煙草抗番茄斑萎病毒鑒定技術規(guī)程2025-10-29實施2025-10-29實施I本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》給出的規(guī)則起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由云南省煙草專賣局(公司)提出。本文件由云南省煙草標準化技術委員會(YNTC12)歸口。本文件起草單位：云南省煙草農業(yè)科學研究院、云南省煙草公司昆明市公司。本文件主要起草人：于海芹、黃昌軍、劉勇、袁誠、曾建敏、童治軍、姜寧、方敦煌、謝永輝。本文件的發(fā)布機構提請注意，聲明符合本文件時，可能涉及到本標準的相關專利的使用，具體的專一種抗番茄斑萎病毒煙草植株的篩選方法(ZL20161005486.3)本文件的發(fā)布機構對于上述專利的真實性、有效性和范圍無任何立場。上述專利持有人已向本文件的發(fā)布機構保證，他們同意在公平、合理、無歧視基礎上，免費許可任何組織或者個人在實施該地方標準時實施專利。相關信息可通過以下聯(lián)系方式獲得：專利權人：云南省煙草農業(yè)科學研究院。地址：云南省昆明市五華區(qū)圓通街33號。請注意除上述專利外，本文件的某些內容仍可能涉及專利，本文件的發(fā)布機構不承擔識別這些專利11范圍本文件規(guī)定了煙草植株材料抗番茄斑萎病毒(tomatospottedwiltorthotospovirus,TSWV)毒源制備與接種方法和煙草材料抗病性鑒定。本文件適用于煙草的栽培品種、育種材料、種質資源以及野生種等植株材料對TSWV抗性的鑒定和評價。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T23222-2008煙草病蟲害分級及調查方法3術語和定義下列術語和定義適用于本標準。TSWV屬于布尼亞病毒目(Bunyavirales),番茄斑萎病毒科(Tospoviridae),正番茄斑萎病毒屬3.2煙草斑萎病Tobaccospottedwiltdisease,TSWD由TSWV侵染煙草引起的病害，病害癥狀見附錄A。指人工接種抗病性鑒定，依據(jù)TSWV侵染煙草植株的特性，葉片接種病毒，誘發(fā)病害，觀察煙草植株對TSWV的病癥反應，以病情指數(shù)差異評價煙草材料抗病性的過程。4毒源制備與接種方法將本氏煙(Nicotianabenthamiana)(附錄B)種子在溫度為20℃~30℃溫室或防蟲網室中育苗，2片～3片真葉時移植至花盆中，挑選生長健壯的3片～4片真葉的煙苗，備用。2在人工氣候箱、光照培養(yǎng)室或60目防蟲日光溫室中接種，溫度宜為22℃~25℃、每日光照時間不少于14h、濕度宜為60%～80%。取僅感染TSWV的病葉1g,放于研缽中，加入5mL接種緩沖液(附錄C)和2g石英砂(200目～400目),充分研磨至混合均勻，得到TSWV毒源汁液，置于冰盒上備用。4.4接種方法及病害觀察選取4.1中煙苗，在第2片～3片真葉上均勻噴灑石英砂，每片葉取4.3TSWV毒源汁液500μL,摩擦煙苗真葉。接種后用無菌水噴霧清洗葉片，暗培養(yǎng)出之后按4.2條件誘發(fā)病害。14d后，本氏煙表現(xiàn)出TSWV典型癥狀。5煙草材料抗病性鑒定5.1鑒定設計試驗設3次重復，隨機排列，每個重復不少于15株。以野生煙“花煙草(Nicotianaalata)”或栽培煙Polata為高抗對照，主栽品種“云煙87”或“K326”為感病對照。5.2接種與誘發(fā)病害按照4.1的方法對待鑒定材料和抗感對照進行育苗，取4.4表現(xiàn)TSYV典型癥狀的本氏煙，按照4.3的方法準備毒源，按照4.4的方法進行接種，并按照4.2的條件誘發(fā)病害。接種后定期(每5d～7d調查一次)開展病情調查，以株為單位調查全部煙株。病害嚴重度分級見附錄D。5.4抗性評價各次調查數(shù)據(jù)中，以感病對照最早達到感病狀態(tài)時的調查數(shù)據(jù)為依據(jù)，進行抗性評價。病情指數(shù)的計算方法參照GB/T23222-2008,品種抗性評價標準見附錄E。5.5有效性接種后至少有3次病害調查數(shù)據(jù)，同批次感病對照病情指數(shù)大于75,且抗病對照的病情指數(shù)低于25時，抗性評價結果有效。3(資料性)4(資料性)B.2病毒純度高6(規(guī)范性)——0級：全株無病，或僅接種部位出現(xiàn)黃色環(huán)紋或褪綠斑點?！?級：接種葉片接種部位外出現(xiàn)黃色環(huán)紋或褪綠斑點，非接種葉片正常，或植株無明顯矮化?！?級：接種葉以上低于三分之一的葉片或莖稈表現(xiàn)癥狀，或植株矮化到正常株高的三分之二以——5級：接種葉以上三分之一至二分十的葉片或莖稈表現(xiàn)癥狀，或植株矮化到——7級：接種葉以上高于二分之一的葉片或莖稈表現(xiàn)癥狀，或植株矮化到正常株高的二分之一至——9級：全株葉片和莖稈表現(xiàn)癥狀，或病株矮化到正常株高的三分之一以下。7(資料性)品種抗性評價標準劃分品種抗病性評價標準劃分為：——高抗(HR):病情指