產(chǎn)品中文名稱：六項(xiàng)泌尿生殖系統(tǒng)感染病原體核酸檢測試劑盒（熒光PCR法）申請人名稱：上海捷諾生物科技股份有限公司 3 3 3 3 4 4 5 13 16一、申請人名稱上海捷諾生物科技股份有限公司二、申請人住所三、生產(chǎn)地址匯區(qū)龍吳路2715號1幢104、106、108室；上海市徐匯區(qū)一、產(chǎn)品概述（一）產(chǎn)品主要組成成分STD6反應(yīng)酶2注：不同批號試劑盒中各組分不能互換。（二）產(chǎn)品預(yù)期用途本產(chǎn)品用于體外定性檢測泌尿生殖道拭子樣本中的6種病生殖支原體、單純皰疹病毒Ⅱ型、陰道毛滴蟲。結(jié)合臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，本產(chǎn)品的檢測結(jié)果可用于泌尿生殖道相關(guān)病原體感染的輔助診斷。（三）產(chǎn)品包裝規(guī)格（四）產(chǎn)品檢驗(yàn)原理本試劑盒采用多重?zé)晒釶CR技術(shù)與熔解曲線分析相結(jié)合的方法，通過多條特異性引物對沙眼衣原體、淋病奈瑟菌、解脲支原體、生殖支原體、單純皰疹病毒Ⅱ型和陰道毛滴蟲的核酸序列中保守區(qū)域片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物與帶有特異性標(biāo)記的探針結(jié)合，不同病原體的產(chǎn)物所對應(yīng)探針的Tm值不同，通過熔解曲線分析可以鑒別出樣本中病原體的種類。本試劑盒包含內(nèi)部質(zhì)控（IC）和擴(kuò)增質(zhì)控（AC內(nèi)部質(zhì)控（IC）監(jiān)控核酸的提取以及整個(gè)反應(yīng)過程，擴(kuò)增質(zhì)控（AC）監(jiān)控第二步反應(yīng)過程。二、臨床前研究概述（一）主要原材料1.主要原材料的選擇M13噬菌體、擴(kuò)增質(zhì)控、陽性質(zhì)控。均通過外購的方式獲得。其中引物、探針、擴(kuò)增質(zhì)控和陽性質(zhì)控由申請人自行設(shè)計(jì)，由合成公司經(jīng)過合成和純化后獲得。申請人對主要原材料進(jìn)行了供應(yīng)商的選擇，通過功能性實(shí)驗(yàn)篩選出合格供應(yīng)商，制定了各主要原材料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并經(jīng)檢驗(yàn)2.企業(yè)參考品和質(zhì)控品的設(shè)置情況企業(yè)參考品包括陽性參考品、陰性參考品、最低檢出限參考品和重復(fù)性參考品。陽性參考品9份，由試劑盒檢測范圍內(nèi)的病原體培養(yǎng)物組成。陰性參考品9份，由試劑盒檢測范圍外不同的病原體培養(yǎng)物組成。重復(fù)性參考品4份，由試劑盒檢測范圍內(nèi)不同濃度水平的病原體培養(yǎng)物組成。最低檢出限參考品9份，由試劑盒檢測范圍內(nèi)的病原體培養(yǎng)物組成。申請人設(shè)置了陰性對照，為加入噬菌體的超純水，陽性對照為含有各靶標(biāo)病原體的目標(biāo)基因片段，用于檢測過程中試劑和儀器的質(zhì)量控制。（二）生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系研究申請人通過對試劑主要生產(chǎn)工藝的研究，確定了最佳生產(chǎn)申請人對樣本核酸提取試劑、取樣量、核酸樣本用量進(jìn)行行了優(yōu)化，并對反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化，包括退火溫度、退火時(shí)間、變性時(shí)間、循環(huán)數(shù)、熒光補(bǔ)償?shù)鹊难芯?，最終確定了最佳的反（三）分析性能評估分析性能評估內(nèi)容主要包括：準(zhǔn)確度、精密度、最低檢出限、分析特異性（交叉反應(yīng)、干擾物質(zhì)實(shí)驗(yàn)、競爭性干擾實(shí)驗(yàn)、微生物干擾實(shí)驗(yàn)及攜帶污染實(shí)驗(yàn)）、包容性等。申請人提交了有效運(yùn)行的質(zhì)量管理體系下生產(chǎn)的3批產(chǎn)品，在適用機(jī)型上進(jìn)行的分析性能評估資料。在準(zhǔn)確度研究中，申請人使用3批試劑檢測企業(yè)參考品，結(jié)果表明檢測陽性參考品P1～P9，檢測結(jié)果均為相應(yīng)病原體陽性，陽性符合率100%；檢測陰性參考品N1～N9，檢測結(jié)果均為陰性，陰性符合率100%。在精密度研究中，申請人使用3批試劑進(jìn)行了批內(nèi)/批間精密度研究，檢測中強(qiáng)陽性、弱陽性和陰性樣本，中強(qiáng)陽性、弱陽性樣本檢測結(jié)果均為陽性且批內(nèi)和批間Tm值的變異系數(shù)（CV，%）均≤2.0%，陰性樣本檢測結(jié)果均為陰性，符合要求。在中間精密度研究中，申請人使用3批試劑，分別對中強(qiáng)陽性、弱陽性和陰性樣本進(jìn)行20天的檢測，每批試劑檢測每個(gè)陽性樣本的80個(gè)檢測結(jié)果均為陽性且Tm值的變異系數(shù)（CV，%）均≤2.0%，陰性樣本檢測結(jié)果均為陰性，試劑盒的中間精密度符合要求。在再現(xiàn)性研究中，申請人使用3批試劑，在3個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)室的3臺儀器上，對中強(qiáng)陽性、弱陽性和陰性樣本進(jìn)行5天的檢測，每個(gè)陽性樣本的75個(gè)檢測結(jié)果均為陽性且Tm值的變異系數(shù)（CV，%）均≤2.0%，陰性樣本檢測結(jié)果均為陰性，試劑盒的再現(xiàn)性符合要求。在最低檢出限研究中，申請人使用3批試劑對試劑盒檢測范圍內(nèi)病原體樣本進(jìn)行最低檢出限研究，以陽性檢出率≥95%時(shí)所對應(yīng)的濃度作為試劑盒的最低檢出限，并進(jìn)行最低檢出限驗(yàn)證。經(jīng)最低檢出限研究，本試劑盒檢測6種病原體的最低檢出分析特異性包含交叉反應(yīng)研究、干擾物質(zhì)研究、競爭性干擾研究、微生物干擾及攜帶污染研究。在交叉反應(yīng)研究中，申請人使用3批試劑檢測43例交叉反應(yīng)宮頸拭子樣本和43例交叉反應(yīng)尿道拭子樣本，研究顯示不在試劑盒檢測范圍中的人乳頭瘤病毒16型、人乳頭瘤病毒18型、人乳頭瘤病毒52型、人類免疫缺陷病毒1型、單純皰疹病毒Ⅰ型、梅毒螺旋體、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、熱帶念珠菌、人球菌、杜克雷嗜血桿菌、厭氧肽鏈球菌、嗜酸乳桿菌、糞腸球菌、屎腸球菌、金黃色葡萄球菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、白色念珠菌、陰道阿托波菌、陰道加德納菌、人型支原體、細(xì)小脲原體、脆弱擬桿菌、惰性乳桿菌、詹氏乳桿菌、格氏乳桿菌、卷曲乳桿菌、羞怯動彎桿菌、克氏動彎桿菌、干酪乳桿菌、人基因組無交叉反應(yīng)。在干擾物質(zhì)研究中，申請人使用3批試劑，進(jìn)行了內(nèi)源/外源干擾物質(zhì)研究，對樣本中可能含有的干擾物質(zhì)分別進(jìn)行評價(jià)，研究顯示，宮頸拭子樣本含有以下干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果無影響：20μg/mL膽紅素、10mg/mL四環(huán)素、0.1mg/mL阿奇霉素、10μg/mL螺旋霉素、0.1mg/mL羅紅霉素、0.1mg/mL米諾環(huán)素、1mg/mL磺胺嘧啶、2mg/mL氫化可的松、0.3mg/mL地塞米松、環(huán)素、0.1mg/mL阿莫西林、20mg/mL甲硝唑片、5mg/mL重組干擾素α2b凝膠、0.15mg/mL左炔諾孕酮片、50mg/mL替硝唑陰道片、15%（v/v）復(fù)方黃松洗液、10mg/mL壬苯醇醚栓、174mg/mL保婦康栓、15%（v/v）人體潤滑液啫喱、15%（v/v）梵密靈鹽水清洗液、10mg/mL硝酸咪康唑乳膏；尿道拭子樣本含有以下干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果無影響：20μg/mL膽紅素、10mg/mL四環(huán)素、0.1mg/mL阿奇霉素、10μg/mL螺旋霉素、0.1mg/mL羅紅霉素、0.1mg/mL米諾環(huán)素、1mg/mL磺胺嘧啶、2mg/mL更昔洛韋、60μg/mL鹽酸多西環(huán)素、0.1mg/mL阿莫西林、20mg/mL甲硝唑片、5mg/mL重組干擾素α2b凝膠。在競爭性干擾研究中，申請人使用3批試劑，對臨床上常見檢測靶標(biāo)范圍內(nèi)病原體混合感染的情況，制備同一反應(yīng)體系內(nèi)高濃度與低濃度混合樣本，檢測結(jié)果表明高濃度分析物對低濃度分析物檢測無競爭性干擾影響。在微生物干擾研究中，申請人研究了15種高濃度水平檢測范圍外病原體對弱陽性檢測靶標(biāo)的影響，研究結(jié)果顯示，臨床上易合并感染微生物，在高濃度的情況下對試劑盒靶標(biāo)檢測無在攜帶污染研究中，申請人使用3批試劑，交叉檢測高濃度陽性樣本和陰性樣本，檢測結(jié)果表明高濃度陽性樣本可正常檢出，陰性樣本檢測結(jié)果均為陰性，不受攜帶污染的影響。在包容性研究中，申請人使用3批試劑，對不同來源和不同亞型/型別的62例病原體樣本進(jìn)行了包容性研究。結(jié)果表明試劑盒包容性滿足性能要求。（四）陽性判斷值研究采用846例已知病原體背景信息的臨床樣本進(jìn)行陽性判斷值研究，確定靈敏度和特異性最佳的Tm值范圍，得到本產(chǎn)品檢測的陽性判斷值范圍。并使用406例臨床樣本的檢測結(jié)果對陽性判斷值范圍進(jìn)行了驗(yàn)證。本產(chǎn)品的陽性判斷值如下表所示：Tm值范圍(℃)（五）穩(wěn)定性研究申請人對本產(chǎn)品進(jìn)行了穩(wěn)定性研究，包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、使用穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性等。研究結(jié)果表明：試劑盒在-15℃及以下可保存12個(gè)月。開瓶后反復(fù)凍融次數(shù)不應(yīng)超過5次。在樣本穩(wěn)定性研究中，申請人使用本產(chǎn)品分別對短期儲存、長期儲存的樣本進(jìn)行測試，研究結(jié)果支持說明書聲稱。三、臨床評價(jià)概述申請人在中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚病醫(yī)院、浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院、中國福利會國際和平婦幼保健院、廣東省人民醫(yī)院、南昌市生殖醫(yī)院、廣州市花都區(qū)人民醫(yī)院共6家臨床機(jī)構(gòu)完成了臨床試驗(yàn)，有效病例3511例，均為疑似泌尿生殖系統(tǒng)感染的人群，樣本類型為泌尿生殖道拭子。臨床試驗(yàn)采用試驗(yàn)體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品或?qū)嶒?yàn)室參考方法進(jìn)行比較研究，確認(rèn)產(chǎn)品的臨床性能。與已上市同類產(chǎn)品對比，試驗(yàn)結(jié)果顯示，陽性符合率100.00%(95%CI:98.52%,100.00%)，陰性符合率99.82%（95%CI:99.60%,99.92%與已上市同類產(chǎn)品對比，試驗(yàn)結(jié)果顯示，陽性符合率99.74%(95%CI:98.56%,99.95%)，陰性符合率99.81%（95%CI:99.58%,99.91%與已上市同類產(chǎn)品對比，試驗(yàn)結(jié)果顯示，陽性符合率99.56%(95%CI:98.42%,99.88%)，陰性符合率99.90%（95%CI:99.71%,99.97%針對單純皰疹病毒Ⅱ型，納入陽性病例199例，陰性病例3312例。與已上市同類產(chǎn)品對比，試驗(yàn)結(jié)果顯示，陽性符合率100.00%(95%CI:98.11%,100.00%)，陰性符合率99.97%（95%CI:99.83%,99.99%例。與已上市同類產(chǎn)品對比，試驗(yàn)結(jié)果顯示，陽性符合率（95%CI:99.55%，100.00%針對陰道毛滴蟲，臨床試驗(yàn)采用試驗(yàn)體外診斷試劑與一代測序進(jìn)行比較研究，納入陽性病例257例，陰性病例3254例。試驗(yàn)結(jié)果顯示，陽性符合率100.00%(95%CI:98.53%，100.00%)，了與已上市同類產(chǎn)品的比較，陽性符合率為100.00%（95%CI：95.63%，100.00%陰性符合率為100.00%（95%CI：98.17%，綜上所述，臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示本產(chǎn)品與對比方法的一致性較好，滿足技術(shù)審評要求。四、產(chǎn)品受益風(fēng)險(xiǎn)判定本產(chǎn)品根據(jù)《YY/T0316-2016醫(yī)療器械風(fēng)險(xiǎn)管理對醫(yī)療本產(chǎn)品用于體外定性檢測泌尿生殖道拭子樣本中的6種病生殖支原體、單純皰疹病毒Ⅱ型、陰道毛滴蟲。結(jié)合臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，本產(chǎn)品的檢測結(jié)果可用于泌尿生殖道相關(guān)病原體感染的輔助診斷。（二）風(fēng)險(xiǎn)評估申請人對已知危險(xiǎn)（源）進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)，按照風(fēng)險(xiǎn)可接受準(zhǔn)則判斷每個(gè)危險(xiǎn)（源）的風(fēng)險(xiǎn)是否達(dá)到可接受水平，對合理可行降低的風(fēng)險(xiǎn)、不經(jīng)過風(fēng)險(xiǎn)/收益分析既判定為不可接受的風(fēng)險(xiǎn)采取控制措施，并對具體措施進(jìn)行實(shí)施驗(yàn)證，同時(shí)重新對采取措施后的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行估計(jì)，確認(rèn)其風(fēng)險(xiǎn)水平是否可接受。但為保證用械安全，基于對主要剩余風(fēng)險(xiǎn)的規(guī)避，需要在說明書中1.本試劑盒檢測結(jié)果僅供臨床參考，不得作為臨床感染診2.當(dāng)檢測樣本被檢核酸濃度含量低于最低檢測限時(shí)可能會有假陰性結(jié)果，陰性結(jié)果僅能說明低于本試劑盒檢測限值，不能完全排除感染的可能，此時(shí)建議采用其他方法進(jìn)一步確認(rèn)。3.樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染、試劑污染、樣本交叉污染會導(dǎo)致假陽性；試劑運(yùn)輸或保存不當(dāng)造成的試劑檢測性能下降會導(dǎo)致假陰性結(jié)4.本試劑盒采用外源性內(nèi)部質(zhì)控，在提取之前加入，用于監(jiān)測樣本提取和PCR擴(kuò)增過程，不能監(jiān)測取樣過程。樣本采集不合理可能會導(dǎo)致假陰性結(jié)果。5.警示及注意事項(xiàng)：產(chǎn)品說明書中介紹了該產(chǎn)品檢驗(yàn)方法的局限性及使用中的注意事項(xiàng)。外診斷試劑注冊與備案管理辦法》（國家市場監(jiān)督管理總局令第48號）等相關(guān)醫(yī)療器械法規(guī)與配套規(guī)章，經(jīng)對申請人提交的注冊申報(bào)資料進(jìn)行系統(tǒng)評價(jià),申報(bào)產(chǎn)品符合安全性、有效性的要求，符合現(xiàn)有認(rèn)知水平，建議準(zhǔn)予注冊。附件：產(chǎn)品說明書擔(dān)，影響著全世界人民的健康和生活。淋病是我國性傳播疾病的主要病種之一，由淋病奈瑟菌（NeisseriaGonorrhoeae，NG）感染所致[1-2]。非淋菌性尿道炎是指由淋病奈瑟菌以外的其他病CT生殖支原體（MycoplasmaGenitalium，MG）等本試劑盒采用多重?zé)晒釶CR技術(shù)與熔解曲線分析相結(jié)中保守區(qū)域片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物與帶有特異性標(biāo)記的探針結(jié)合，對應(yīng)探針的Tm值不同，通過熔解曲線分析可以鑒別出樣STD6反應(yīng)酶2實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀LightCycler480（羅氏診斷公司，國械注進(jìn)2011.樣本類型：泌尿生殖道拭子樣本：男性為尿道拭子，女性為采集的標(biāo)本應(yīng)及時(shí)送檢：室溫（18~26℃)保存應(yīng)不超過48小時(shí)；2～8℃保存應(yīng)不超過7實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀首次使用本試劑盒進(jìn)行檢測前，需要進(jìn)表1.第一步反應(yīng)體系體積(μL/測試）1將處理后的待測樣本核酸、陰性對照核酸、STD6陽性質(zhì)控1和STD6陽性質(zhì)控2分別加1表2.第一步反應(yīng)程序參數(shù)11從試劑盒中取出STD6反應(yīng)酶2和STD6緩沖液，在室溫下融化并充分混勻表3.第二步反應(yīng)體系體積(μL/測試）1表4.PCR檢測通道設(shè)置表5.第二步反應(yīng)程序參數(shù)1///1/1/40～90℃11/4.1程序運(yùn)行結(jié)束后，軟件中點(diǎn)擊“Analysis”，選擇“Tmcalling”，點(diǎn)擊“√點(diǎn)擊“√”,顯示“ColorComp（On）”。2）擴(kuò)增質(zhì)控（AC用于監(jiān)控第二步反應(yīng)過程。表6.IC和AC的Tm值Tm范圍(℃)AC表明陽性對照成立；否則，陽性對照不成立，需重復(fù)實(shí)驗(yàn)。其判讀指標(biāo)如圖2-3和表7-8：表7.STD6陽性質(zhì)控1Tm值Tm值范圍(℃)表8.STD6陽性質(zhì)控2Tm值Tm值范圍(℃)項(xiàng)泌尿生殖系統(tǒng)感染病原體的Tm值范圍，本產(chǎn)品的表9.陽性判斷值Tm值范圍(℃)1.在陰性對照和陽性對照均正常的情況下，針對每個(gè)待檢樣本進(jìn)行陽性結(jié)果：檢測通道ROX和/或Cy5存在特異性峰，根據(jù)特異性峰的Tm值，參照表9判定其病原陰性結(jié)果：檢測通道ROX及Cy5無特異性峰，則參3.可能出現(xiàn)的各種實(shí)驗(yàn)結(jié)果及解釋見表10：表10.實(shí)驗(yàn)結(jié)果解釋+-//-+//++//--++-------+備注：+表示存在特異性峰，-表示不存在特異性峰，/表示當(dāng)其他條件滿足時(shí)，該熒光通道結(jié)果2.當(dāng)檢測樣本被檢核酸濃度含量低于最低檢測限時(shí)可能會有假陰性結(jié)果，陰性結(jié)果僅能說明低4.樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染、試劑污染、樣值的變異系數(shù)（CV，%）均≤2.0%；對企業(yè)重復(fù)性參考品進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果與已知的病原體種最低檢出限參考品（S1～S9）進(jìn)行檢測，檢測根據(jù)產(chǎn)品性能評估結(jié)果，確定本試劑盒的最低檢出限（LoD表11.各病原體最低檢出限60TCID50/mL試劑盒與人乳頭瘤病毒16型、人乳頭瘤病毒18型、人乳頭瘤病毒52型、人類免疫缺陷病菌、羞怯動彎桿菌、克氏動彎桿菌、干酪乳桿菌、人基因組無交叉反mg/mL阿奇霉素、10μg/mL螺旋霉素、0.鹽酸多西環(huán)素、0.1mg/mL阿莫西林、20mg/mL甲硝唑片、5mg/mL重組干擾素α2b凝膠、0.15mg/mL左炔諾孕酮片、50mg/mL替硝唑陰道片、15%（v/v）復(fù)方黃松