平衡，影響了分析檢測(cè)的效率。非共價(jià)鍵法，也稱為自組裝方式，是目前制備分子印跡聚合物最常用的方法。在這種方法中，模板分子與功能單體之間通過(guò)非共價(jià)鍵相互作用，如靜電引力（離子交換）、氫鍵、金屬鰲合、電荷轉(zhuǎn)移、疏水作用以及范德華力等，在溶液中自發(fā)地組裝形成主客體復(fù)合物。在丹參酮ⅡA分子印跡聚合物的制備中，功能單體可能通過(guò)氫鍵和疏水作用與丹參酮ⅡA分子相互結(jié)合。這些非共價(jià)鍵的形成相對(duì)容易，且作用類型多樣，使得功能單體的選擇更加靈活，能夠適應(yīng)不同結(jié)構(gòu)的模板分子。非共價(jià)鍵法的優(yōu)點(diǎn)在于制備過(guò)程相對(duì)簡(jiǎn)單，不需要特殊的化學(xué)反應(yīng)條件，易于操作和控制。由于非共價(jià)鍵的動(dòng)態(tài)特性，模板分子與聚合物之間的結(jié)合與解離速度較快，能夠在較短的時(shí)間內(nèi)達(dá)到吸附平衡，適用于快速分離和檢測(cè)的需求。非共價(jià)鍵法制備的分子印跡聚合物在多種應(yīng)用場(chǎng)景中表現(xiàn)出良好的性能，在固相萃取中，能夠快速、高效地富集目標(biāo)分析物；在化學(xué)仿生傳感器中，可作為分子識(shí)別元件，實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)分子的快速響應(yīng)和檢測(cè)。非共價(jià)鍵的作用力相對(duì)較弱，在某些復(fù)雜環(huán)境下，可能會(huì)導(dǎo)致分子印跡聚合物對(duì)模板分子的識(shí)別能力下降，選擇性不如共價(jià)鍵法制備的聚合物高。在實(shí)際應(yīng)用中，非共價(jià)鍵法因其制備過(guò)程簡(jiǎn)單、功能單體選擇靈活、結(jié)合與解離速度快等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域。而共價(jià)鍵法則在對(duì)選擇性要求極高、對(duì)模板分子結(jié)構(gòu)有特定限制的情況下發(fā)揮重要作用。兩種方法相互補(bǔ)充，為分子印跡技術(shù)在不同領(lǐng)域的深入應(yīng)用提供了多樣化的選擇。2.2毛細(xì)管電泳分離分析技術(shù)原理與模式2.2.1基本原理毛細(xì)管電泳（CapillaryElectrophoresis，CE）是一類以毛細(xì)管為分離通道、以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力的新型液相分離分析技術(shù)。其基本原理基于帶電粒子在電場(chǎng)中的遷移行為，以及不同粒子之間淌度和分配行為的差異。當(dāng)在毛細(xì)管兩端施加高壓直流電場(chǎng)時(shí)，毛細(xì)管內(nèi)的帶電粒子會(huì)在電場(chǎng)力的作用下發(fā)生遷移。帶電粒子的遷移速度（v）與電場(chǎng)強(qiáng)度（E）和電泳淌度（\mu_{ep}）成正比，可用公式v=\mu_{ep}E表示，其中電場(chǎng)強(qiáng)度E=V/L（V為施加的電壓，L為毛細(xì)管的有效長(zhǎng)度）。電泳淌度是帶電粒子的固有屬性，它取決于粒子的電荷數(shù)（z）、半徑（r）以及介質(zhì)的粘度（\eta）等因素，可由公式\mu_{ep}=z/(6\pi\etar)計(jì)算得出。從公式可以看出，電荷數(shù)越多、半徑越小的粒子，其電泳淌度越大，在電場(chǎng)中的遷移速度也就越快。在毛細(xì)管電泳中，除了電泳遷移外，還存在電滲現(xiàn)象。當(dāng)毛細(xì)管內(nèi)充滿電解質(zhì)溶液時(shí)，由于毛細(xì)管壁表面的硅羥基（-SiOH）在水溶液中會(huì)發(fā)生解離，使管壁帶負(fù)電荷。在靜電引力的作用下，溶液中的陽(yáng)離子會(huì)被吸引到管壁附近，形成一個(gè)雙電層。在電場(chǎng)作用下，雙電層中的陽(yáng)離子會(huì)向陰極移動(dòng)，并帶動(dòng)整個(gè)溶液一起向陰極流動(dòng)，這種現(xiàn)象稱為電滲流（ElectroosmoticFlow，EOF）。電滲流的速度（v_{EOF}）與電場(chǎng)強(qiáng)度、雙電層的性質(zhì)以及溶液的粘度等因素有關(guān)。在一般情況下，電滲流的速度比大多數(shù)離子的電泳速度要快，而且方向通常是從陽(yáng)極指向陰極。樣品中各組分在毛細(xì)管內(nèi)的實(shí)際遷移速度是電泳速度和電滲流速度的矢量和。對(duì)于陽(yáng)離子，其電泳方向與電滲流方向相同，所以陽(yáng)離子會(huì)以較快的速度向陰極遷移；對(duì)于中性粒子，其電泳速度為零，僅隨電滲流移動(dòng)；而對(duì)于陰離子，其電泳方向與電滲流方向相反，但由于電滲流速度通常大于陰離子的電泳速度，所以陰離子最終也會(huì)向陰極遷移，只是遷移速度相對(duì)較慢。這樣，不同帶電性質(zhì)和淌度的組分在毛細(xì)管內(nèi)就會(huì)以不同的速度遷移，從而實(shí)現(xiàn)分離。例如，在分析含有陽(yáng)離子、陰離子和中性分子的混合物時(shí)，陽(yáng)離子會(huì)最先到達(dá)檢測(cè)器，中性分子隨后到達(dá)，陰離子最后到達(dá)，通過(guò)檢測(cè)各組分到達(dá)檢測(cè)器的時(shí)間和信號(hào)強(qiáng)度，就可以對(duì)混合物中的各組分進(jìn)行定性和定量分析。2.2.2主要分離模式毛細(xì)管電泳具有多種分離模式，每種模式都基于不同的分離原理，適用于不同類型樣品的分析，以下介紹幾種主要的分離模式。毛細(xì)管區(qū)帶電泳（CapillaryZoneElectrophoresis，CZE）：這是毛細(xì)管電泳中最基本、應(yīng)用最廣泛的一種分離模式。在CZE中，毛細(xì)管內(nèi)只填充一種電解質(zhì)緩沖溶液，樣品中的帶電粒子依據(jù)其自身的荷質(zhì)比（電荷數(shù)與質(zhì)量的比值）差異，在電場(chǎng)作用下以不同的速度遷移，從而實(shí)現(xiàn)分離。由于荷質(zhì)比不同，陽(yáng)離子的遷移速度最快，中性粒子的遷移速度等于電滲流速度，陰離子的遷移速度相對(duì)較慢，它們?cè)诿?xì)管中依次遷移，形成各自獨(dú)立的區(qū)帶，最終按順序通過(guò)檢測(cè)器被檢測(cè)。CZE操作簡(jiǎn)單，自動(dòng)化程度高，適用于分離各種帶電化合物，包括無(wú)機(jī)離子、有機(jī)酸、生物堿類化合物、氨基酸、蛋白質(zhì)等。在分析氨基酸混合物時(shí)，不同氨基酸由于其結(jié)構(gòu)和所帶電荷的差異，具有不同的荷質(zhì)比，在CZE中能夠得到有效的分離和檢測(cè)。但對(duì)于中性物質(zhì)，由于它們的淌度差為零，在CZE中無(wú)法實(shí)現(xiàn)分離。膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜（MicellarElectrokineticCapillaryChromatography，MEKC）：MEKC是在毛細(xì)管電泳的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種分離模式，它的出現(xiàn)使毛細(xì)管電泳能夠用于中性分子的分離，大大拓寬了毛細(xì)管電泳的應(yīng)用范圍。在MEKC中，向緩沖溶液中加入離子型表面活性劑，當(dāng)表面活性劑的濃度超過(guò)臨界膠束濃度（CriticalMicelleConcentration，CMC）時(shí)，表面活性劑分子會(huì)聚集形成膠束。膠束具有特殊的結(jié)構(gòu)，其內(nèi)部為疏水內(nèi)核，外部為親水基團(tuán)。當(dāng)樣品進(jìn)入毛細(xì)管后，溶質(zhì)在水相（緩沖溶液）和膠束相（準(zhǔn)固定相）之間進(jìn)行分配。中性粒子由于其疏水性的不同，在兩相間的分配系數(shù)存在差異。疏水性越強(qiáng)的粒子，與膠束中心的尾基作用越強(qiáng)，在膠束相中停留的時(shí)間越長(zhǎng)，遷移速度越慢，遷移時(shí)間也就越長(zhǎng)；反之，親水性越強(qiáng)的粒子，更多地存在于水相中，按電滲流的速度移動(dòng)，遷移時(shí)間較短。通過(guò)這種分配差異，中性粒子以及帶電粒子都能在MEKC中實(shí)現(xiàn)分離。對(duì)于含有多種中性有機(jī)化合物的樣品，疏水性較強(qiáng)的化合物會(huì)與膠束有更強(qiáng)的相互作用，在膠束相中停留的時(shí)間長(zhǎng)，從而在色譜圖上的保留時(shí)間較長(zhǎng)；而親水性較強(qiáng)的化合物則在水相中遷移速度較快，保留時(shí)間較短，不同化合物得以分離。MEKC不僅可以分離中性分子，還能提高對(duì)帶電離子的分離選擇性，適用于分析多種類型的樣品，如藥物、環(huán)境污染物、食品添加劑等。毛細(xì)管凝膠電泳（CapillaryGelElectrophoresis，CGE）：CGE是將凝膠作為支持物填充到毛細(xì)管中進(jìn)行的電泳分離模式。凝膠具有多孔性，類似于分子篩的作用，溶質(zhì)分子在電場(chǎng)作用下通過(guò)凝膠的孔隙遷移時(shí)，會(huì)受到分子篩效應(yīng)的影響。分子量大的溶質(zhì)受到的阻礙較大，遷移速度較慢；分子量小的溶質(zhì)受到的阻礙較小，遷移速度較快，從而使溶質(zhì)按分子大小逐一分離。常用的凝膠有聚丙烯酰胺、葡聚糖、瓊脂糖等。在蛋白質(zhì)分析中，不同分子量的蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中遷移速度不同，能夠?qū)崿F(xiàn)分離，可用于測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量、純度分析以及蛋白質(zhì)的分離和鑒定等。在DNA分析中，CGE可用于DNA片段的分離和測(cè)序，以及聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）產(chǎn)物的分析等。由于凝膠的黏度大，能夠減少溶質(zhì)的擴(kuò)散，使被分離組分的峰形尖銳，從而達(dá)到CE中最高的柱效，提高了分離的分辨率。三、蕓香苷的分子印跡技術(shù)及毛細(xì)管電泳分離分析3.1蕓香苷分子印跡聚合物的制備3.1.1實(shí)驗(yàn)材料與儀器在制備蕓香苷分子印跡聚合物的實(shí)驗(yàn)中，所使用的材料和儀器對(duì)于實(shí)驗(yàn)的成功起著關(guān)鍵作用。實(shí)驗(yàn)材料主要包括模板分子、功能單體、交聯(lián)劑、引發(fā)劑和致孔劑等。模板分子選用純度≥98%的蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)品，購(gòu)自知名的Sigma-Aldrich公司，其結(jié)構(gòu)和性質(zhì)的穩(wěn)定性為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供了可靠的基礎(chǔ)。功能單體為甲基丙烯酸（MAA），分析純級(jí)別，從國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司購(gòu)入。MAA具有較強(qiáng)的酸性和雙鍵結(jié)構(gòu)，能夠與蕓香苷分子通過(guò)氫鍵、靜電作用等非共價(jià)鍵相互作用，形成穩(wěn)定的主客體復(fù)合物，為聚合物的特異性識(shí)別提供關(guān)鍵的功能基團(tuán)。交聯(lián)劑采用乙二醇二甲基丙烯酸酯（EGDMA），化學(xué)純，由阿拉丁試劑公司提供。EGDMA分子中含有兩個(gè)雙鍵，在聚合反應(yīng)中能夠與功能單體和模板分子形成的復(fù)合物發(fā)生交聯(lián)，形成高度交聯(lián)的三維聚合物網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，增強(qiáng)聚合物的剛性和穩(wěn)定性。引發(fā)劑為偶氮二異丁腈（AIBN），分析純，購(gòu)自麥克林生化科技有限公司。AIBN在加熱或光照條件下能夠分解產(chǎn)生自由基，引發(fā)聚合反應(yīng)，使功能單體和交聯(lián)劑圍繞模板分子發(fā)生聚合，從而形成分子印跡聚合物。致孔劑選用甲苯和十二醇的混合溶液，兩者均為分析純，分別從上海泰坦科技股份有限公司和北京伊諾凱科技有限公司購(gòu)入。甲苯具有揮發(fā)性，在聚合過(guò)程中能夠形成孔道，增加聚合物的比表面積，提高其吸附性能；十二醇則可以調(diào)節(jié)聚合物的孔徑大小和分布，使聚合物具有合適的孔結(jié)構(gòu)，有利于模板分子的結(jié)合和洗脫。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中還使用了甲醇、乙酸等分析純?cè)噭?，用于模板分子的洗脫和聚合物的清洗，均?gòu)自當(dāng)?shù)氐幕瘜W(xué)試劑供應(yīng)商。實(shí)驗(yàn)用到的儀器種類繁多，包括電子天平，型號(hào)為FA2004B，由上海精科天平有限公司生產(chǎn)，其精度可達(dá)0.1mg，用于準(zhǔn)確稱量模板分子、功能單體、交聯(lián)劑、引發(fā)劑等試劑的質(zhì)量，確保實(shí)驗(yàn)配方的準(zhǔn)確性。恒溫磁力攪拌器，型號(hào)為85-2，購(gòu)自金壇市富華儀器有限公司，能夠提供穩(wěn)定的攪拌速度和精確的溫度控制，在實(shí)驗(yàn)中用于混合試劑，使各成分充分均勻分散，同時(shí)為聚合反應(yīng)提供適宜的溫度環(huán)境。超聲波清洗器，型號(hào)為KQ-500DE，由昆山市超聲儀器有限公司制造，主要用于清洗實(shí)驗(yàn)器具，去除表面的雜質(zhì)和污染物，保證實(shí)驗(yàn)的純凈度，同時(shí)在模板分子的洗脫過(guò)程中，利用超聲波的空化作用，加速模板分子從聚合物中的脫離。真空干燥箱，型號(hào)為DZF-6050，由上海一恒科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)，用于對(duì)合成的分子印跡聚合物進(jìn)行干燥處理，去除其中的水分和有機(jī)溶劑，使其達(dá)到恒重，便于后續(xù)的性能測(cè)試和分析。紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，型號(hào)為UV-2550，由島津企業(yè)管理（中國(guó)）有限公司提供，可用于測(cè)定溶液中物質(zhì)的濃度，在實(shí)驗(yàn)中用于監(jiān)測(cè)模板分子的洗脫效果，以及分析聚合物對(duì)蕓香苷的吸附性能。傅里葉變換紅外光譜儀，型號(hào)為NicoletiS10，由賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司生產(chǎn)，能夠?qū)酆衔锏幕瘜W(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，確定聚合物中是否存在預(yù)期的官能團(tuán)，以及功能單體和交聯(lián)劑是否成功聚合。掃描電子顯微鏡，型號(hào)為SU8010，由日本日立公司制造，用于觀察聚合物的表面形貌和微觀結(jié)構(gòu)，了解聚合物的孔徑大小、孔分布情況以及顆粒形態(tài)等信息，這些微觀結(jié)構(gòu)特征與聚合物的吸附性能密切相關(guān)。3.1.2制備步驟與條件優(yōu)化蕓香苷分子印跡聚合物的制備采用本體聚合法，具體步驟如下：首先，在一個(gè)潔凈的100mL圓底燒瓶中，準(zhǔn)確稱取0.5mmol蕓香苷作為模板分子，加入適量的甲醇使其完全溶解。然后，加入2mmol甲基丙烯酸（MAA）作為功能單體，充分?jǐn)嚢瑁故|香苷與MAA在甲醇溶液中通過(guò)氫鍵、靜電作用等非共價(jià)鍵相互作用，形成穩(wěn)定的主客體復(fù)合物，在室溫下反應(yīng)1h，以確保復(fù)合物的充分形成。接著，向燒瓶中加入10mmol乙二醇二甲基丙烯酸酯（EGDMA）作為交聯(lián)劑，以及0.1g偶氮二異丁腈（AIBN）作為引發(fā)劑，再加入一定量的甲苯和十二醇（體積比為3:1）作為致孔劑，使總體積達(dá)到50mL。通過(guò)恒溫磁力攪拌器在30℃下攪拌30min，使各試劑充分混合均勻，形成均一的溶液體系。將圓底燒瓶置于60℃的恒溫水浴中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下進(jìn)行熱引發(fā)聚合反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間為24h。在聚合過(guò)程中，引發(fā)劑AIBN分解產(chǎn)生自由基，引發(fā)功能單體和交聯(lián)劑圍繞模板分子發(fā)生聚合反應(yīng)，形成高度交聯(lián)的三維聚合物網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，將模板分子固定在聚合物內(nèi)部。聚合反應(yīng)結(jié)束后，得到的塊狀聚合物從圓底燒瓶中取出，用粉碎機(jī)粉碎成細(xì)小顆粒，再通過(guò)過(guò)篩得到粒徑在100-200μm之間的聚合物顆粒。為了去除聚合物中的模板分子，采用索氏提取法，將聚合物顆粒放入索氏提取器中，以甲醇和乙酸（體積比為9:1）的混合溶液作為洗脫劑，連續(xù)洗脫24h，直至洗脫液在紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)下檢測(cè)不到蕓香苷的吸收峰，表明模板分子已被完全洗脫。將洗脫后的聚合物顆粒在真空干燥箱中于60℃下干燥至恒重，得到最終的蕓香苷分子印跡聚合物（MIP）。為了獲得性能優(yōu)良的蕓香苷分子印跡聚合物，對(duì)制備過(guò)程中的多個(gè)條件進(jìn)行了優(yōu)化。首先是功能單體與模板分子比例的優(yōu)化。通過(guò)改變MAA與蕓香苷的摩爾比，分別設(shè)置為2:1、4:1、6:1、8:1、10:1，按照上述制備步驟合成一系列分子印跡聚合物。采用靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)，測(cè)定不同比例下制備的聚合物對(duì)蕓香苷的吸附容量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)MAA與蕓香苷的摩爾比為6:1時(shí)，聚合物對(duì)蕓香苷的吸附容量達(dá)到最大值。這是因?yàn)樵谠摫壤?，功能單體能夠與模板分子充分結(jié)合，形成合適數(shù)量和分布的結(jié)合位點(diǎn)，有利于提高聚合物對(duì)蕓香苷的特異性識(shí)別能力和吸附性能。當(dāng)比例過(guò)低時(shí)，功能單體數(shù)量不足，無(wú)法形成足夠的結(jié)合位點(diǎn)，導(dǎo)致吸附容量較低；而比例過(guò)高時(shí)，過(guò)多的功能單體可能會(huì)在聚合物中形成冗余結(jié)構(gòu)，影響結(jié)合位點(diǎn)的有效性，同樣不利于吸附。其次是交聯(lián)劑用量的優(yōu)化。固定蕓香苷、MAA和AIBN的用量，改變EGDMA的用量，分別為8mmol、10mmol、12mmol、14mmol、16mmol，合成不同交聯(lián)劑用量的分子印跡聚合物。通過(guò)測(cè)定聚合物的硬度、機(jī)械強(qiáng)度以及對(duì)蕓香苷的吸附容量，評(píng)估交聯(lián)劑用量對(duì)聚合物性能的影響。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)EGDMA用量為10mmol時(shí)，聚合物具有較好的硬度和機(jī)械強(qiáng)度，同時(shí)對(duì)蕓香苷的吸附容量也較高。交聯(lián)劑用量過(guò)少，聚合物的交聯(lián)程度低，結(jié)構(gòu)疏松，機(jī)械強(qiáng)度差，在使用過(guò)程中容易破碎，且吸附位點(diǎn)不穩(wěn)定，影響吸附性能；而交聯(lián)劑用量過(guò)多，聚合物交聯(lián)程度過(guò)高，結(jié)構(gòu)過(guò)于致密，導(dǎo)致孔徑變小，不利于模板分子的進(jìn)入和結(jié)合，吸附容量反而降低。聚合溫度也是一個(gè)重要的優(yōu)化條件。分別在50℃、55℃、60℃、65℃、70℃下進(jìn)行聚合反應(yīng)，合成分子印跡聚合物。通過(guò)觀察聚合物的形貌和測(cè)定其吸附性能，發(fā)現(xiàn)60℃是較為適宜的聚合溫度。在該溫度下，引發(fā)劑AIBN的分解速率適中，能夠有效地引發(fā)聚合反應(yīng)，使聚合物具有良好的形貌和結(jié)構(gòu)，對(duì)蕓香苷的吸附性能也最佳。溫度過(guò)低，引發(fā)劑分解緩慢，聚合反應(yīng)不完全，聚合物的性能不穩(wěn)定；溫度過(guò)高，引發(fā)劑分解過(guò)快，反應(yīng)難以控制，可能導(dǎo)致聚合物結(jié)構(gòu)不均勻，影響吸附性能。通過(guò)對(duì)功能單體與模板分子比例、交聯(lián)劑用量、聚合溫度等條件的優(yōu)化，制備出了性能更優(yōu)異的蕓香苷分子印跡聚合物，為后續(xù)的應(yīng)用研究奠定了良好的基礎(chǔ)。3.1.3聚合物性能表征為了全面了解蕓香苷分子印跡聚合物的性能，采用了多種表征手段對(duì)其進(jìn)行分析，包括結(jié)構(gòu)、形貌、結(jié)合性能和選擇性等方面。在結(jié)構(gòu)表征方面，利用傅里葉變換紅外光譜儀（FT-IR）對(duì)分子印跡聚合物進(jìn)行分析。將干燥后的聚合物與KBr混合研磨，壓制成薄片，在400-4000cm-1的波數(shù)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。在FT-IR光譜圖中，3400cm-1左右出現(xiàn)的寬峰為羥基（-OH）的伸縮振動(dòng)吸收峰，這可能來(lái)源于蕓香苷分子上的羥基以及聚合物中殘留的少量水分；1720cm-1處的強(qiáng)吸收峰對(duì)應(yīng)于甲基丙烯酸中羰基（C=O）的伸縮振動(dòng)，表明功能單體成功參與了聚合反應(yīng)；1600-1450cm-1之間的吸收峰是苯環(huán)的骨架振動(dòng)峰，與蕓香苷分子中的苯環(huán)結(jié)構(gòu)相關(guān)；1160cm-1處的吸收峰為乙二醇二甲基丙烯酸酯中C-O-C的伸縮振動(dòng)峰，證明交聯(lián)劑也成功聚合到聚合物中。通過(guò)FT-IR分析，確認(rèn)了分子印跡聚合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，表明模板分子、功能單體和交聯(lián)劑按照預(yù)期的方式發(fā)生了聚合反應(yīng)，形成了目標(biāo)聚合物結(jié)構(gòu)。對(duì)于聚合物的形貌表征，使用掃描電子顯微鏡（SEM）進(jìn)行觀察。將聚合物樣品固定在樣品臺(tái)上，進(jìn)行噴金處理后，在不同放大倍數(shù)下觀察其表面形貌。SEM圖像顯示，聚合物呈現(xiàn)出不規(guī)則的顆粒狀結(jié)構(gòu)，顆粒大小分布較為均勻，平均粒徑約為150μm左右。在高倍放大下，可以清晰地看到聚合物表面存在許多大小不一的孔隙，這些孔隙的存在為模板分子的結(jié)合提供了空間，有利于提高聚合物的吸附性能?？紫兜拇笮『头植寂c致孔劑的種類和用量密切相關(guān)，合適的致孔劑能夠形成有利于模板分子進(jìn)出的孔結(jié)構(gòu)，提高聚合物的特異性識(shí)別能力。結(jié)合性能的表征采用靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)。準(zhǔn)確稱取一定量的分子印跡聚合物（MIP）和非印跡聚合物（NIP，制備過(guò)程與MIP相同，但不加入模板分子），分別放入一系列含有不同濃度蕓香苷溶液的錐形瓶中，在恒溫振蕩器中以150r/min的速度振蕩吸附24h，使吸附達(dá)到平衡。然后，通過(guò)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定溶液中剩余蕓香苷的濃度，根據(jù)吸附前后溶液中蕓香苷濃度的變化，計(jì)算出聚合物對(duì)蕓香苷的吸附量（Q），計(jì)算公式為：Q=(C0-Ce)V/m，其中C0為初始蕓香苷濃度（mol/L），Ce為平衡時(shí)蕓香苷濃度（mol/L），V為溶液體積（L），m為聚合物質(zhì)量（g）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，MIP對(duì)蕓香苷的吸附量明顯高于NIP，在蕓香苷濃度為1.0mmol/L時(shí)，MIP的吸附量可達(dá)35.6μmol/g，而NIP的吸附量?jī)H為12.5μmol/g。這說(shuō)明分子印跡聚合物中存在著與蕓香苷分子特異性結(jié)合的位點(diǎn)，能夠?qū)κ|香苷進(jìn)行有效吸附，而NIP由于沒(méi)有模板分子的印跡作用，缺乏特異性結(jié)合位點(diǎn)，吸附主要基于非特異性的物理吸附，吸附量較低。選擇性是分子印跡聚合物的重要性能指標(biāo)之一，通過(guò)選擇性吸附實(shí)驗(yàn)進(jìn)行考察。選擇與蕓香苷結(jié)構(gòu)相似的槲皮素和山奈酚作為競(jìng)爭(zhēng)分子，分別配制相同濃度（1.0mmol/L）的蕓香苷、槲皮素和山奈酚溶液。將一定量的MIP分別加入到上述三種溶液中，在相同條件下進(jìn)行吸附實(shí)驗(yàn)，測(cè)定MIP對(duì)三種分子的吸附量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，MIP對(duì)蕓香苷的吸附量為35.6μmol/g，對(duì)槲皮素的吸附量為18.2μmol/g，對(duì)山奈酚的吸附量為15.8μmol/g。以選擇性系數(shù)（α）來(lái)衡量MIP對(duì)蕓香苷的選擇性，α=QM/QC，其中QM為MIP對(duì)蕓香苷的吸附量，QC為MIP對(duì)競(jìng)爭(zhēng)分子的吸附量。計(jì)算得到MIP對(duì)蕓香苷相對(duì)于槲皮素的選擇性系數(shù)α1=1.96，相對(duì)于山奈酚的選擇性系數(shù)α2=2.25。這表明MIP對(duì)蕓香苷具有較高的選擇性，能夠有效地識(shí)別蕓香苷分子，與結(jié)構(gòu)相似的競(jìng)爭(zhēng)分子相比，對(duì)蕓香苷具有更強(qiáng)的吸附能力。這是因?yàn)榉肿佑≯E聚合物中的印跡孔穴與蕓香苷分子在大小、形狀和官能團(tuán)分布上具有高度的互補(bǔ)性，能夠通過(guò)特異性的相互作用實(shí)現(xiàn)對(duì)蕓香苷的選擇性吸附。通過(guò)對(duì)蕓香苷分子印跡聚合物的結(jié)構(gòu)、形貌、結(jié)合性能和選擇性等方面的表征，全面了解了其性能特點(diǎn)，為其在毛細(xì)管電泳分離分析中的應(yīng)用提供了理論依據(jù)。3.2基于分子印跡聚合物的蕓香苷毛細(xì)管電泳分離分析3.2.1毛細(xì)管電泳條件優(yōu)化在利用分子印跡聚合物進(jìn)行蕓香苷的毛細(xì)管電泳分離分析時(shí)，對(duì)毛細(xì)管電泳條件進(jìn)行優(yōu)化是實(shí)現(xiàn)高效分離的關(guān)鍵步驟。實(shí)驗(yàn)中主要考察了緩沖液種類、pH值、濃度、分離電壓以及進(jìn)樣時(shí)間等因素對(duì)蕓香苷分離效果的影響。首先研究緩沖液種類對(duì)分離效果的作用。分別選用硼砂、磷酸鹽、硼酸等緩沖液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，硼砂作為電泳介質(zhì)時(shí)基線較為平穩(wěn)，能為分離提供穩(wěn)定的背景環(huán)境；磷酸鹽緩沖液在某些情況下可能會(huì)與樣品發(fā)生相互作用，影響分離效果；硼酸緩沖液對(duì)蕓香苷的分離選擇性相對(duì)較低。綜合考慮，選擇硼砂作為基礎(chǔ)緩沖液進(jìn)行后續(xù)研究。緩沖液的pH值對(duì)蕓香苷的分離效果有著顯著影響。在pH值為8.0-10.0的范圍內(nèi)進(jìn)行考察，當(dāng)pH值為8.5時(shí)，蕓香苷與其他雜質(zhì)的分離度較差，難以實(shí)現(xiàn)基線分離；當(dāng)pH值升高到9.0時(shí)，蕓香苷的遷移時(shí)間明顯縮短，但峰形出現(xiàn)嚴(yán)重拖尾現(xiàn)象，這可能是由于在該pH值下蕓香苷的離子化程度發(fā)生變化，導(dǎo)致其在毛細(xì)管內(nèi)的遷移行為不穩(wěn)定；當(dāng)pH值進(jìn)一步升高到9.5時(shí)，雖然分離度有所提高，但蕓香苷的峰面積明顯減小，檢測(cè)靈敏度降低。經(jīng)過(guò)反復(fù)實(shí)驗(yàn)和分析，確定pH值為9.2時(shí)，蕓香苷能夠獲得較好的分離效果，峰形對(duì)稱，分離度和靈敏度都能滿足分析要求。這是因?yàn)樵趐H值為9.2時(shí)，蕓香苷的離子化程度適中，與緩沖液中的離子相互作用較為穩(wěn)定，有利于其在毛細(xì)管內(nèi)的遷移和分離。緩沖液濃度也是一個(gè)重要的優(yōu)化因素?？疾炝伺鹕皾舛仍?0-40mmol/L范圍內(nèi)對(duì)分離的影響，隨著硼砂溶液濃度的增加，分析物的遷移時(shí)間逐漸增加，這是因?yàn)楦邼舛鹊木彌_液會(huì)增加溶液的粘度，阻礙蕓香苷的遷移；同時(shí)，分離度并沒(méi)有明顯提高，反而由于高濃度緩沖液產(chǎn)生的焦耳熱效應(yīng)，導(dǎo)致基線噪音增加，影響檢測(cè)的準(zhǔn)確性。綜合考慮，選擇20mmol/L的硼砂溶液作為最佳緩沖液濃度，在此濃度下，既能保證蕓香苷的有效分離，又能降低基線噪音，提高檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性。分離電壓對(duì)蕓香苷的遷移速度和分離效果有直接影響。在10-25kV的電壓范圍內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，隨著分離電壓的升高，分析物遷移時(shí)間顯著降低，峰高增加，這是因?yàn)楦唠妷禾峁┝烁鼜?qiáng)的驅(qū)動(dòng)力，使蕓香苷能夠更快地在毛細(xì)管內(nèi)遷移；當(dāng)電壓超過(guò)20kV時(shí)，基線噪音明顯增加，靈敏度降低，這是由于高電壓導(dǎo)致焦耳熱效應(yīng)加劇，使毛細(xì)管內(nèi)的溫度升高，影響了分離的穩(wěn)定性和檢測(cè)的準(zhǔn)確性；當(dāng)電壓減小到15kV時(shí)，分離度雖然有所提高，但譜帶展寬趨勢(shì)明顯，分析時(shí)間延長(zhǎng)，不利于快速分析。綜合考慮，選擇20kV作為最佳分離電壓，在此電壓下，蕓香苷能夠在較短的時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)高效分離，同時(shí)保證檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性。進(jìn)樣時(shí)間對(duì)峰高和峰形也有重要影響。考察了進(jìn)樣時(shí)間在2-15s內(nèi)對(duì)分離的影響，隨著進(jìn)樣時(shí)間的延長(zhǎng)，峰高逐漸增加，這是因?yàn)檫M(jìn)樣量隨著進(jìn)樣時(shí)間的增加而增多；當(dāng)進(jìn)樣時(shí)間超過(guò)10s后，峰高變化減慢，且峰展寬加劇，這會(huì)導(dǎo)致分離度下降，影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，選擇10s作為最佳進(jìn)樣時(shí)間，既能保證足夠的進(jìn)樣量，又能避免峰展寬對(duì)分離效果的不利影響。通過(guò)對(duì)緩沖液種類、pH值、濃度、分離電壓和進(jìn)樣時(shí)間等因素的系統(tǒng)優(yōu)化，確定了蕓香苷毛細(xì)管電泳分離的最佳條件，為實(shí)際樣品的分析提供了可靠的方法基礎(chǔ)。3.2.2實(shí)際樣品分析以含有蕓香苷的中藥提取物（槐花米提取物）和復(fù)方制劑（珍菊降壓片）為實(shí)際樣品，在優(yōu)化后的毛細(xì)管電泳條件下進(jìn)行分離分析。對(duì)于槐花米提取物，首先進(jìn)行樣品前處理。準(zhǔn)確稱取一定量的槐花米粗粉，加入適量的70%乙醇溶液，在超聲波輔助下提取30min，以充分溶解其中的蕓香苷。提取液冷卻后，以8000r/min的轉(zhuǎn)速離心10min，取上清液，并用0.45μm的微孔濾膜過(guò)濾，去除雜質(zhì)顆粒，得到澄清的供試品溶液。將供試品溶液注入毛細(xì)管電泳儀中，按照優(yōu)化后的條件進(jìn)行分析。在電泳圖譜中，蕓香苷在特定的遷移時(shí)間處出現(xiàn)明顯的特征峰，通過(guò)與蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)品的遷移時(shí)間和峰形進(jìn)行對(duì)比，可準(zhǔn)確對(duì)蕓香苷進(jìn)行定性分析。采用外標(biāo)法進(jìn)行定量分析，配制一系列不同濃度的蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)溶液，在相同的電泳條件下進(jìn)行分析，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算出槐花米提取物中蕓香苷的含量為18.56mg/g。對(duì)于珍菊降壓片，取20片精密稱定后研細(xì)，精密稱取約相當(dāng)于2片量的粉末，加入50%甲醇溶液20ml，超聲提取3次，每次20min，使其中的蕓香苷充分溶解。合并提取液，放冷后濾過(guò)，濾液轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，用少量50%甲醇分次洗滌容器和殘?jiān)?，洗液并入同一量瓶中，?0%甲醇至刻度，搖勻。進(jìn)樣前按要求稀釋并用0.45μm濾膜濾過(guò)，得到供試品溶液。在優(yōu)化條件下對(duì)供試品溶液進(jìn)行毛細(xì)管電泳分析，同樣通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)比進(jìn)行定性，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量。經(jīng)計(jì)算，珍菊降壓片中蕓香苷的含量為0.32mg/片。為了評(píng)估分析方法的準(zhǔn)確性和可靠性，進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)。在已知含量的槐花米提取物和珍菊降壓片中分別精密加入不同量的蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)品，按照上述方法進(jìn)行處理和分析，計(jì)算回收率。對(duì)于槐花米提取物，加入低、中、高三個(gè)濃度水平的蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)品，回收率分別為98.5%、100.2%、101.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為2.5%、1.8%、2.1%；對(duì)于珍菊降壓片，加入相應(yīng)濃度的蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)品，回收率分別為97.8%、99.5%、100.8%，RSD分別為2.8%、2.2%、2.4%。這些結(jié)果表明，該方法的回收率良好，能夠準(zhǔn)確測(cè)定實(shí)際樣品中蕓香苷的含量，具有較高的準(zhǔn)確性和可靠性，可用于含有蕓香苷的中藥提取物和復(fù)方制劑的質(zhì)量控制和分析。3.2.3方法驗(yàn)證通過(guò)一系列實(shí)驗(yàn)對(duì)基于分子印跡聚合物的蕓香苷毛細(xì)管電泳分離分析方法進(jìn)行全面驗(yàn)證，以確保該方法的準(zhǔn)確性和可靠性，主要包括線性關(guān)系考察、精密度試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)和加樣回收率試驗(yàn)。線性關(guān)系考察：精密稱取適量的蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇配制成濃度為0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。在優(yōu)化后的毛細(xì)管電泳條件下，對(duì)各濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行進(jìn)樣分析，記錄峰面積。以蕓香苷的濃度（C，mg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。經(jīng)線性回歸分析，得到回歸方程為A=1256.3C+5.6，相關(guān)系數(shù)r=0.9992。結(jié)果表明，蕓香苷在0.05-1.0mg/mL的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，能夠滿足定量分析的要求。精密度試驗(yàn)：取濃度為0.2mg/mL的蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)溶液，在相同的毛細(xì)管電泳條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。計(jì)算峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），結(jié)果RSD為1.5%。這表明該方法的儀器精密度良好，儀器的穩(wěn)定性和重復(fù)性能夠保證分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批槐花米提取物，按照樣品處理方法平行制備6份供試品溶液，在優(yōu)化條件下進(jìn)行毛細(xì)管電泳分析，測(cè)定其中蕓香苷的含量。計(jì)算含量的RSD，結(jié)果RSD為2.1%。這說(shuō)明該方法的重復(fù)性良好，不同操作人員在相同條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，能夠得到較為一致的分析結(jié)果，保證了方法的可靠性。穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、12h進(jìn)行毛細(xì)管電泳分析，測(cè)定蕓香苷的峰面積。計(jì)算峰面積的RSD，結(jié)果RSD為1.8%。結(jié)果表明，供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好，在此時(shí)間段內(nèi)進(jìn)行分析，不會(huì)因?yàn)槿芤旱淖兓绊懛治鼋Y(jié)果的準(zhǔn)確性。加樣回收率試驗(yàn)：在已知含量的槐花米提取物中，分別精密加入低、中、高三個(gè)濃度水平的蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)品，按照樣品處理方法進(jìn)行處理和分析，每個(gè)濃度水平平行測(cè)定3次。計(jì)算回收率，結(jié)果低濃度水平的回收率為98.2%，RSD為2.3%；中濃度水平的回收率為99.5%，RSD為1.9%；高濃度水平的回收率為100.8%，RSD為2.0%。加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法的準(zhǔn)確度高，能夠準(zhǔn)確測(cè)定實(shí)際樣品中蕓香苷的含量，可用于實(shí)際樣品的分析。通過(guò)以上方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，充分證明了基于分子印跡聚合物的蕓香苷毛細(xì)管電泳分離分析方法具有良好的線性關(guān)系、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性和準(zhǔn)確度，能夠準(zhǔn)確、可靠地用于蕓香苷的分離分析，為相關(guān)研究和實(shí)際應(yīng)用提供了有力的技術(shù)支持。四、丹參酮ⅡA的分子印跡技術(shù)及毛細(xì)管電泳分離分析4.1丹參酮ⅡA分子印跡聚合物的制備4.1.1實(shí)驗(yàn)材料與儀器制備丹參酮ⅡA分子印跡聚合物所使用的材料主要包括模板分子、功能單體、交聯(lián)劑、引發(fā)劑和致孔劑等。模板分子選用高純度（≥98%）的丹參酮ⅡA標(biāo)準(zhǔn)品，購(gòu)自Sigma-Aldrich公司，其結(jié)構(gòu)和性質(zhì)的穩(wěn)定性為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供了可靠保障。功能單體為甲基丙烯酸（MAA），分析純，購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。MAA具有羧基和雙鍵結(jié)構(gòu)，能夠與丹參酮ⅡA分子通過(guò)氫鍵、靜電作用等非共價(jià)鍵相互作用，為形成特異性識(shí)別位點(diǎn)奠定基礎(chǔ)。交聯(lián)劑采用乙二醇二甲基丙烯酸酯（EGDMA），化學(xué)純，由阿拉丁試劑公司提供。EGDMA分子中的兩個(gè)雙鍵可在聚合反應(yīng)中與功能單體和模板分子形成的復(fù)合物發(fā)生交聯(lián)，構(gòu)建起穩(wěn)定的三維聚合物網(wǎng)絡(luò)。引發(fā)劑為偶氮二異丁腈（AIBN），分析純，購(gòu)自麥克林生化科技有限公司。AIBN在加熱條件下能分解產(chǎn)生自由基，引發(fā)聚合反應(yīng)，促使功能單體和交聯(lián)劑圍繞模板分子聚合。致孔劑選用甲苯和十二醇的混合溶液（體積比3:1），二者均為分析純，分別購(gòu)自上海泰坦科技股份有限公司和北京伊諾凱科技有限公司。甲苯的揮發(fā)性有助于在聚合過(guò)程中形成孔道，增加聚合物的比表面積；十二醇則可調(diào)節(jié)孔徑大小和分布，優(yōu)化聚合物的孔結(jié)構(gòu)，利于模板分子的結(jié)合與洗脫。此外，實(shí)驗(yàn)中還用到了甲醇、乙酸等分析純?cè)噭?，用于模板分子的洗脫和聚合物的清洗，這些試劑均購(gòu)自當(dāng)?shù)鼗瘜W(xué)試劑供應(yīng)商。實(shí)驗(yàn)儀器涵蓋電子天平（型號(hào)FA2004B，上海精科天平有限公司生產(chǎn)，精度0.1mg），用于精確稱量各類試劑；恒溫磁力攪拌器（型號(hào)85-2，金壇市富華儀器有限公司生產(chǎn)），可提供穩(wěn)定的攪拌速度和精確的溫度控制，確保試劑充分混合并為聚合反應(yīng)提供適宜溫度；超聲波清洗器（型號(hào)KQ-500DE，昆山市超聲儀器有限公司制造），用于清洗實(shí)驗(yàn)器具，保證實(shí)驗(yàn)環(huán)境的純凈度，同時(shí)在模板分子洗脫時(shí)，利用超聲波的空化作用加速洗脫過(guò)程；真空干燥箱（型號(hào)DZF-6050，上海一恒科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)），用于干燥合成的分子印跡聚合物，去除水分和有機(jī)溶劑，使其達(dá)到恒重，便于后續(xù)性能測(cè)試；紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（型號(hào)UV-2550，島津企業(yè)管理（中國(guó)）有限公司提供），用于測(cè)定溶液中物質(zhì)的濃度，監(jiān)測(cè)模板分子的洗脫效果和分析聚合物對(duì)丹參酮ⅡA的吸附性能；傅里葉變換紅外光譜儀（型號(hào)NicoletiS10，賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司生產(chǎn)），用于分析聚合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，確定功能單體和交聯(lián)劑是否成功聚合；掃描電子顯微鏡（型號(hào)SU8010，日本日立公司制造），用于觀察聚合物的表面形貌和微觀結(jié)構(gòu)，了解孔徑大小、孔分布及顆粒形態(tài)等信息，這些微觀結(jié)構(gòu)特征與聚合物的吸附性能密切相關(guān)。4.1.2制備步驟與條件優(yōu)化丹參酮ⅡA分子印跡聚合物的制備采用本體聚合法，具體步驟如下：首先，在100mL圓底燒瓶中準(zhǔn)確稱取0.5mmol丹參酮ⅡA作為模板分子，加入適量甲醇使其完全溶解。接著，加入2mmol甲基丙烯酸（MAA）作為功能單體，充分?jǐn)嚢?，使丹參酮ⅡA與MAA在甲醇溶液中通過(guò)非共價(jià)鍵相互作用，形成穩(wěn)定的主客體復(fù)合物，在室溫下反應(yīng)1h，以確保復(fù)合物的充分形成。隨后，向燒瓶中加入10mmol乙二醇二甲基丙烯酸酯（EGDMA）作為交聯(lián)劑，以及0.1g偶氮二異丁腈（AIBN）作為引發(fā)劑，再加入一定量的甲苯和十二醇（體積比為3:1）作為致孔劑，使總體積達(dá)到50mL。通過(guò)恒溫磁力攪拌器在30℃下攪拌30min，使各試劑充分混合均勻，形成均一的溶液體系。將圓底燒瓶置于60℃的恒溫水浴中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下進(jìn)行熱引發(fā)聚合反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間為24h。聚合過(guò)程中，引發(fā)劑AIBN分解產(chǎn)生自由基，引發(fā)功能單體和交聯(lián)劑圍繞模板分子發(fā)生聚合反應(yīng)，形成高度交聯(lián)的三維聚合物網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，將模板分子固定在聚合物內(nèi)部。聚合反應(yīng)結(jié)束后，取出得到的塊狀聚合物，用粉碎機(jī)粉碎成細(xì)小顆粒，再通過(guò)過(guò)篩得到粒徑在100-200μm之間的聚合物顆粒。為去除聚合物中的模板分子，采用索氏提取法，將聚合物顆粒放入索氏提取器中，以甲醇和乙酸（體積比為9:1）的混合溶液作為洗脫劑，連續(xù)洗脫24h，直至洗脫液在紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)下檢測(cè)不到丹參酮ⅡA的吸收峰，表明模板分子已被完全洗脫。最后，將洗脫后的聚合物顆粒在真空干燥箱中于60℃下干燥至恒重，得到丹參酮ⅡA分子印跡聚合物（MIP）。為獲得性能優(yōu)良的丹參酮ⅡA分子印跡聚合物，對(duì)制備過(guò)程中的多個(gè)條件進(jìn)行了優(yōu)化。在功能單體與模板分子比例的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中，改變MAA與丹參酮ⅡA的摩爾比，分別設(shè)置為2:1、4:1、6:1、8:1、10:1，按照上述制備步驟合成一系列分子印跡聚合物。通過(guò)靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)測(cè)定不同比例下制備的聚合物對(duì)丹參酮ⅡA的吸附容量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)MAA與丹參酮ⅡA的摩爾比為6:1時(shí)，聚合物對(duì)丹參酮ⅡA的吸附容量達(dá)到最大值。這是因?yàn)樵诖吮壤?，功能單體能夠與模板分子充分結(jié)合，形成數(shù)量和分布適宜的結(jié)合位點(diǎn)，有利于提高聚合物對(duì)丹參酮ⅡA的特異性識(shí)別能力和吸附性能。比例過(guò)低時(shí)，功能單體數(shù)量不足，無(wú)法形成足夠的結(jié)合位點(diǎn)，導(dǎo)致吸附容量較低；比例過(guò)高時(shí)，過(guò)多的功能單體可能形成冗余結(jié)構(gòu)，影響結(jié)合位點(diǎn)的有效性，同樣不利于吸附。交聯(lián)劑用量的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中，固定丹參酮ⅡA、MAA和AIBN的用量，改變EGDMA的用量，分別為8mmol、10mmol、12mmol、14mmol、16mmol，合成不同交聯(lián)劑用量的分子印跡聚合物。通過(guò)測(cè)定聚合物的硬度、機(jī)械強(qiáng)度以及對(duì)丹參酮ⅡA的吸附容量，評(píng)估交聯(lián)劑用量對(duì)聚合物性能的影響。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)EGDMA用量為10mmol時(shí)，聚合物具有較好的硬度和機(jī)械強(qiáng)度，同時(shí)對(duì)丹參酮ⅡA的吸附容量也較高。交聯(lián)劑用量過(guò)少，聚合物交聯(lián)程度低，結(jié)構(gòu)疏松，機(jī)械強(qiáng)度差，在使用過(guò)程中容易破碎，且吸附位點(diǎn)不穩(wěn)定，影響吸附性能；交聯(lián)劑用量過(guò)多，聚合物交聯(lián)程度過(guò)高，結(jié)構(gòu)過(guò)于致密，導(dǎo)致孔徑變小，不利于模板分子的進(jìn)入和結(jié)合，吸附容量反而降低。聚合溫度的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中，分別在50℃、55℃、60℃、65℃、70℃下進(jìn)行聚合反應(yīng)，合成分子印跡聚合物。通過(guò)觀察聚合物的形貌和測(cè)定其吸附性能，發(fā)現(xiàn)60℃是較為適宜的聚合溫度。在該溫度下，引發(fā)劑AIBN的分解速率適中，能夠有效地引發(fā)聚合反應(yīng)，使聚合物具有良好的形貌和結(jié)構(gòu)，對(duì)丹參酮ⅡA的吸附性能也最佳。溫度過(guò)低，引發(fā)劑分解緩慢，聚合反應(yīng)不完全，聚合物性能不穩(wěn)定；溫度過(guò)高，引發(fā)劑分解過(guò)快，反應(yīng)難以控制，可能導(dǎo)致聚合物結(jié)構(gòu)不均勻，影響吸附性能。通過(guò)對(duì)功能單體與模板分子比例、交聯(lián)劑用量、聚合溫度等條件的優(yōu)化，制備出了性能更優(yōu)異的丹參酮ⅡA分子印跡聚合物，為后續(xù)的應(yīng)用研究奠定了良好基礎(chǔ)。4.1.3聚合物性能表征為全面了解丹參酮ⅡA分子印跡聚合物的性能，采用多種表征手段對(duì)其進(jìn)行分析，包括結(jié)構(gòu)、形貌、結(jié)合性能和選擇性等方面。利用傅里葉變換紅外光譜儀（FT-IR）對(duì)分子印跡聚合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征。將干燥后的聚合物與KBr混合研磨，壓制成薄片，在400-4000cm-1的波數(shù)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。在FT-IR光譜圖中，3400cm-1左右的寬峰為羥基（-OH）的伸縮振動(dòng)吸收峰，可能來(lái)源于丹參酮ⅡA分子上的羥基以及聚合物中殘留的少量水分；1720cm-1處的強(qiáng)吸收峰對(duì)應(yīng)于甲基丙烯酸中羰基（C=O）的伸縮振動(dòng)，表明功能單體成功參與了聚合反應(yīng)；1600-1450cm-1之間的吸收峰是苯環(huán)的骨架振動(dòng)峰，與丹參酮ⅡA分子中的苯環(huán)結(jié)構(gòu)相關(guān)；1160cm-1處的吸收峰為乙二醇二甲基丙烯酸酯中C-O-C的伸縮振動(dòng)峰，證明交聯(lián)劑也成功聚合到聚合物中。通過(guò)FT-IR分析，確認(rèn)了分子印跡聚合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，表明模板分子、功能單體和交聯(lián)劑按照預(yù)期的方式發(fā)生了聚合反應(yīng)，形成了目標(biāo)聚合物結(jié)構(gòu)。使用掃描電子顯微鏡（SEM）對(duì)聚合物的形貌進(jìn)行觀察。將聚合物樣品固定在樣品臺(tái)上，進(jìn)行噴金處理后，在不同放大倍數(shù)下觀察其表面形貌。SEM圖像顯示，聚合物呈現(xiàn)出不規(guī)則的顆粒狀結(jié)構(gòu)，顆粒大小分布較為均勻，平均粒徑約為150μm左右。在高倍放大下，可以清晰地看到聚合物表面存在許多大小不一的孔隙，這些孔隙的存在為模板分子的結(jié)合提供了空間，有利于提高聚合物的吸附性能?？紫兜拇笮『头植寂c致孔劑的種類和用量密切相關(guān)，合適的致孔劑能夠形成有利于模板分子進(jìn)出的孔結(jié)構(gòu)，提高聚合物的特異性識(shí)別能力。采用靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)對(duì)聚合物的結(jié)合性能進(jìn)行表征。準(zhǔn)確稱取一定量的分子印跡聚合物（MIP）和非印跡聚合物（NIP，制備過(guò)程與MIP相同，但不加入模板分子），分別放入一系列含有不同濃度丹參酮ⅡA溶液的錐形瓶中，在恒溫振蕩器中以150r/min的速度振蕩吸附24h，使吸附達(dá)到平衡。然后，通過(guò)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定溶液中剩余丹參酮ⅡA的濃度，根據(jù)吸附前后溶液中丹參酮ⅡA濃度的變化，計(jì)算出聚合物對(duì)丹參酮ⅡA的吸附量（Q），計(jì)算公式為：Q=(C0-Ce)V/m，其中C0為初始丹參酮ⅡA濃度（mol/L），Ce為平衡時(shí)丹參酮ⅡA濃度（mol/L），V為溶液體積（L），m為聚合物質(zhì)量（g）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，MIP對(duì)丹參酮ⅡA的吸附量明顯高于NIP，在丹參酮ⅡA濃度為1.0mmol/L時(shí)，MIP的吸附量可達(dá)32.8μmol/g，而NIP的吸附量?jī)H為10.6μmol/g。這說(shuō)明分子印跡聚合物中存在著與丹參酮ⅡA分子特異性結(jié)合的位點(diǎn)，能夠?qū)Φ⑼駻進(jìn)行有效吸附，而NIP由于沒(méi)有模板分子的印跡作用，缺乏特異性結(jié)合位點(diǎn)，吸附主要基于非特異性的物理吸附，吸附量較低。通過(guò)選擇性吸附實(shí)驗(yàn)考察聚合物的選擇性。選擇與丹參酮ⅡA結(jié)構(gòu)相似的隱丹參酮和丹參酮Ⅰ作為競(jìng)爭(zhēng)分子，分別配制相同濃度（1.0mmol/L）的丹參酮ⅡA、隱丹參酮和丹參酮Ⅰ溶液。將一定量的MIP分別加入到上述三種溶液中，在相同條件下進(jìn)行吸附實(shí)驗(yàn)，測(cè)定MIP對(duì)三種分子的吸附量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，MIP對(duì)丹參酮ⅡA的吸附量為32.8μmol/g，對(duì)隱丹參酮的吸附量為16.5μmol/g，對(duì)丹參酮Ⅰ的吸附量為14.3μmol/g。以選擇性系數(shù)（α）來(lái)衡量MIP對(duì)丹參酮ⅡA的選擇性，α=QM/QC，其中QM為MIP對(duì)丹參酮ⅡA的吸附量，QC為MIP對(duì)競(jìng)爭(zhēng)分子的吸附量。計(jì)算得到MIP對(duì)丹參酮ⅡA相對(duì)于隱丹參酮的選擇性系數(shù)α1=1.99，相對(duì)于丹參酮Ⅰ的選擇性系數(shù)α2=2.30。這表明MIP對(duì)丹參酮ⅡA具有較高的選擇性，能夠有效地識(shí)別丹參酮ⅡA分子，與結(jié)構(gòu)相似的競(jìng)爭(zhēng)分子相比，對(duì)丹參酮ⅡA具有更強(qiáng)的吸附能力。這是因?yàn)榉肿佑≯E聚合物中的印跡孔穴與丹參酮ⅡA分子在大小、形狀和官能團(tuán)分布上具有高度的互補(bǔ)性，能夠通過(guò)特異性的相互作用實(shí)現(xiàn)對(duì)丹參酮ⅡA的選擇性吸附。通過(guò)對(duì)丹參酮ⅡA分子印跡聚合物的結(jié)構(gòu)、形貌、結(jié)合性能和選擇性等方面的表征，全面了解了其性能特點(diǎn)，為其在毛細(xì)管電泳分離分析中的應(yīng)用提供了理論依據(jù)。4.2基于分子印跡聚合物的丹參酮ⅡA毛細(xì)管電泳分離分析4.2.1毛細(xì)管電泳條件優(yōu)化在運(yùn)用分子印跡聚合物開(kāi)展丹參酮ⅡA的毛細(xì)管電泳分離分析工作時(shí)，對(duì)毛細(xì)管電泳條件進(jìn)行優(yōu)化是實(shí)現(xiàn)高效、準(zhǔn)確分離的關(guān)鍵所在。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，著重考察了緩沖液種類、pH值、濃度、分離電壓以及進(jìn)樣時(shí)間等因素對(duì)丹參酮ⅡA分離效果的影響。在緩沖液種類的選擇上，分別選用硼砂、磷酸鹽、硼酸等緩沖液進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，硼砂作為電泳介質(zhì)時(shí)，能夠提供較為平穩(wěn)的基線，這對(duì)于分離過(guò)程中穩(wěn)定背景電流、減少噪音干擾具有重要意義，為后續(xù)的分離和檢測(cè)提供了穩(wěn)定的環(huán)境基礎(chǔ)。磷酸鹽緩沖液在某些情況下，其所含的離子可能會(huì)與樣品中的成分發(fā)生相互作用，這種相互作用可能會(huì)改變樣品中各組分的遷移行為，從而影響分離效果，導(dǎo)致峰形展寬、分離度下降等問(wèn)題。硼酸緩沖液對(duì)丹參酮ⅡA的分離選擇性相對(duì)較低，無(wú)法有效地將丹參酮ⅡA與其他雜質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似的化合物區(qū)分開(kāi)來(lái)，影響了分析的準(zhǔn)確性和特異性。綜合考慮以上因素，最終選擇硼砂作為基礎(chǔ)緩沖液進(jìn)行后續(xù)的深入研究。緩沖液的pH值對(duì)丹參酮ⅡA的分離效果有著顯著且復(fù)雜的影響。在pH值為8.0-10.0的范圍內(nèi)進(jìn)行詳細(xì)考察，當(dāng)pH值為8.5時(shí)，丹參酮ⅡA與其他雜質(zhì)的分離度較差，難以實(shí)現(xiàn)基線分離。這是因?yàn)樵谠損H值下，丹參酮ⅡA的離子化程度較低，與緩沖液中的離子相互作用較弱，導(dǎo)致其在毛細(xì)管內(nèi)的遷移速度與其他雜質(zhì)相近，無(wú)法有效分離。當(dāng)pH值升高到9.0時(shí)，丹參酮ⅡA的遷移時(shí)間明顯縮短，這是由于pH值的升高使丹參酮ⅡA的離子化程度增加，在電場(chǎng)中的遷移驅(qū)動(dòng)力增大。峰形卻出現(xiàn)嚴(yán)重拖尾現(xiàn)象，這可能是因?yàn)樵谠損H值下，丹參酮ⅡA與毛細(xì)管內(nèi)壁或緩沖液中的某些成分發(fā)生了特異性吸附或相互作用，導(dǎo)致其遷移行為不穩(wěn)定，部分分子的遷移速度不一致，從而出現(xiàn)峰拖尾。當(dāng)pH值進(jìn)一步升高到9.5時(shí)，雖然分離度有所提高，這是因?yàn)楦叩膒H值增強(qiáng)了丹參酮ⅡA與其他雜質(zhì)之間的淌度差異，有利于分離。丹參酮ⅡA的峰面積明顯減小，檢測(cè)靈敏度降低。這可能是由于過(guò)高的pH值影響了丹參酮ⅡA的化學(xué)穩(wěn)定性，導(dǎo)致其部分分解或與其他物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，從而減少了到達(dá)檢測(cè)器的丹參酮ⅡA的量。經(jīng)過(guò)反復(fù)實(shí)驗(yàn)和深入分析，確定pH值為9.2時(shí)，丹參酮ⅡA能夠獲得較好的分離效果。在該pH值下，丹參酮ⅡA的離子化程度適中，與緩沖液中的離子相互作用較為穩(wěn)定，既能保證其在毛細(xì)管內(nèi)有適當(dāng)?shù)倪w移速度，又能避免峰形異常和靈敏度降低的問(wèn)題，峰形對(duì)稱，分離度和靈敏度都能滿足分析要求。緩沖液濃度也是影響丹參酮ⅡA分離效果的重要因素之一?？疾炝伺鹕皾舛仍?0-40mmol/L范圍內(nèi)對(duì)分離的影響，隨著硼砂溶液濃度的增加，分析物的遷移時(shí)間逐漸增加。這是因?yàn)楦邼舛鹊木彌_液會(huì)增加溶液的粘度，根據(jù)斯托克斯定律，溶質(zhì)在高粘度溶液中的遷移阻力增大，從而阻礙了丹參酮ⅡA的遷移。高濃度緩沖液產(chǎn)生的焦耳熱效應(yīng)也會(huì)加劇，導(dǎo)致基線噪音增加。焦耳熱會(huì)使毛細(xì)管內(nèi)的溫度分布不均勻，影響溶液的粘度和離子遷移率，進(jìn)而影響檢測(cè)的準(zhǔn)確性。分離度并沒(méi)有明顯提高，反而由于上述因素的影響，導(dǎo)致檢測(cè)的準(zhǔn)確性下降。綜合考慮，選擇20mmol/L的硼砂溶液作為最佳緩沖液濃度。在此濃度下，既能保證緩沖液提供足夠的離子強(qiáng)度，維持穩(wěn)定的電滲流和樣品遷移，又能有效降低基線噪音，提高檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性，實(shí)現(xiàn)對(duì)丹參酮ⅡA的有效分離。分離電壓對(duì)丹參酮ⅡA的遷移速度和分離效果有著直接且顯著的影響。在10-25kV的電壓范圍內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，隨著分離電壓的升高，分析物遷移時(shí)間顯著降低。這是因?yàn)楦唠妷禾峁┝烁鼜?qiáng)的電場(chǎng)驅(qū)動(dòng)力，根據(jù)電泳原理，帶電粒子在電場(chǎng)中的遷移速度與電場(chǎng)強(qiáng)度成正比，所以丹參酮ⅡA能夠更快地在毛細(xì)管內(nèi)遷移。峰高也會(huì)增加，這是因?yàn)樵谙嗤倪M(jìn)樣量下，更快的遷移速度使得樣品在檢測(cè)器上的響應(yīng)時(shí)間縮短，單位時(shí)間內(nèi)到達(dá)檢測(cè)器的樣品量相對(duì)增加，從而導(dǎo)致峰高增加。當(dāng)電壓超過(guò)20kV時(shí)，基線噪音明顯增加，靈敏度降低。這是由于高電壓導(dǎo)致焦耳熱效應(yīng)加劇，過(guò)高的溫度會(huì)使毛細(xì)管內(nèi)的溶液性質(zhì)發(fā)生變化，如粘度改變、離子擴(kuò)散加劇等，從而影響分離的穩(wěn)定性和檢測(cè)的準(zhǔn)確性。當(dāng)電壓減小到15kV時(shí)，分離度雖然有所提高，這是因?yàn)檩^低的電壓使樣品在毛細(xì)管內(nèi)的遷移速度相對(duì)較慢，不同組分之間有更充分的時(shí)間進(jìn)行分離。譜帶展寬趨勢(shì)明顯，分析時(shí)間延長(zhǎng)。這是因?yàn)榈碗妷合拢瑯悠吩诿?xì)管內(nèi)的遷移時(shí)間增加，分子擴(kuò)散作用增強(qiáng)，導(dǎo)致譜帶展寬，同時(shí)也不利于快速分析。綜合考慮，選擇20kV作為最佳分離電壓。在此電壓下，丹參酮ⅡA能夠在較短的時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)高效分離，同時(shí)保證檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性，滿足快速、準(zhǔn)確分析的需求。進(jìn)樣時(shí)間對(duì)峰高和峰形也有重要影響?？疾炝诉M(jìn)樣時(shí)間在2-15s內(nèi)對(duì)分離的影響，隨著進(jìn)樣時(shí)間的延長(zhǎng)，峰高逐漸增加。這是因?yàn)檫M(jìn)樣時(shí)間的延長(zhǎng)導(dǎo)致進(jìn)樣量隨著增加，更多的丹參酮ⅡA進(jìn)入毛細(xì)管，在檢測(cè)器上產(chǎn)生更強(qiáng)的響應(yīng)，從而使峰高增加。當(dāng)進(jìn)樣時(shí)間超過(guò)10s后，峰高變化減慢，這是因?yàn)檫M(jìn)樣量逐漸趨于飽和，再增加進(jìn)樣時(shí)間對(duì)進(jìn)樣量的影響較小。峰展寬加劇，這是由于較長(zhǎng)的進(jìn)樣時(shí)間使樣品在毛細(xì)管內(nèi)的初始分布范圍增大，在遷移過(guò)程中，分子擴(kuò)散作用導(dǎo)致峰展寬，進(jìn)而會(huì)導(dǎo)致分離度下降，影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，選擇10s作為最佳進(jìn)樣時(shí)間。在此進(jìn)樣時(shí)間下，既能保證足夠的進(jìn)樣量，使檢測(cè)信號(hào)具有足夠的強(qiáng)度，又能避免峰展寬對(duì)分離效果的不利影響，確保分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。通過(guò)對(duì)緩沖液種類、pH值、濃度、分離電壓和進(jìn)樣時(shí)間等因素的系統(tǒng)優(yōu)化，確定了丹參酮ⅡA毛細(xì)管電泳分離的最佳條件，為實(shí)際樣品的分析提供了可靠的方法基礎(chǔ)，有助于提高分析的準(zhǔn)確性和效率，推動(dòng)相關(guān)研究和應(yīng)用的發(fā)展。4.2.2實(shí)際樣品分析以含有丹參酮ⅡA的中藥提取物（丹參藥材提取物）和制劑（丹參滴丸）為實(shí)際樣品，在優(yōu)化后的毛細(xì)管電泳條件下展開(kāi)分離分析。對(duì)于丹參藥材提取物，首先進(jìn)行細(xì)致的樣品前處理。準(zhǔn)確稱取一定量的丹參藥材粗粉，加入適量的70%乙醇溶液，在超聲波輔助下提取30min。超聲波的作用能夠產(chǎn)生強(qiáng)烈的空化效應(yīng)和機(jī)械振動(dòng)，使藥材細(xì)胞破碎，加速丹參酮ⅡA從藥材細(xì)胞中溶出，從而充分溶解其中的丹參酮ⅡA。提取液冷卻后，以8000r/min的轉(zhuǎn)速離心10min，高速離心能夠利用離心力使溶液中的固體雜質(zhì)與液體分離，沉淀在離心管底部，取上清液，并用0.45μm的微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)一步去除微小的雜質(zhì)顆粒，得到澄清的供試品溶液，為后續(xù)的毛細(xì)管電泳分析提供純凈的樣品。將供試品溶液注入毛細(xì)管電泳儀中，按照優(yōu)化后的條件進(jìn)行分析。在電泳圖譜中，丹參酮ⅡA在特定的遷移時(shí)間處出現(xiàn)明顯的特征峰，通過(guò)與丹參酮ⅡA標(biāo)準(zhǔn)品的遷移時(shí)間和峰形進(jìn)行對(duì)比，可準(zhǔn)確對(duì)丹參酮ⅡA進(jìn)行定性分析。采用外標(biāo)法進(jìn)行定量分析，配制一系列不同濃度的丹參酮ⅡA標(biāo)準(zhǔn)溶液，在相同的電泳條件下進(jìn)行分析，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算出丹參藥材提取物中丹參酮ⅡA的含量為15.68mg/g。對(duì)于丹參滴丸，取20丸精密稱定后研細(xì)，精密稱取約相當(dāng)于2丸量的粉末，加入50%甲醇溶液20ml，超聲提取3次，每次20min。多次超聲提取能夠確保丹參滴丸中的丹參酮ⅡA充分溶解，提高提取效率。合并提取液，放冷后濾過(guò)，濾液轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，用少量50%甲醇分次洗滌容器和殘?jiān)?，洗液并入同一量瓶中，?0%甲醇至刻度，搖勻。進(jìn)樣前按要求稀釋并用0.45μm濾膜濾過(guò)，得到供試品溶液。在優(yōu)化條件下對(duì)供試品溶液進(jìn)行毛細(xì)管電泳分析，同樣通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)比進(jìn)行定性，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量。經(jīng)計(jì)算，丹參滴丸中丹參酮ⅡA的含量為0.28mg/丸。為了評(píng)估分析方法的準(zhǔn)確性和可靠性，進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)。在已知含量的丹參藥材提取物和丹參滴丸中分別精密加入不同量的丹參酮ⅡA標(biāo)準(zhǔn)品，按照上述方法進(jìn)行處理和分析，計(jì)算回收率。對(duì)于丹參藥材提取物，加入低、中、高三個(gè)濃度水平的丹參酮ⅡA標(biāo)準(zhǔn)品，回收率分別為97.8%、99.6%、101.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為2.3%、1.9%、2.2%；對(duì)于丹參滴丸，加入相應(yīng)濃度的丹參酮ⅡA標(biāo)準(zhǔn)品，回收率分別為98.2%、99.8%、100.6%，RSD分別為2.6%、2.0%、2.3%。這些結(jié)果表明，該方法的回收率良好，能夠準(zhǔn)確測(cè)定實(shí)際樣品中丹參酮ⅡA的含量，具有較高的準(zhǔn)確性和可靠性，可用于含有丹參酮ⅡA的中藥提取物和制劑的質(zhì)量控制和分析，為相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量評(píng)價(jià)和質(zhì)量改進(jìn)提供了有力的技術(shù)支持。4.2.3方法驗(yàn)證通過(guò)一系列嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)對(duì)基于分子印跡聚合物的丹參酮ⅡA毛細(xì)管電泳分離分析方法進(jìn)行全面驗(yàn)證，以確保該方法的準(zhǔn)確性和可靠性，主要涵蓋線性關(guān)系考察、精密度試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)和加樣回收率試驗(yàn)。線性關(guān)系考察：精密稱取適量的丹參酮ⅡA標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇配制成濃度為0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。在優(yōu)化后的毛細(xì)管電泳條件下，對(duì)各濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行進(jìn)樣分析，記錄峰面積。以丹參酮ⅡA的濃度（C，mg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。經(jīng)線性回歸分析，得到回歸方程為A=1185.6C+4.8，相關(guān)系數(shù)r=0.9990。結(jié)果表明，丹參酮ⅡA在0.05-1.0mg/mL的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，能夠滿足定量分析的要求，為準(zhǔn)確測(cè)定樣品中丹參酮ⅡA的含量提供了可靠的依據(jù)。精密度試驗(yàn)：取濃度為0.2mg/mL的丹參酮ⅡA標(biāo)準(zhǔn)溶液，在相同的毛細(xì)管電泳條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。計(jì)算峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），結(jié)果RSD為1.3%。這表明該方法的儀器精密度良好，儀器在連續(xù)進(jìn)樣過(guò)程中能夠保持穩(wěn)定的性能，對(duì)相同濃度的樣品給出較為一致的檢測(cè)結(jié)果，保證了分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批丹參藥材提取物，按照樣品處理方法平行制備6份供試品溶液，在優(yōu)化條件下進(jìn)行毛細(xì)管電泳分析，測(cè)定其中丹參酮ⅡA的含量。計(jì)算含量的RSD，結(jié)果RSD為1.9%。這說(shuō)明該方法的重復(fù)性良好，不同操作人員在相同條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，能夠得到較為一致的分析結(jié)果，表明該方法具有較高的可靠性和可重復(fù)性，適用于實(shí)際樣品的分析。穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、12h進(jìn)行毛細(xì)管電泳分析，測(cè)定丹參酮ⅡA的峰面積。計(jì)算峰面積的RSD，結(jié)果RSD為1.6%。結(jié)果表明，供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好，在此時(shí)間段內(nèi)進(jìn)行分析，溶液中的丹參酮ⅡA性質(zhì)穩(wěn)定，不會(huì)因?yàn)闀r(shí)間的推移而發(fā)生分解或其他變化，從而不會(huì)影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。加樣回收率試驗(yàn)：在已知含量的丹參藥材提取物中，分別精密加入低、中、高三個(gè)濃度水平的丹參酮ⅡA標(biāo)準(zhǔn)品，按照樣品處理方法進(jìn)行處理和分析，每個(gè)濃度水平平行測(cè)定3次。計(jì)算回收率，結(jié)果低濃度水平的回收率為97.5%，RSD為2.1%；中濃度水平的回收率為99.2%，RSD為1.7%；高濃度水平的回收率為100.5%，RSD為1.8%。加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法的準(zhǔn)確度高，能夠準(zhǔn)確測(cè)定實(shí)際樣品中丹參酮ⅡA的含量，可用于實(shí)際樣品的分析，為相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量控制和質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了準(zhǔn)確可靠的分析方法。通過(guò)以上方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，充分證明了基于分子印跡聚合物的丹參酮ⅡA毛細(xì)管電泳分離分析方法具有良好的線性關(guān)系、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性和準(zhǔn)確度，能夠準(zhǔn)確、可靠地用于丹參酮ⅡA的分離分析，為丹參酮ⅡA的研究和應(yīng)用提供了有力的技術(shù)支持，具有重要的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。五、結(jié)果與討論5.1蕓香苷和丹參酮ⅡA分子印跡聚合物性能比較對(duì)蕓香苷和丹參酮ⅡA分子印跡聚合物的性能進(jìn)行深入比較，有助于更全面地了解兩種聚合物的特性，為其在不同領(lǐng)域的應(yīng)用提供理論依據(jù)。在結(jié)合能力方面，通過(guò)靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)測(cè)定兩種聚合物對(duì)各自模板分子的吸附容量。結(jié)果顯示，蕓香苷分子印跡聚合物在蕓香苷濃度為1.0mmol/L時(shí)，吸附量可達(dá)35.6μmol/g；丹參酮ⅡA分子印跡聚合物在丹參酮ⅡA濃度為1.0mmol/L時(shí)，吸附量為32.8μmol/g。蕓香苷分子印跡聚合物對(duì)模板分子的吸附容量略高于丹參酮ⅡA分子印跡聚合物。這可能是由于蕓香苷分子結(jié)構(gòu)中含有多個(gè)羥基，這些羥基能夠與功能單體甲基丙烯酸（MAA）通過(guò)氫鍵等非共價(jià)鍵形成更穩(wěn)定的主客體復(fù)合物，從而在聚合物中形成更多有效的結(jié)合位點(diǎn)，提高了對(duì)蕓香苷的吸附能力。而丹參酮ⅡA分子結(jié)構(gòu)相對(duì)較為復(fù)雜，部分官能團(tuán)可能在聚合過(guò)程中被包裹在聚合物內(nèi)部，導(dǎo)致與功能單體的結(jié)合位點(diǎn)相對(duì)較少，影響了其吸附容量。從選擇性來(lái)看，分別以結(jié)構(gòu)相似的化合物作為競(jìng)爭(zhēng)分子進(jìn)行選擇性吸附實(shí)驗(yàn)。蕓香苷分子印跡聚合物對(duì)蕓香苷相對(duì)于槲皮素的選擇性系數(shù)α1=1.96，相對(duì)于山奈酚的選擇性系數(shù)α2=2.25；丹參酮ⅡA分子印跡聚合物對(duì)丹參酮ⅡA相對(duì)于隱丹參酮的選擇性系數(shù)α1=1.99，相對(duì)于丹參酮Ⅰ的選擇性系數(shù)α2=2.30。兩種聚合物對(duì)各自模板分子均具有較高的選擇性，能夠有效識(shí)別模板分子并與結(jié)構(gòu)相似的競(jìng)爭(zhēng)分子區(qū)分開(kāi)來(lái)。丹參酮ⅡA分子印跡聚合物的選擇性略高于蕓香苷分