生物醫(yī)藥蛋白純化工程師崗位考試試卷及答案一、單項選擇題（每題2分，共20分）1.常用的蛋白純化方法中，利用分子大小差異分離的是（）A.離子交換色譜B.凝膠過濾色譜C.親和色譜D.疏水色譜2.蛋白在等電點時，其（）A.溶解度最大B.溶解度最小C.穩(wěn)定性最好D.電荷最多3.以下哪種緩沖液常用于蛋白純化（）A.磷酸緩沖液B.鹽酸緩沖液C.硫酸緩沖液D.碳酸緩沖液4.親和色譜中，固定相是（）A.目標(biāo)蛋白B.配體C.緩沖液D.洗脫劑5.超濾主要用于（）A.去除小分子雜質(zhì)B.濃縮蛋白溶液C.分離不同電荷蛋白D.去除色素6.蛋白純化過程中，檢測蛋白濃度常用的方法是（）A.紫外分光光度法B.重量法C.滴定法D.比濁法7.離子交換色譜的分離原理基于蛋白的（）A.大小差異B.電荷差異C.疏水性差異D.親和力差異8.疏水色譜的洗脫順序是（）A.疏水性強的先洗脫B.疏水性弱的先洗脫C.分子量大的先洗脫D.分子量小的先洗脫9.以下哪種填料常用于離子交換色譜（）A.葡聚糖凝膠B.瓊脂糖凝膠C.DEAE-纖維素D.硅膠10.蛋白純化時，選擇合適的緩沖液pH主要依據(jù)是（）A.目標(biāo)蛋白的等電點B.緩沖液的成本C.實驗溫度D.儀器要求二、多項選擇題（每題2分，共20分）1.蛋白純化常用的色譜方法有（）A.離子交換色譜B.凝膠過濾色譜C.親和色譜D.反相色譜2.影響蛋白在離子交換色譜中保留行為的因素有（）A.蛋白的電荷數(shù)B.緩沖液的pHC.緩沖液的離子強度D.填料的粒徑3.以下屬于蛋白純化過程中可能用到的設(shè)備有（）A.層析柱B.離心機C.超濾設(shè)備D.紫外可見分光光度計4.親和色譜中，常見的配體有（）A.抗體B.酶底物C.金屬離子D.糖類5.蛋白純化過程中，去除雜質(zhì)的方法有（）A.離心B.過濾C.色譜分離D.透析6.凝膠過濾色譜可用于（）A.分離不同大小的蛋白B.測定蛋白分子量C.脫鹽D.去除熱原7.選擇蛋白純化方法時需要考慮的因素有（）A.目標(biāo)蛋白的性質(zhì)B.起始樣品的純度C.實驗成本D.所需蛋白的量8.蛋白在溶液中的穩(wěn)定性受哪些因素影響（）A.pH值B.溫度C.離子強度D.氧化還原環(huán)境9.以下關(guān)于疏水色譜的說法正確的是（）A.適用于分離疏水性不同的蛋白B.通常在高鹽濃度下上樣C.洗脫時鹽濃度逐漸降低D.填料具有疏水基團10.離子交換色譜的類型有（）A.陽離子交換色譜B.陰離子交換色譜C.強離子交換色譜D.弱離子交換色譜三、判斷題（每題2分，共20分）1.所有蛋白在等電點時都完全不溶解。（）2.親和色譜對目標(biāo)蛋白具有高度選擇性。（）3.凝膠過濾色譜中，小分子蛋白先流出。（）4.離子交換色譜中，緩沖液離子強度增加，蛋白洗脫加快。（）5.超濾可以分離不同分子量的蛋白。（）6.蛋白純化過程中，緩沖液的選擇只需要考慮其pH值。（）7.反相色譜常用于蛋白的分離純化。（）8.疏水色譜中，蛋白的疏水性越強，在固定相上的保留時間越長。（）9.檢測蛋白濃度時，紫外分光光度法只能檢測含有酪氨酸和色氨酸的蛋白。（）10.離子交換色譜的填料只能是有機聚合物。（）四、簡答題（每題5分，共20分）1.簡述離子交換色譜的基本原理。答案：基于蛋白表面電荷與固定相（離子交換劑）上相反電荷基團的靜電相互作用。當(dāng)?shù)鞍姿幁h(huán)境pH使蛋白帶電荷時，可與固定相上電荷基團結(jié)合，不同蛋白因電荷數(shù)量和性質(zhì)差異，結(jié)合力不同，通過改變緩沖液離子強度或pH進(jìn)行洗脫分離。2.親和色譜的優(yōu)點有哪些？答案：具有高度特異性，能從復(fù)雜混合物中快速、高效分離出目標(biāo)蛋白，純度高。對目標(biāo)蛋白損傷小，條件溫和，且分離過程簡單、快速，可節(jié)省時間和成本，能有效去除雜質(zhì)，提高蛋白質(zhì)量。3.簡述凝膠過濾色譜分離蛋白的依據(jù)。答案：依據(jù)蛋白分子大小不同進(jìn)行分離。凝膠過濾色譜的填料有大小不一的孔隙，大分子蛋白不能進(jìn)入孔隙，直接從顆粒間隙流出，先被洗脫；小分子蛋白進(jìn)入孔隙，在柱內(nèi)停留時間長，后被洗脫，從而實現(xiàn)分離。4.蛋白純化過程中，為什么要進(jìn)行緩沖液的選擇和優(yōu)化？答案：緩沖液可維持蛋白所處環(huán)境的pH穩(wěn)定，防止蛋白因pH變化變性。合適的緩沖液離子強度能調(diào)節(jié)蛋白與固定相的相互作用，利于分離。優(yōu)化緩沖液還能提高蛋白穩(wěn)定性，減少雜質(zhì)干擾，提升純化效果和蛋白質(zhì)量。五、討論題（每題5分，共20分）1.在蛋白純化過程中，如何根據(jù)目標(biāo)蛋白的性質(zhì)選擇合適的純化方法？答案：若目標(biāo)蛋白有特異性結(jié)合配體，選親和色譜；根據(jù)等電點，利用離子交換色譜按電荷分離；依分子量大小，用凝膠過濾色譜；疏水性不同則考慮疏水色譜。還需結(jié)合起始樣品純度和所需蛋白量等，復(fù)雜樣品可能需多種方法聯(lián)用。2.請討論蛋白純化過程中可能遇到的問題及解決方法。答案：常見問題有蛋白回收率低，可能是吸附損失，可優(yōu)化緩沖液減少吸附；純度不高，可能雜質(zhì)與目標(biāo)蛋白性質(zhì)相近，需更換色譜方法或條件；蛋白變性，可能是溫度、pH等不適，要控制好實驗條件，優(yōu)化緩沖體系保證蛋白穩(wěn)定。3.闡述超濾在蛋白純化中的作用及注意事項。答案：超濾可濃縮蛋白溶液，去除小分子雜質(zhì)和鹽類。注意選擇合適截留分子量的超濾膜，防止目標(biāo)蛋白透過。操作中控制壓力和流速，避免膜污染和蛋白變性。定期清洗超濾膜，保證分離效果和使用壽命。4.討論如何提高蛋白純化的效率和質(zhì)量。答案：首先要準(zhǔn)確了解目標(biāo)蛋白性質(zhì)，選擇最佳純化方法和條件。優(yōu)化實驗參數(shù)，如緩沖液組成、pH、離子強度等。使用高質(zhì)量的填料和設(shè)備，減少雜質(zhì)引入。多次純化步驟合理組合，且做好過程監(jiān)控，及時調(diào)整，確保高效高質(zhì)量純化。答案一、單項選擇題1.B2.B3.A4.B