揚州市人民醫(yī)院電鏡標本制備考核一、單選題（每題2分，共20題）說明：本部分考察電鏡標本制備的基本原理、操作規(guī)范及常見問題。1.電鏡觀察細胞超微結(jié)構(gòu)時，樣品必須經(jīng)過固定、脫水、包埋等步驟，其核心目的是什么？A.保持細胞形態(tài)完整B.增強樣品導電性C.使樣品電子透明D.提高樣品分辨率2.下列哪種固定劑最適合用于植物細胞電鏡樣品制備？A.戊二醛+多聚甲醛B.成二醛+甲醛C.甲醇+丙酮D.乙醇+乙醚3.電鏡樣品脫水的目的是什么？A.去除水分，防止腐敗B.使樣品電子透明，減少電子散射C.提高樣品導電性D.增強樣品熒光信號4.脫水過程中，乙醇濃度通常按什么順序遞增？A.30%→50%→70%→90%→100%B.100%→90%→70%→50%→30%C.50%→70%→90%→100%→乙醇乙醚混合液D.30%→70%→90%→100%→乙醇乙醚混合液5.脫水后，樣品必須進行滲透，其主要目的是什么？A.去除殘留水分B.使樣品與包埋劑充分混合C.增強樣品硬度D.提高樣品導電性6.下列哪種包埋劑最適合用于硬組織樣品？A.環(huán)氧樹脂Epon812B.腈基丙烯酸酯C.低熔點樹脂D.聚合物樹脂7.聚合過程中，樣品需要加熱，其主要目的是什么？A.使包埋劑凝固B.引入交聯(lián)劑C.去除包埋劑中的溶劑D.提高樣品導電性8.切割電鏡樣品時，超薄切片厚度通常為多少？A.50μmB.1μmC.100nmD.500nm9.超薄切片染色常用的電子染色劑是什么？A.蘇木精-伊紅（H&E）B.鋨酸C.甲基綠-派洛寧D.諾丹明10.電鏡觀察中，電子束與樣品相互作用會產(chǎn)生哪些信號？A.二次電子和背散射電子B.熒光和吸收光C.磁共振和核磁共振D.X射線和超聲波二、多選題（每題3分，共10題）說明：本部分考察電鏡標本制備的細節(jié)操作及綜合應(yīng)用能力。1.電鏡樣品固定的基本原則包括哪些？A.快速固定B.緩沖液pH值適宜C.固定劑濃度適宜D.避免樣品自溶2.電鏡樣品脫水的常用方法有哪些？A.逐級置換法B.自動脫水機法C.臨界點干燥法D.冷凍干燥法3.超薄切片的制備過程包括哪些步驟？A.樣品包埋B.聚合C.超薄切片D.染色4.電鏡樣品包埋劑的選擇需考慮哪些因素？A.樣品性質(zhì)B.電鏡類型C.聚合溫度D.染色效果5.電鏡樣品染色常用的重金屬鹽有哪些？A.鐵染色劑B.鋨酸C.鈾酸D.鉬酸6.電鏡樣品制備中，常見的問題有哪些？A.樣品收縮B.樣品變形C.染色不均D.包埋劑聚合不完全7.電鏡樣品制備的注意事項包括哪些？A.避免樣品污染B.控制溫度和濕度C.操作快速細致D.使用無菌工具8.電鏡樣品制備的流程通常包括哪些階段？A.樣品制備B.固定C.脫水D.包埋E.切片F(xiàn).染色G.觀察9.電鏡樣品制備中，不同組織的處理方法有何差異？A.植物組織需去除細胞壁B.動物組織需快速冷凍C.硬組織需預(yù)處理D.細胞培養(yǎng)物需固定后直接包埋10.電鏡樣品制備的優(yōu)化措施包括哪些？A.調(diào)整固定劑濃度B.改進脫水方法C.優(yōu)化染色時間D.使用高分辨率電鏡三、判斷題（每題1分，共10題）說明：本部分考察電鏡標本制備的基本概念和操作規(guī)范性。1.電鏡樣品固定后，必須立即進行脫水，否則樣品會腐敗。（√）2.電鏡樣品包埋劑聚合后，可直接進行超薄切片。（×）3.電鏡樣品染色時，鈾酸和鋨酸常聯(lián)合使用。（√）4.電鏡樣品制備過程中，樣品溫度需控制在0℃以下。（×）5.超薄切片的厚度對電鏡觀察沒有影響。（×）6.電鏡樣品制備中，樣品干燥過程需避免溫度過高，否則會導致樣品收縮。（√）7.電鏡樣品包埋劑聚合后，需進行真空處理，去除溶劑。（√）8.電鏡樣品染色時，染色時間越長，圖像對比度越好。（×）9.電鏡樣品制備過程中，樣品固定劑濃度越高越好。（×）10.電鏡樣品制備的目的是為了觀察樣品的宏觀形態(tài)。（×）四、簡答題（每題5分，共6題）說明：本部分考察電鏡標本制備的原理、操作及常見問題分析。1.簡述電鏡樣品固定的目的和原理。2.簡述電鏡樣品脫水的常用方法和注意事項。3.簡述超薄切片的制備過程及其關(guān)鍵步驟。4.簡述電鏡樣品包埋劑的選擇依據(jù)。5.簡述電鏡樣品染色的原理和常用染色劑。6.簡述電鏡樣品制備中常見的問題及解決方法。五、論述題（每題10分，共2題）說明：本部分考察電鏡標本制備的綜合應(yīng)用能力及問題解決能力。1.論述電鏡樣品制備過程中，不同組織（如植物、動物、細胞培養(yǎng)物）的處理方法有何差異，并說明原因。2.論述電鏡樣品制備的優(yōu)化措施及其對觀察結(jié)果的影響。答案及解析一、單選題答案及解析1.C解析：電鏡樣品制備的核心目的是使樣品電子透明，減少電子散射，從而提高圖像質(zhì)量。固定、脫水、包埋等步驟都是為了達到這一目的。2.A解析：植物細胞含有大量細胞壁，戊二醛+多聚甲醛固定劑能有效固定細胞結(jié)構(gòu)和組織成分，適合植物樣品制備。3.B解析：脫水是為了去除樣品中的水分，使其電子透明，減少電子散射，從而提高圖像分辨率。4.A解析：脫水通常按30%→50%→70%→90%→100%的順序遞增，逐步去除水分，防止樣品收縮或變形。5.B解析：滲透是為了使樣品與包埋劑充分混合，確保樣品在包埋劑中均勻分布，為后續(xù)切片和染色做準備。6.A解析：環(huán)氧樹脂Epon812硬度高，適合用于硬組織（如骨骼、軟骨）的包埋。7.C解析：聚合是為了去除包埋劑中的溶劑，使其硬化，便于后續(xù)切片和染色。8.C解析：超薄切片厚度通常為100nm，適合電鏡觀察，過厚會導致電子散射，圖像模糊。9.B解析：鋨酸是常用的電子染色劑，能染細胞器（如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)）和細胞核，提高圖像對比度。10.A解析：電鏡觀察中，電子束與樣品相互作用會產(chǎn)生二次電子（顯示樣品表面形貌）和背散射電子（顯示樣品成分差異）。二、多選題答案及解析1.A,B,C,D解析：電鏡樣品固定需快速、pH適宜、濃度適宜，并避免自溶，以保持樣品形態(tài)和成分完整性。2.A,B,C,D解析：逐級置換法、自動脫水機法、臨界點干燥法、冷凍干燥法都是常用的脫水方法。3.A,B,C,D解析：超薄切片制備包括包埋、聚合、切片、染色等步驟。4.A,B,C,D解析：包埋劑選擇需考慮樣品性質(zhì)、電鏡類型、聚合溫度和染色效果。5.B,C,D解析：鋨酸、鈾酸、鉬酸是常用的重金屬鹽染色劑，能提高圖像對比度。6.A,B,C,D解析：樣品制備中常見問題包括收縮、變形、染色不均、包埋劑聚合不完全等。7.A,B,C,D解析：樣品制備需避免污染、控制溫濕度、操作快速細致，并使用無菌工具。8.A,B,C,D,E,F,G解析：電鏡樣品制備流程包括樣品制備、固定、脫水、包埋、切片、染色、觀察等階段。9.A,B,C,D解析：植物組織需去除細胞壁，動物組織需快速冷凍，硬組織需預(yù)處理，細胞培養(yǎng)物需固定后直接包埋。10.A,B,C,D解析：優(yōu)化措施包括調(diào)整固定劑濃度、改進脫水方法、優(yōu)化染色時間、使用高分辨率電鏡等。三、判斷題答案及解析1.√解析：固定能抑制酶活性，防止樣品腐敗。2.×解析：包埋劑聚合后需進行聚合處理（如真空干燥），才能進行切片。3.√解析：鈾酸染細胞核和酸性成分，鋨酸染細胞器和脂質(zhì)成分，聯(lián)合使用可提高圖像對比度。4.×解析：樣品干燥溫度需控制在室溫或40℃以下，過高會導致收縮或變形。5.×解析：超薄切片厚度對電鏡觀察有重要影響，過厚會導致圖像模糊。6.√解析：高溫干燥會導致樣品收縮和變形，影響圖像質(zhì)量。7.√解析：真空處理能去除包埋劑中的溶劑，使其硬化。8.×解析：染色時間過長會導致樣品過度染色，圖像失真。9.×解析：固定劑濃度需根據(jù)樣品性質(zhì)調(diào)整，過高會導致過度固定，影響樣品形態(tài)。10.×解析：電鏡觀察的是細胞超微結(jié)構(gòu)，而非宏觀形態(tài)。四、簡答題答案及解析1.電鏡樣品固定的目的和原理解析：固定是為了用化學物質(zhì)（如戊二醛、多聚甲醛）固定細胞結(jié)構(gòu)和組織成分，防止自溶和變形，并使樣品與包埋劑結(jié)合。固定原理是通過交聯(lián)反應(yīng)，使蛋白質(zhì)等大分子結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。2.電鏡樣品脫水的常用方法和注意事項解析：常用方法包括逐級置換法（乙醇濃度遞增）、自動脫水機法、臨界點干燥法、冷凍干燥法。注意事項包括避免樣品收縮或變形、逐步去除水分、防止污染等。3.超薄切片的制備過程及其關(guān)鍵步驟解析：制備過程包括包埋、聚合、切片、染色。關(guān)鍵步驟包括聚合（確保包埋劑硬化）、切片（使用超薄切片機，厚度100nm）、染色（使用鈾酸和鋨酸提高對比度）。4.電鏡樣品包埋劑的選擇依據(jù)解析：選擇依據(jù)包括樣品性質(zhì)（如硬組織需高硬度包埋劑）、電鏡類型（掃描電鏡需低收縮率包埋劑）、聚合溫度和染色效果。5.電鏡樣品染色的原理和常用染色劑解析：染色原理是通過重金屬鹽（如鋨酸、鈾酸）與樣品成分結(jié)合，增加電子密度，提高圖像對比度。常用染色劑包括鋨酸（染細胞器和脂質(zhì)）、鈾酸（染細胞核和酸性成分）。6.電鏡樣品制備中常見的問題及解決方法解析：常見問題包括收縮、變形、染色不均、包埋劑聚合不完全等。解決方法包括優(yōu)化固定劑濃度、改進脫水方法、控制溫度、調(diào)整染色時間等。五、論述題答案及解析1.電鏡樣品制備過程中，不同組織（如植物、動物、細胞培養(yǎng)物）的處理方法有何差異，并說明原因解析：-植物組織：需去除細胞壁（酶解法），因細胞壁會干擾觀察。-動物組織：需快速冷凍或化學固定，以保持細胞形態(tài)。-細胞培養(yǎng)物：可直接固定后包埋，因細胞結(jié)構(gòu)相對簡單。原因：不同組織結(jié)構(gòu)差異大，處理方法需針對其特點優(yōu)化。2.電鏡樣品