CCSX10T/CIQA111–2025特殊醫(yī)學用途配方食品中低聚半乳糖的測DeterminationofGalactooligosaccharideinfoodsforspecialmedicalpurpose—Ionchromatographymeth前言 1 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 1 15試劑和材料 15.1試劑 15.2對照品溶液配制 15.3試劑配制 26儀器設(shè)備及耗材 27分析步驟 27.1試樣處理 27.2色譜參考條件 37.3標準曲線制作 38加過計算與表述 39精密度 410檢出限、定量限 4附錄A（資料性） 5IT/CIQA111-2025本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由中國出入境檢驗檢疫協(xié)會進出口食品標準化技術(shù)委員會（CIQA/TC10）提出并歸口。本文件起草單位：南京海關(guān)動植物與食品檢測中心、上海安譜實驗科技股份有限公司、江蘇省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗研究院、南京師范大學、海南天壯營養(yǎng)工程有限公司。本文件主要起草人：范春婷、朱靜怡、張炯愷、陸慧媛、林慧、張幸、李紅艷、沈偉健、馬海建、張馳中、藍建芳。本文件知識產(chǎn)權(quán)歸中國出入境檢驗檢疫協(xié)會所有。任何單位或個人未經(jīng)許可，不得以營利為目的，印制、出版、翻譯、轉(zhuǎn)發(fā)或復制全文或部分文字。T/CIQA111-20251特殊醫(yī)學用途配方食品中低聚半乳糖的測定離子色譜法本文件描述了特殊醫(yī)學用途配方食品中低聚半乳糖的離子色譜測定法。本文件適用于特殊醫(yī)學用途配方食品中低聚半乳糖的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB5009.88—2023食品安全國家標準食品中膳食纖維的測定3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理用水溶解樣品中的低聚半乳糖，經(jīng)蛋白沉淀和凈化后，由離子色譜儀分析，以低聚半乳糖對照品中的特征峰作為定性和定量依據(jù)，外標法定量。5試劑和材料5.1試劑5.1.1乙腈（CH3CN）：色譜純。5.1.2甲醇（CH3OH）：色譜純。5.1.350%氫氧化鈉溶液（NaOH）：色譜純。5.1.4無水乙酸鈉(CH3COONa)：優(yōu)級純及以上。5.1.5冰乙酸（CH3COOH）。5.1.6三水合乙酸鈉（CH3COONa?3H2O）。5.1.7熱穩(wěn)定α-淀粉酶：CAS號9000-85-5，酶活力≥250U/mg。5.1.8淀粉葡萄糖苷酶：CAS號9032-08-0，酶活力≥60U/mg。5.1.9低聚半乳糖對照品：與檢測樣品同一批次，有明確純度標示。5.2對照品溶液配制25.2.1低聚半乳糖對照品儲備液(1000μg/mL)：準確稱取低聚半乳糖對照品（5.1.9）1g（精確至1.0mg加4mL水溶解，混勻，轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，用乙腈（5.1.1）定容后混勻，靜置10min。取1mL轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用水定容后混勻，取5mL用C18固相萃取小柱過濾凈化后作為儲備液。臨用現(xiàn)配。5.2.2低聚半乳糖對照品系列工作液：精確量取儲備液（5.2.1）適量，加水稀釋成10μg/mL、20μ5.3試劑配制5.3.1乙酸溶液(0.2mol/L)：準確吸取1.2mL冰乙酸（5.1.5）,用水稀釋至100mL。5.3.2乙酸鈉溶液(0.2mol/L)：準確稱取2.72g三水合乙酸鈉（5.1.6）,用水溶解并稀釋至100mL。5.3.3乙酸鹽緩沖液(pH為4.5)：將28mL乙酸溶液(5.3.1)與22mL乙酸鈉溶液(5.3.2)混合，用水稀釋至100mL，用乙酸將pH調(diào)節(jié)為4.5±0.2。5.3.4熱穩(wěn)定α-淀粉酶溶液（約1000U/mL稱取相當于活力約5000U熱穩(wěn)定α-淀粉酶（5.1.7）溶于5mL乙酸鹽緩沖液（5.3.3）中，混勻至完全溶解。臨用現(xiàn)配。5.3.5淀粉葡萄糖苷酶溶液（約500U/mL）：稱取相當于活力約2500U淀粉葡萄糖苷酶（5.1.8）溶于5mL乙酸鹽緩沖液（5.3.3）中，混勻至完全溶解。臨用現(xiàn)配。5.3.6淋洗液A（水）：量取2L一級水，避免振搖，使用前脫氣30min，充氮氣可保存一周。5.3.7淋洗液B（250mmol/L氫氧化鈉溶液）：量取50%氫氧化鈉溶液（5.1.3）13.9mL，用水定容至1L，使用前脫氣30min，充氮氣可保存一周。5.3.8淋洗液C（100mmol/L氫氧化鈉溶液，含1.0mol/L乙酸鈉稱取82.0g無水乙酸鈉（5.1.4用0.8L水溶解后加入50%氫氧化鈉溶液（5.1.3）5.6mL，用水定容至1L，使用前脫氣30min，充氮氣可保存一周。5.3.9淋洗液D（100mmol/L乙酸鈉溶液稱取8.2g無水乙酸鈉（5.1.4用水溶解并定容至1L，使用前脫氣30min，充氮氣可保存一周。6儀器和設(shè)備6.1離子色譜分析儀：配備脈沖安培檢測器、金工作電極、Ag/AgCl參比電極、糖四電位波形。6.2天平：感量為0.001g。6.3超聲波清洗器。6.4渦旋振蕩器。6.5高速離心機，不低于8000r/min。6.6恒溫水浴搖床：控溫范圍在室溫5℃~100℃,溫度波動±1℃。6.7固相萃取裝置。6.8C18固相萃取小柱：500mg，3mL或效果相當者。6.9濾膜：0.22μm有機膜。7分析步驟7.1試樣處理7.1.1提取3T/CIQA111-2025準確稱取1g~2g提前混合均勻的液態(tài)或固態(tài)試樣至15mL離心管中（精確至1mg加水至5mL，渦旋混勻，60℃水浴25min。放至室溫后，轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中用乙腈（5.1.1）定容，混勻。靜置10min（必要時延長沉降時間，或轉(zhuǎn)移至離心管中8000r/min離心3min），取1mL上清液用水稀釋至10mL，混勻后待凈化。注：若有低聚麥芽糖等其他低聚糖的干擾，可在轉(zhuǎn)移至10mL容7.1.2凈化將C18固相萃取小柱（6.8）依次用3mL甲醇（5.1.2）和3mL水活化，保持小柱濕潤。取5mL待凈化液（7.1.1）轉(zhuǎn)移至已活化的C18固相萃取小柱中，棄去前2mL，收集后3mL濾液，過0.22μm有機相濾膜（6.9）待測。7.2色譜參考條件a)色譜柱：陰離子交換色譜柱PA-20，150mm（長度）×3mm（內(nèi)徑）×3.5μm（粒徑）或等效色譜柱。b)保護柱：PA-20，長度30mm（長度）×3mm（內(nèi)徑）×3.5μm（粒徑）或等效保護柱。c)淋洗液及洗脫程序：詳見表1；f)檢測器：脈沖安培檢測器、金工作電極、Ag/AgCl參比電極、糖四電位波形。表1梯度洗脫程序%%%%0020200000000000002027.3標準曲線的制作將對照品工作溶液在7.2的條件下分別進樣，綜合考慮試樣基質(zhì)本底的干擾、色譜峰的響應(yīng)以及加標回收情況選擇不受試樣本底干擾的色譜峰作為特征峰，以對照品工作溶液的濃度為橫坐標，特征峰峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。標準溶液色譜圖參見附錄A。8結(jié)果計算與表述4試樣中低聚半乳糖的含量按公式（1）計算：X——試樣中低聚半乳糖的含量，單位為克每百克（g/100g）；c——根據(jù)標準曲線計算得到的試樣中低聚半乳糖的濃度，單位為微克每毫升(μg/mL）；V——定容體積，單位為毫升（mL）；f——稀釋倍數(shù)；m——試樣的稱樣量，單位為克（gP——低聚半乳糖對照品的純度；100——單位換算系數(shù)；106——單位換算系數(shù)。計算結(jié)果保留至小數(shù)點后兩位。9精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。10檢出限、定量限當液態(tài)試樣取樣量為1g時，檢出限為0.01g/100g，定量限為0.02