第4部分：實(shí)驗(yàn)用猴2019-01-01實(shí)施2019-01-01實(shí)施北京市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語(yǔ)和定義 1 15繁殖種群的遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè) 2附錄A(規(guī)范性附錄)封閉群實(shí)驗(yàn)用猴微衛(wèi)星DNA標(biāo)記檢測(cè)方法 3DB11/T1461《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育與遺傳監(jiān)測(cè)》擬分為以下部分：——第1部分：實(shí)驗(yàn)用豬；——第2部分：實(shí)驗(yàn)用牛；——第3部分：實(shí)驗(yàn)用羊；——第4部分：實(shí)驗(yàn)用猴；本部分主要起草人：劉云波、劉先菊、向志光、滕永康。DB11/T14611實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育與遺傳監(jiān)測(cè)1范圍本部分規(guī)定了實(shí)驗(yàn)用猴的繁育與繁殖種群的遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè)。件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB14923實(shí)驗(yàn)動(dòng)物哺乳類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的遺傳質(zhì)量控制3術(shù)語(yǔ)和定義以非近親交配方式進(jìn)行繁殖生產(chǎn)的實(shí)驗(yàn)用猴種群，種猴數(shù)量應(yīng)不少于25對(duì)。4.1原則作為繁殖用原種的實(shí)驗(yàn)用狨猴必須遺傳背景明確，來(lái)源清楚，有較完整的資料(包括種群名稱、來(lái)源、遺傳基因特點(diǎn)及主要生物學(xué)特性等)。驗(yàn)用狨猴最小引種群規(guī)模為25對(duì)無(wú)血緣關(guān)系(三代以內(nèi)無(wú)共同祖先)動(dòng)物。25.1遺傳質(zhì)量要求a)具有明確的遺傳背景資料，來(lái)源清楚，有完整的資料(包括種群名稱、來(lái)源、遺傳基因特點(diǎn)及主要生物學(xué)特性等);并能充分表明新培育的或引種的繁殖種群符合要求。b)保種及生產(chǎn)的繁殖記錄卡應(yīng)清楚完整，繁殖方法科學(xué)合理。隨機(jī)采取實(shí)驗(yàn)用猴的血液或其他組織，按表1要求從每個(gè)繁殖種群中隨機(jī)抽取非同窩成年動(dòng)物，表1封閉群實(shí)驗(yàn)用猴遺傳檢測(cè)采樣數(shù)量數(shù)量為只群體大小不少于100實(shí)驗(yàn)用猴繁殖種群每年至少進(jìn)行一次遺傳質(zhì)量檢測(cè)。3(規(guī)范性附錄)封閉群實(shí)驗(yàn)用猴微衛(wèi)星DNA標(biāo)記檢測(cè)方法A.1儀器設(shè)備A.3微衛(wèi)星位點(diǎn)100μmol/L:1μl,Taq程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性，4min;94℃變性，30s;退火溫度(各位點(diǎn)序列、PCR反應(yīng)條件參見(jiàn)附表1),30s;72℃延伸，30s;35個(gè)循環(huán)；72℃繼續(xù)延伸7min;擴(kuò)增4將所有樣本的每個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的基因型以ab,bb…等形式運(yùn)用軟件的數(shù)據(jù)文件，計(jì)算樣品在各微衛(wèi)星位點(diǎn)上的基因頻率、平均觀察等位基因數(shù)、平均有效等位基因數(shù)(Ne)、香隆指數(shù)、平均雜合度(H)A.6結(jié)果判定平均雜合度在0.5～0.7時(shí)，群體為合格的實(shí)驗(yàn)用猴群體，或者首先得到各個(gè)位點(diǎn)上各基因頻率、根據(jù)判定結(jié)果對(duì)被檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)用猴群體做出檢測(cè)報(bào)告。表A.1實(shí)驗(yàn)用猴微衛(wèi)星位點(diǎn)的引物序列、最佳擴(kuò)增溫度、等位基因數(shù)及等位基因分布范圍位點(diǎn)引物序列(5′-3)因數(shù)等位基因分布范圍569659742325表A.1實(shí)驗(yàn)用狨猴微衛(wèi)星位點(diǎn)