ICS65.080CCSB104113IDB4113/T096—2024前言 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 14試劑和材料 25儀器和設(shè)備 26工藝流程與工藝要點(diǎn) 37質(zhì)量要求 58產(chǎn)品包裝、 9車間及設(shè)備消毒滅菌 5附錄A （資料性）秸稈常溫好氧發(fā)酵生產(chǎn)有機(jī)肥的工藝流程7附錄B（資料性）工藝中的一些判定 8DB4113/T096—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由南陽市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出并歸口。本文件起草單位：淅川縣物華生物科技有限公司、淅川縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心、淅川縣農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法大隊(duì)、淅川縣農(nóng)業(yè)生態(tài)與資源保護(hù)站、南陽市農(nóng)業(yè)生態(tài)與資源保護(hù)中心、桐柏縣農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法大隊(duì)。本文件主要起草人：張光正、張自群、孫惠東、魏毅、祝新杰、姬松山、常曉建、張永紅、張少杰、張梓豪、付瀟、張道陽、馬曉輝、周小珂、李建改、梁波、李志豹、張俊、王文飛、張慶力、岳盈盈、黃琛、張昭東、翁黎金。DB4113/T096—20241秸稈常溫好氧發(fā)酵生產(chǎn)有機(jī)肥工藝規(guī)程本文件規(guī)定了秸稈常溫好氧發(fā)酵生產(chǎn)有機(jī)肥工藝規(guī)程中的術(shù)語和定義、試劑和材料、儀器和設(shè)備、工藝流程和工藝要點(diǎn)、車間及設(shè)備消毒滅菌的要求。本文件適用于以秸稈為原料，經(jīng)白腐菌發(fā)酵降解，進(jìn)一步固液分離，獲得液體菌肥和固體有機(jī)肥的工藝流程。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T525-2021有機(jī)肥料NY/T798復(fù)合微生物肥料NY884-2012生物有機(jī)肥NY/T1109微生物肥料生物安全通用技術(shù)準(zhǔn)則3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1秸稈玉米、小麥及其它農(nóng)作物在收獲籽實(shí)后的剩余部分。3.2秸稈有機(jī)肥以農(nóng)作物秸稈等為主要原料，使用特定功能微生物將有機(jī)物料進(jìn)行特定發(fā)酵工藝處理而成的肥料。3.3一類能分解木質(zhì)纖維素、半纖維素和木質(zhì)素的擔(dān)子菌綱真菌。3.4固體菌種制備以秸稈固體培養(yǎng)基為載體，將菌種擴(kuò)大培養(yǎng)，獲得足夠數(shù)量和優(yōu)質(zhì)質(zhì)量菌種的過程。3.5液體菌種制備以液體培養(yǎng)基為載體，將菌種擴(kuò)大培養(yǎng)，獲得足夠數(shù)量和優(yōu)質(zhì)質(zhì)量菌種的過程。3.6開放式固體（常溫好氧）發(fā)酵在開放、半開放環(huán)境下，無需嚴(yán)格控制無菌條件，對(duì)秸稈進(jìn)行（常溫好氧）發(fā)酵的過程。DB4113/T096—202424試劑和材料4,1白腐菌菌種（PleurotusostreatusWH-1。菌種的安全性應(yīng)符合NY/T1109的規(guī)定。4.2秸稈：玉米、小麥等農(nóng)作物秸稈。4.3水：除非另有說明，在分析中僅使用確認(rèn)為一般的生活飲用水。4,4豆粕粉：工業(yè)級(jí)。4.5糖蜜：工業(yè)級(jí)。4.6磷酸二氫鉀：國(guó)產(chǎn)化學(xué)純。4.7無水硫酸鎂：國(guó)產(chǎn)化學(xué)純。4.8HCl溶液：1mol/L和10mol/L。4.9NaOH溶液：1mol/L和10mol/L。4.10漂白粉：30%～38%有效氯。5儀器和設(shè)備5.1水分檢測(cè)儀：分辨率0.01%。5.2旋風(fēng)除塵噴淋浸潤(rùn)粉碎機(jī)組：變頻滾齒桶喂料，多刀切割錘片式，粉碎秸稈長(zhǎng)度2cm～10cm，秸稈浸潤(rùn)濕度（含水量）55%～65%。5.3電子天平：感量0.001g和0.1g。5.4高壓滅菌鍋：容量≥50L，最高工作溫度≥135℃,設(shè)計(jì)壓力0.3Mpa，安全閥起跳壓力0.29Mpa。5.5磁力攪拌器：轉(zhuǎn)速范圍50rpm～1500rpm。5.6恒溫培養(yǎng)箱：溫度分辨率≥0.5℃,溫度波動(dòng)允許差±1℃。5.7恒溫振蕩器（搖床）：振CC幅25mm，轉(zhuǎn)速范圍：?jiǎn)?dòng)300r/min速度顯示。5.8顯微鏡：40倍光學(xué)顯微鏡。5.9pH計(jì)：測(cè)量范圍0.00～14.00。5.10超凈工作臺(tái)或潔凈室：潔凈室的等級(jí)為1000級(jí)～100級(jí)。5.11固體菌種發(fā)酵器皿：304不銹鋼材質(zhì)，容量500L或更大規(guī)格。含攪拌結(jié)構(gòu)，溫控夾層、通氣供氧結(jié)構(gòu)，裝液系數(shù)15%～30%，可蒸汽高溫滅菌，耐酸堿，工作壓力0.15MPa。5.12液體發(fā)酵罐：304不銹鋼材質(zhì)，容量5000L或更大規(guī)格。含攪拌結(jié)構(gòu)、溫控夾層、通氣供氧結(jié)構(gòu)，可蒸汽高溫滅菌，耐酸堿，工作壓力0.15MPa。5.13旋風(fēng)除塵與噴淋除塵相結(jié)合的粉碎噴淋浸潤(rùn)機(jī)組：粉碎細(xì)度2cm～10cm，浸潤(rùn)濕度50～60（含水量50%～60%）。5.14蒸汽高溫滅菌機(jī)：302不銹鋼材質(zhì)，容積≥2.5m3，最高工作溫度≥121℃,設(shè)計(jì)壓力0.2Mpa，安全閥起跳壓力0.19Mpa。5.15自動(dòng)稱重降溫配比接種一體機(jī)：不銹鋼體，容積≥2.5m3。5.16固體發(fā)酵箱：302不銹鋼箱體，容積2T～20T，用于常低成本、規(guī)?；臏睾醚醢l(fā)酵，發(fā)酵秸稈厚度40cm～120cm。5.17箱裝物料卸料平臺(tái)：液壓升降，配套打散及輸送設(shè)備。5.18固液分離機(jī)：固定轉(zhuǎn)速1460rpm。5.19粉末自動(dòng)稱重包裝機(jī)。5.20轉(zhuǎn)子：磁力攪拌器攪拌子。5.21臭氧機(jī)：160W。5.22酒精燈：火焰酒精燈。DB4113/T096—202435.23接種管：直徑1cm，長(zhǎng)度20cm。5.24錐形瓶：2L。5.25樣品管：100mL。5.26培養(yǎng)皿：60mm。6工藝流程與工藝要點(diǎn)秸稈常溫好氧發(fā)酵生產(chǎn)有機(jī)肥技術(shù)的工藝流程包括：菌種制作→秸稈噴淋粉碎與浸潤(rùn)→蒸汽高溫滅菌→自動(dòng)稱重配比接種→常溫好氧發(fā)酵→發(fā)酵好的秸稈卸料打散→固液分離→包裝等環(huán)節(jié)(見圖附錄圖A.1)。6.2工藝要點(diǎn)6.2.1一級(jí)菌種制備6.2.1.1秸稈固體培養(yǎng)基制備將秸稈粉碎到40目～60目，加水?dāng)嚢杈鶆颍蛊浜繛?2%～67%，裝入放有轉(zhuǎn)子的錐形瓶?jī)?nèi)后，在蒸汽滅菌爐內(nèi)進(jìn)行滅菌處理。壓力0.1Mpa，溫度121℃,滅菌90min。取出后，得到秸稈固體菌種培養(yǎng)基。6.2.1.2一級(jí)固體菌種制備將選育培養(yǎng)有白腐菌（糙皮側(cè)耳）的平板菌種，接入放有轉(zhuǎn)子的錐形瓶?jī)?nèi)的秸稈固體菌種培養(yǎng)基中，接種比例2%～10%，并于25℃~30℃的溫度下的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)5d～9d，得到一級(jí)固體菌種，在裝有培養(yǎng)好的一級(jí)菌種和轉(zhuǎn)子的錐形瓶?jī)?nèi)加入適量滅菌水稀釋，在振蕩器上震蕩攪拌20s～40s備用。6.2.1.3固體菌種檢測(cè)肉眼觀察，菌絲長(zhǎng)滿長(zhǎng)透秸稈固體培養(yǎng)基，色澤純白，無雜菌污染，表明合格，可用于后續(xù)的擴(kuò)大培養(yǎng)(詳見附圖B.1）。6.2.1.4固體菌種懸浮超凈工作臺(tái)內(nèi)中，向含有合格固體菌種的錐形瓶?jī)?nèi)加入1L滅菌蒸餾水，使用磁力攪拌器打散至形成均勻的懸濁液(詳見附圖B.2)。6.2.1.5液體菌種培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基原料準(zhǔn)備。固體原料及其和水的比例分別為：豆粕粉0.3%～0.5%，糖蜜3%～5%，磷酸二氫鉀0.05%～0.06%，硫酸鎂0.05%～0.06%。6.2.1.6一級(jí)液體菌種制備將所述培養(yǎng)有白腐菌（糙皮側(cè)耳）的平板菌種在超凈工作臺(tái)中接入錐型瓶?jī)?nèi)一級(jí)種液體培養(yǎng)基中，并于搖床內(nèi)在25℃~30℃的溫度下，轉(zhuǎn)速50rpm～250rpm振蕩培養(yǎng)5d～9d，得到一級(jí)液體菌種。6.2.2二級(jí)固體菌種制備DB4113/T096—202446.2.2.1將秸稈粉碎到40目～60目，裝入固體菌種發(fā)酵器皿，加水?dāng)嚢杈鶆?，使其含水量?0%~65%，進(jìn)行蒸汽高溫滅菌，溫度設(shè)定121℃~123℃,時(shí)間設(shè)定30min～50min，滅菌完成后降溫至25℃~28℃,作為固體菌種培養(yǎng)基備用。6.2.2.2使用火焰接種法，將所述一級(jí)固體菌種按照2%～10%的接種量或一級(jí)液體菌種按照2%～10%的接種量接種至固體菌種發(fā)酵器皿內(nèi)制備好的固體菌種培養(yǎng)基中，空氣壓力設(shè)定0.3Mpa～0.5Mpa，并于23℃~28℃的溫度下，培養(yǎng)3d～5d，得到二級(jí)固體菌種。6.2.3生產(chǎn)用液體菌種制備（三級(jí)菌種）6.2.3.1液體菌種培養(yǎng)基制備6.2.3.1.1根據(jù)培養(yǎng)基配方準(zhǔn)備液體菌種培養(yǎng)基。按照發(fā)酵罐80%容積的準(zhǔn)備液體菌種培養(yǎng)基，固體原料及其和水的比例為：豆粕粉0.3%～0.5%，糖蜜3%～5%，磷酸二氫鉀0.05%～0.06%，硫酸鎂0.05%~0.06%。6.2.3.1.2將配制好的培養(yǎng)基配放入制種車間大型發(fā)酵罐內(nèi)，按1:（28～35）的比例加水，加水后液體菌種培養(yǎng)基的體積為發(fā)酵罐總?cè)莘e的80%。6.2.3.1.3對(duì)液體菌種培養(yǎng)基進(jìn)行蒸汽高溫滅菌。溫度設(shè)定121℃~123℃,時(shí)間設(shè)定30min～50min，滅菌完成后降溫至25℃~28℃,得到生產(chǎn)用液體菌種培養(yǎng)基。6.2.3.2液體菌種接種培養(yǎng)6.2.3.2.1將連接固體菌種發(fā)酵器皿和大型液體菌種發(fā)酵罐的輸送管道滅菌后，把制備好的液體菌種培養(yǎng)基從大型發(fā)酵罐內(nèi)按固液比例1:（10～15）反向壓入固體菌種發(fā)酵器皿，對(duì)液體培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋，開機(jī)攪拌均勻后壓入大型發(fā)酵罐，與罐內(nèi)的液體菌種培養(yǎng)基混合接種，進(jìn)行液體菌種生產(chǎn)。6.2.3.2.2發(fā)酵罐溫度設(shè)定28℃,罐壓設(shè)定0.05Mpa。期間使用扇葉攪拌，轉(zhuǎn)速100rpm。打開空氣閥通氣，通氣量0.7m3/h，待43h～46h后溶氧量出現(xiàn)下降，調(diào)整通氣量至1m3/h～1.2m3/h。6.2.3.2.3持續(xù)培養(yǎng)24h。隨后，取樣管道和取樣口高溫蒸汽滅菌15min，打開開關(guān)，取250mL檢測(cè)。得到生產(chǎn)用液體白腐菌（糙皮側(cè)耳）菌種。6.2.4液體菌種檢測(cè)6.2.4.1pH測(cè)定取100mL液體菌種放入錐形瓶?jī)?nèi)，使用pH計(jì)測(cè)定其pH值。當(dāng)pH值5.0～7.0時(shí)，表明生長(zhǎng)狀態(tài)良好。6.2.4.2肉眼觀察將6.5.1錐形瓶?jī)?nèi)液體菌種靜置3h后觀察。若菌液澄清未見渾濁，菌球均勻生長(zhǎng)，占總體積的90%以上，表明符合要求（詳見附圖B.3）。6.2.4.3鏡檢用吸管吸取取檢菌液，滴一滴(含菌球)至載玻片，顯微鏡40倍物鏡下，仔細(xì)觀察其狀態(tài)。若隨機(jī)視野內(nèi)液體菌種生長(zhǎng)豐滿，無雜菌，表明培養(yǎng)過程良好（詳見附圖B.4）。6.2.5開放式固體發(fā)酵6.2.5.1秸稈粉碎浸潤(rùn)與滅菌6.2.5.1.1將秸稈送入粉碎噴淋浸潤(rùn)機(jī)組，粉碎至長(zhǎng)度為2cm～10cm，含水量50%～60%，浸潤(rùn)3h。DB4113/T096—202456.2.5.1.2將粉碎浸潤(rùn)后的秸稈送入蒸汽高溫滅菌機(jī)，進(jìn)行滅菌，溫度設(shè)定≥121℃,壓力設(shè)定2Kpa，時(shí)間設(shè)定15min～18min。6.2.5.1.3將滅菌后的秸稈送入自動(dòng)稱重配比接種機(jī)。傳送過程通過傳送帶上的風(fēng)機(jī)機(jī)組將溫度快速降溫至25℃~28℃。6.2.5.2接種與發(fā)酵6.2.5.2.1通過連接液體菌種發(fā)酵罐的不銹鋼管道將培養(yǎng)的合格液體菌種輸送至接種車間，并通過自動(dòng)稱重配比接種機(jī)進(jìn)行接種，接種量設(shè)定為15%～25%，攪拌時(shí)間設(shè)定為30s。6.2.5.2.2接種后的秸稈被自動(dòng)卸入固體發(fā)酵箱內(nèi)，在發(fā)酵車間內(nèi)車間內(nèi)進(jìn)行常溫好氧發(fā)酵。車間溫度設(shè)定18℃~30℃,濕度設(shè)定為65%～85%，發(fā)酵15d～18d。6.2.5.3發(fā)酵效果檢測(cè)肉眼觀察，白腐菌長(zhǎng)滿長(zhǎng)透發(fā)酵箱，菌絲色澤呈現(xiàn)白色，表明發(fā)酵效果良好（詳見附圖B.5）。6.2.6固液分離6.2.6.1發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵箱放置于箱裝物料卸料平臺(tái)，進(jìn)行卸料打散，并通過傳送設(shè)備送入固液分離機(jī)。通過固液分離機(jī)對(duì)發(fā)酵后的物料進(jìn)行固液分離，獲得固體和液體有機(jī)肥。6.2.6.2將獲得液體直接過濾收集，作為液體菌肥。將獲得的固體在輸送至包裝機(jī)的過程中通過輸送設(shè)備上的吹風(fēng)機(jī)組進(jìn)一步吹干，至水分含量≤30%，作為生物有機(jī)肥。7質(zhì)量要求成品應(yīng)超過NY/T525-2021和NY884-2012的相關(guān)規(guī)定。技術(shù)指標(biāo)見表1。表1秸稈常溫好氧發(fā)酵生產(chǎn)有機(jī)肥的技術(shù)指標(biāo)），），），有效活菌數(shù)，cfu/g億8產(chǎn)品包裝、運(yùn)輸和儲(chǔ)存在自動(dòng)灌裝機(jī)上設(shè)定流量或袋裝粉末稱重縫口包裝機(jī)上設(shè)定重量分別對(duì)液體和固體有機(jī)肥進(jìn)行包裝。有機(jī)肥的包裝、運(yùn)輸和儲(chǔ)存應(yīng)符合NY/T798中的要求。9車間及設(shè)備消毒滅菌DB4113/T096—20246每天生產(chǎn)結(jié)束后，對(duì)整個(gè)發(fā)酵、接種