2025年檢驗(yàn)科微生物室輪崗知識(shí)培訓(xùn)考核試題有答案一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共30分）1.關(guān)于革蘭染色的關(guān)鍵步驟，正確的是（）A.結(jié)晶紫初染時(shí)間5分鐘B.95%乙醇脫色時(shí)間30秒C.碘液媒染時(shí)間10秒D.沙黃復(fù)染時(shí)間1分鐘答案：B解析：革蘭染色中，95%乙醇脫色是關(guān)鍵步驟，時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致革蘭陽性菌被誤染為陰性，通?？刂圃?0-30秒；結(jié)晶紫初染1分鐘，碘液媒染1分鐘，沙黃復(fù)染30秒。2.血培養(yǎng)標(biāo)本采集時(shí)，成人每瓶推薦的血液量是（）A.3-5mlB.5-8mlC.10-20mlD.20-30ml答案：C解析：成人血培養(yǎng)每瓶（需氧/厭氧）推薦采集10-20ml，兒童為1-5ml（根據(jù)體重調(diào)整），確保足夠的菌量以提高陽性率。3.以下哪種細(xì)菌需在微需氧環(huán)境（5%O?、10%CO?、85%N?）中培養(yǎng)？（）A.金黃色葡萄球菌B.空腸彎曲菌C.銅綠假單胞菌D.肺炎克雷伯菌答案：B解析：空腸彎曲菌為微需氧菌，需在微需氧環(huán)境中培養(yǎng)；其他選項(xiàng)均為需氧或兼性厭氧菌。4.進(jìn)行K-B法藥敏試驗(yàn)時(shí)，MH瓊脂的厚度應(yīng)為（）A.2mmB.4mmC.6mmD.8mm答案：B解析：K-B法要求MH瓊脂厚度為4mm，過厚會(huì)導(dǎo)致藥物擴(kuò)散范圍減小，抑菌圈變??；過薄則相反。5.以下哪種標(biāo)本的合格性判斷需以“鱗狀上皮細(xì)胞＜10個(gè)/低倍鏡視野，中性粒細(xì)胞＞25個(gè)/低倍鏡視野”為標(biāo)準(zhǔn)？（）A.尿液B.痰液C.腦脊液D.糞便答案：B解析：合格痰標(biāo)本的判斷標(biāo)準(zhǔn)為：鱗狀上皮細(xì)胞（來自上呼吸道）＜10個(gè)/低倍鏡，中性粒細(xì)胞（來自下呼吸道）＞25個(gè)/低倍，提示標(biāo)本受口咽部污染少。6.新型隱球菌的特征性染色方法是（）A.革蘭染色B.墨汁負(fù)染色C.抗酸染色D.吉姆薩染色答案：B解析：新型隱球菌有寬厚莢膜，墨汁負(fù)染色可清晰顯示莢膜（背景黑色，菌體透亮），是其特征性鑒別方法。7.以下哪種細(xì)菌屬于苛養(yǎng)菌，需在含5%羊血的巧克力瓊脂中培養(yǎng)？（）A.大腸埃希菌B.流感嗜血桿菌C.肺炎鏈球菌D.屎腸球菌答案：B解析：流感嗜血桿菌需要X因子（血紅素）和V因子（NAD），巧克力瓊脂加熱破壞紅細(xì)胞釋放X、V因子，是其適宜培養(yǎng)基；大腸埃希菌可在普通瓊脂生長(zhǎng)，肺炎鏈球菌需血瓊脂但非苛養(yǎng)，屎腸球菌為腸球菌屬，營(yíng)養(yǎng)要求不高。8.CLSI2024版標(biāo)準(zhǔn)中，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的判定依據(jù)是（）A.頭孢西丁紙片法抑菌圈≤21mmB.苯唑西林MIC≥4μg/mlC.青霉素結(jié)合蛋白PBP2a陰性D.以上均是答案：A解析：CLSI推薦頭孢西丁紙片法（抑菌圈≤21mm）或苯唑西林鹽瓊脂篩選法（≥6μg/ml）作為MRSA的判定標(biāo)準(zhǔn)；PBP2a檢測(cè)為輔助方法。9.進(jìn)行真菌鏡檢時(shí)，10%KOH溶液的作用是（）A.固定標(biāo)本B.溶解角質(zhì)蛋白，清晰顯示菌絲/孢子C.抑制細(xì)菌生長(zhǎng)D.增強(qiáng)染色效果答案：B解析：10%KOH可消化標(biāo)本中的角質(zhì)蛋白、細(xì)胞碎片等，使真菌菌絲或孢子更易觀察。10.以下哪種操作會(huì)導(dǎo)致血培養(yǎng)污染率升高？（）A.嚴(yán)格消毒皮膚（碘酊→75%乙醇）B.采集兩套（不同部位）血培養(yǎng)C.采血后先注入?yún)捬跗?，再注入需氧瓶D.使用過期的培養(yǎng)瓶答案：D解析：使用過期培養(yǎng)瓶可能導(dǎo)致培養(yǎng)基失效或污染，增加污染率；嚴(yán)格皮膚消毒、采集兩套、厭氧瓶?jī)?yōu)先注入（避免空氣進(jìn)入）均為降低污染的規(guī)范操作。11.分枝桿菌抗酸染色（萋-尼法）的關(guān)鍵步驟是（）A.石碳酸品紅初染時(shí)加熱B.3%鹽酸乙醇脫色C.亞甲藍(lán)復(fù)染D.以上均是答案：A解析：抗酸染色中，石碳酸品紅加熱可促使染料進(jìn)入分枝桿菌的蠟質(zhì)細(xì)胞壁，是染色成功的關(guān)鍵；脫色和復(fù)染為常規(guī)步驟。12.以下哪種微生物不能在人工培養(yǎng)基中生長(zhǎng)？（）A.肺炎支原體B.梅毒螺旋體C.白假絲酵母菌D.流感病毒答案：B解析：梅毒螺旋體（蒼白密螺旋體）需在活的宿主細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)，無法在人工培養(yǎng)基中培養(yǎng)；肺炎支原體可在含血清的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，流感病毒需細(xì)胞培養(yǎng)，白假絲酵母菌可在沙保弱培養(yǎng)基生長(zhǎng)。13.進(jìn)行β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)時(shí)，最常用的底物是（）A.頭孢硝噻吩B.亞胺培南C.氨芐西林D.阿莫西林答案：A解析：頭孢硝噻吩（nitrocefin）是β-內(nèi)酰胺酶的顯色底物，酶作用后顏色由黃色變?yōu)榧t色，是快速檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶的金標(biāo)準(zhǔn)。14.以下哪種情況需報(bào)告“正常菌群”而非具體致病菌？（）A.清潔中段尿培養(yǎng)出大腸埃希菌（菌落計(jì)數(shù)10?CFU/ml）B.痰培養(yǎng)出草綠色鏈球菌（優(yōu)勢(shì)菌）C.腦脊液培養(yǎng)出肺炎鏈球菌D.傷口分泌物培養(yǎng)出金黃色葡萄球菌（純培養(yǎng)）答案：B解析：草綠色鏈球菌是口咽部正常菌群，若痰培養(yǎng)中為優(yōu)勢(shì)菌且無其他致病菌，可能為污染或定植，需結(jié)合臨床判斷；其他選項(xiàng)均為明確感染證據(jù)。15.MALDI-TOF質(zhì)譜鑒定細(xì)菌時(shí)，需使用的靶板類型是（）A.不銹鋼靶板B.一次性塑料靶板C.磁性靶板D.鍍金靶板答案：A解析：MALDI-TOF通常使用不銹鋼靶板，表面平整且導(dǎo)電性好，利于離子化；塑料靶板可能影響信號(hào)強(qiáng)度。二、多項(xiàng)選擇題（每題3分，共15分，多選、少選、錯(cuò)選均不得分）1.關(guān)于培養(yǎng)基的質(zhì)量控制，正確的是（）A.新批次培養(yǎng)基需進(jìn)行無菌試驗(yàn)（35℃培養(yǎng)48小時(shí)無細(xì)菌生長(zhǎng)）B.巧克力瓊脂需檢測(cè)X、V因子是否充足（接種流感嗜血桿菌ATCC49247應(yīng)生長(zhǎng)）C.SS瓊脂需檢測(cè)抑制革蘭陽性菌的能力（接種金黃色葡萄球菌ATCC25923應(yīng)不生長(zhǎng)）D.血瓊脂需檢測(cè)溶血反應(yīng)（接種肺炎鏈球菌ATCC49619應(yīng)顯示α溶血）答案：ABCD解析：培養(yǎng)基質(zhì)控需包括無菌試驗(yàn)、性能測(cè)試（目標(biāo)菌生長(zhǎng)、抑制非目標(biāo)菌、特殊反應(yīng)如溶血），各選項(xiàng)均符合要求。2.以下屬于生物安全二級(jí)（BSL-2）實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范的是（）A.操作高致病性病原微生物（如結(jié)核分枝桿菌）時(shí)需在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行B.實(shí)驗(yàn)室入口張貼生物危害標(biāo)識(shí)C.工作人員需穿戴防護(hù)服、手套、護(hù)目鏡D.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后用75%乙醇對(duì)臺(tái)面消毒答案：ABCD解析：BSL-2實(shí)驗(yàn)室需滿足：生物安全柜操作感染性材料、標(biāo)識(shí)明確、個(gè)人防護(hù)裝備齊全、每日消毒等，結(jié)核分枝桿菌雖為BSL-3菌（部分實(shí)驗(yàn)室按BSL-2加強(qiáng)管理），但操作時(shí)仍需在安全柜內(nèi)。3.關(guān)于厭氧菌培養(yǎng)的注意事項(xiàng)，正確的是（）A.標(biāo)本采集后需30分鐘內(nèi)送檢B.使用厭氧運(yùn)輸培養(yǎng)基（含還原劑如巰基乙酸鹽）C.厭氧罐需用美藍(lán)指示劑監(jiān)測(cè)厭氧環(huán)境（美藍(lán)褪色表示厭氧）D.懷疑脆弱擬桿菌感染時(shí)，可選用BBE培養(yǎng)基（膽汁七葉苷瓊脂）答案：ABCD解析：厭氧菌對(duì)氧敏感，需快速送檢、使用厭氧運(yùn)輸培養(yǎng)基；美藍(lán)在有氧時(shí)呈藍(lán)色，無氧時(shí)褪色；BBE培養(yǎng)基可抑制兼性厭氧菌，促進(jìn)脆弱擬桿菌生長(zhǎng)（菌落周圍有黑暈）。4.以下哪些屬于分子生物學(xué)檢測(cè)方法？（）A.16SrRNA基因測(cè)序B.熒光原位雜交（FISH）C.多重PCRD.基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF）答案：ABC解析：MALDI-TOF屬于蛋白質(zhì)譜技術(shù)，非分子生物學(xué)方法；16SrRNA測(cè)序、FISH、多重PCR均基于核酸檢測(cè)。5.關(guān)于耐藥菌報(bào)告的注意事項(xiàng)，正確的是（）A.報(bào)告ESBL陽性大腸埃希菌時(shí)，需提示對(duì)頭孢菌素和氨曲南耐藥B.報(bào)告VRE（萬古霉素耐藥腸球菌）時(shí)，需標(biāo)注具體耐藥表型（VanA/VanB）C.耐碳青霉烯類腸桿菌科細(xì)菌（CRE）需同時(shí)報(bào)告碳青霉烯酶檢測(cè)結(jié)果（如KPC、NDM）D.所有耐藥菌報(bào)告均需標(biāo)注CLSI折點(diǎn)依據(jù)答案：ABCD解析：耐藥菌報(bào)告需包含耐藥機(jī)制、表型及折點(diǎn)依據(jù)，以指導(dǎo)臨床用藥。三、簡(jiǎn)答題（每題8分，共40分）1.簡(jiǎn)述痰標(biāo)本的采集、運(yùn)送及合格性判斷流程。答案：（1）采集：患者用清水漱口3次，深咳留取下呼吸道痰液（避免唾液），晨痰最佳；無痰者可霧化誘導(dǎo)（3%NaCl）。（2）運(yùn)送：標(biāo)本需在2小時(shí)內(nèi)送檢（室溫≤2小時(shí)，4℃≤24小時(shí)），避免細(xì)菌過度生長(zhǎng)。（3）合格性判斷：鏡檢鱗狀上皮細(xì)胞＜10個(gè)/低倍鏡視野（LPF），中性粒細(xì)胞＞25個(gè)/LPF；或二者比例＜1:2.5（鱗狀上皮細(xì)胞:中性粒細(xì)胞）。不合格標(biāo)本需聯(lián)系臨床重新采集。2.詳述革蘭染色的操作步驟及各步驟原理。答案：步驟：（1）涂片固定：取菌液涂于載玻片，火焰固定（殺死細(xì)菌并貼附玻片）。（2）初染：滴加結(jié)晶紫染液，作用1分鐘（堿性染料與細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)合）。（3）媒染：滴加盧戈碘液，作用1分鐘（與結(jié)晶紫形成復(fù)合物，增強(qiáng)與細(xì)胞壁結(jié)合力）。（4）脫色：滴加95%乙醇，輕輕晃動(dòng)至無紫色脫出（約10-30秒）；革蘭陽性菌細(xì)胞壁肽聚糖層厚，乙醇脫水后孔隙縮小，保留結(jié)晶紫-碘復(fù)合物；革蘭陰性菌肽聚糖層薄，脂類含量高，乙醇溶解脂類后孔隙增大，復(fù)合物被洗脫。（5）復(fù)染：滴加沙黃染液，作用30秒（紅色染料使脫色后的革蘭陰性菌著色）。3.列舉5種常見的細(xì)菌生化鑒定試驗(yàn)及其原理。答案：（1）氧化酶試驗(yàn)：檢測(cè)細(xì)菌是否含有細(xì)胞色素氧化酶。試劑（四甲基對(duì)苯二胺）與氧化酶反應(yīng)生成紫色醌類化合物（陽性為紫色，如銅綠假單胞菌）。（2）觸酶試驗(yàn)：檢測(cè)過氧化氫酶。細(xì)菌分解H?O?產(chǎn)生O?（氣泡），陽性如葡萄球菌（與鏈球菌鑒別）。（3）吲哚試驗(yàn)：檢測(cè)色氨酸酶。細(xì)菌分解色氨酸生成吲哚，與對(duì)二甲氨基苯甲醛反應(yīng)生成紅色玫瑰吲哚（陽性如大腸埃希菌）。（4）VP試驗(yàn)：檢測(cè)乙酰甲基甲醇。細(xì)菌分解葡萄糖生成丙酮酸，進(jìn)一步生成乙酰甲基甲醇，在強(qiáng)堿環(huán)境中被氧化為二乙酰，與胍基化合物反應(yīng)呈紅色（陽性如肺炎克雷伯菌）。（5）硝酸鹽還原試驗(yàn)：檢測(cè)硝酸鹽還原酶。細(xì)菌將硝酸鹽（NO??）還原為亞硝酸鹽（NO??）或氮?dú)猓∟?）；加甲、乙液（對(duì)氨基苯磺酸+α-萘胺）后顯紅色為亞硝酸鹽存在（陽性），無顏色變化需加鋅粉（若仍無顏色，說明還原為N?，仍為陽性）。4.簡(jiǎn)述血培養(yǎng)陽性后的處理流程。答案：（1）報(bào)危急值：發(fā)現(xiàn)陽性報(bào)警后，立即電話通知臨床（記錄時(shí)間、通知人、接收人）。（2）涂片鏡檢：取培養(yǎng)液涂片，革蘭染色觀察菌體形態(tài)（如革蘭陽性球菌/陰性桿菌），初步報(bào)告（如“革蘭陽性球菌，疑似葡萄球菌屬”）。（3）轉(zhuǎn)種分離：將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種至血瓊脂、巧克力瓊脂（需氧）和厭氧血瓊脂（厭氧），35℃培養(yǎng)18-24小時(shí)。（4）鑒定與藥敏：分離到純培養(yǎng)后，用MALDI-TOF質(zhì)譜或生化鑒定系統(tǒng)（如VITEK2）鑒定菌種；根據(jù)CLSI標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行藥敏試驗(yàn)（如K-B法或自動(dòng)化系統(tǒng)）。（5）終末結(jié)合鏡檢、培養(yǎng)、鑒定及藥敏結(jié)果，發(fā)出正式報(bào)告（如“金黃色葡萄球菌，對(duì)苯唑西林敏感”）。（6）污染判斷：若兩套血培養(yǎng)僅1瓶陽性，且為皮膚正常菌群（如凝固酶陰性葡萄球菌），需提示可能污染；若2套均陽性，結(jié)合臨床判斷為感染。5.闡述微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)的核心要點(diǎn)（至少5點(diǎn)）。答案：（1）實(shí)驗(yàn)室分級(jí)管理：根據(jù)操作病原微生物的危害程度，BSL-2實(shí)驗(yàn)室需配備生物安全柜、自動(dòng)閉門、洗手池等；操作BSL-3病原體需在BSL-3實(shí)驗(yàn)室（如結(jié)核分枝桿菌）。（2）個(gè)人防護(hù)裝備（PPE）：穿戴防護(hù)服、手套、護(hù)目鏡/面罩；接觸氣溶膠或高風(fēng)險(xiǎn)操作時(shí)使用N95口罩或動(dòng)力送風(fēng)呼吸器。（3）銳器管理：使用安全型采血針、鑷子，禁止用手直接接觸銳器；銳器盒滿3/4時(shí)封閉，按感染性廢物處理。（4）醫(yī)療廢物處理：感染性廢物（培養(yǎng)基、標(biāo)本）需高壓蒸汽滅菌（121℃，30分鐘）后丟棄；病理性廢物（組織標(biāo)本）按特殊廢物處理；化學(xué)廢物（如甲醛）分類收集交專業(yè)機(jī)構(gòu)。（5）暴露后處理：發(fā)生銳器傷或標(biāo)本濺入眼/口時(shí)，立即擠壓傷口（從近心端向遠(yuǎn)心端），流動(dòng)水沖洗，消毒（碘伏）；黏膜暴露用生理鹽水沖洗；報(bào)告主管并進(jìn)行暴露后預(yù)防（如乙肝暴露后注射免疫球蛋白）。（6）環(huán)境消毒：每日工作結(jié)束后用1000mg/L含氯消毒液擦拭臺(tái)面、儀器；污染區(qū)域用2000mg/L含氯消毒液覆蓋30分鐘后清潔。四、案例分析題（共15分）患者，男，65歲，因“發(fā)熱、咳嗽、咳膿痰3天”入院。體溫38.9℃，WBC16.2×10?/L（中性粒細(xì)胞89%），胸部CT提示右肺下葉實(shí)變影。痰標(biāo)本送檢微生物室，鏡檢顯示：鱗狀上皮細(xì)胞5個(gè)/LPF，中性粒細(xì)胞30個(gè)/LPF；培養(yǎng)結(jié)果：血瓊脂平板可見灰白色、黏液型菌落（優(yōu)勢(shì)菌），革蘭染色為陰性桿菌，氧化酶陰性，TSI試驗(yàn)：斜面/底層均黃色（產(chǎn)酸），H?S陰性；IMViC試驗(yàn)：吲哚（-）、甲基紅（+）、VP（-）、枸櫞酸鹽（+）。問題：1.該