病理技術(shù)崗位操作規(guī)范手冊第一章總則本手冊旨在規(guī)范病理技術(shù)崗位操作流程，確保標本處理、切片、染色及特殊技術(shù)操作的準確性、規(guī)范性與安全性，為病理診斷提供可靠技術(shù)支持。適用于各級醫(yī)療機構(gòu)病理科及相關(guān)技術(shù)服務(wù)機構(gòu)的病理技術(shù)人員，涵蓋標本接收、組織處理、切片染色、特殊技術(shù)操作（免疫組化、分子病理等）、質(zhì)量控制、安全防護及設(shè)備維護等環(huán)節(jié)。病理技術(shù)人員需具備相關(guān)專業(yè)背景或培訓(xùn)經(jīng)歷，經(jīng)考核合格后方可獨立操作。工作中應(yīng)遵守職業(yè)道德，保護患者隱私，嚴格執(zhí)行生物安全、化學(xué)安全及設(shè)備安全要求。第二章標本接收與處理一、標本接收接收送檢標本時，雙人核對申請單與標本容器信息（患者姓名、標本類型、送檢科室、條碼編號等），檢查容器密封性（無滲漏、溢灑）。若標本量不足、固定液未覆蓋標本（需固定標本）、信息缺失或標本腐敗/干涸，及時聯(lián)系送檢方補正，必要時按拒收流程處理。核對無誤后，將信息錄入病理信息系統(tǒng)，生成唯一編號并關(guān)聯(lián)標本與申請單。二、標本預(yù)處理需固定的組織標本應(yīng)盡快放入10%中性福爾馬林（或Bouin液、Zenker液等），固定液體積為標本的5~10倍。小標本（≤5mm）固定6~12小時，大標本（如臟器）需剖開（厚度≤5mm）后固定12~24小時，確保組織充分固定。若標本需多項目檢測（如常規(guī)病理+免疫組化+分子病理），固定后按比例/部位分配，標注并記錄。第三章組織處理（常規(guī)石蠟包埋流程）一、脫水固定后組織依次經(jīng)75%、85%、95%Ⅰ、95%Ⅱ、100%Ⅰ、100%Ⅱ乙醇梯度脫水，小標本每級1~2小時，大標本每級2~4小時（避免過度/不足脫水）。脫水需在通風櫥內(nèi)進行，定期更換脫水劑，防止交叉污染。脫水后組織應(yīng)呈半透明、質(zhì)地適中。二、透明與浸蠟脫水后組織放入二甲苯（或氯仿）透明，小標本15~30分鐘，大標本30~60分鐘（避免組織變脆）。透明后轉(zhuǎn)入56~60℃石蠟浸蠟，采用二次浸蠟法（每次1~2小時），確保石蠟充分滲透。浸蠟容器需加蓋，定期過濾石蠟、去除雜質(zhì)。三、包埋選擇包埋盒，標注患者信息、標本編號等。將浸蠟組織放入包埋盒中央（調(diào)整切片方向，如皮膚標本垂直表皮），倒入融化石蠟（56~60℃），避免氣泡。冷卻后檢查蠟塊完整性，必要時修整。第四章切片與染色一、切片安裝刀片，調(diào)整切片機厚度（3~5μm，脂肪組織可增厚，神經(jīng)組織可減?。?。蠟塊固定后，若過硬可-20℃冷凍10~15分鐘。勻速切片，使蠟帶連續(xù)無褶皺。蠟帶放入40~45℃水浴展平，載玻片（清潔/硅化）撈取切片，60~65℃烤片1~2小時（確保切片粘附牢固）。二、HE染色（蘇木精-伊紅染色）1.脫蠟至水：二甲苯Ⅰ（10min）→二甲苯Ⅱ（10min）→100%乙醇（2min）→95%乙醇（2min）→85%乙醇（2min）→75%乙醇（2min）→蒸餾水（2min）。2.蘇木精染色：染液中5~10分鐘，蒸餾水沖洗。3.分化與返藍：1%鹽酸乙醇分化數(shù)秒（鏡下核藍、漿淡粉），弱堿液（如0.5%氨水）返藍。4.伊紅染色：染液中1~3分鐘，蒸餾水沖洗。5.脫水透明封片：75%→85%→95%→100%Ⅰ→100%Ⅱ乙醇脫水，二甲苯Ⅰ→二甲苯Ⅱ透明，中性樹膠封片。染色后鏡檢：核深藍、漿粉紅，對比清晰，無背景污染。第五章特殊技術(shù)操作一、免疫組化染色1.脫蠟修復(fù)：同HE脫蠟至水，熱修復(fù)（檸檬酸/EDTA緩沖液，沸騰10~15min）或酶修復(fù)（蛋白酶K/胰酶，室溫10~30min）。2.封閉：3%過氧化氫封閉內(nèi)源性酶（10~15min），正常血清封閉非特異性位點（10~20min）。3.抗體孵育：一抗4℃過夜/室溫1~2小時，二抗室溫30~60分鐘，PBS沖洗。4.顯色封片：DAB顯色（3~10min，鏡下控制），蘇木精復(fù)染，脫水透明封片。質(zhì)控：設(shè)陽性（已知陽性組織）、陰性（PBS替代一抗）對照，確保結(jié)果特異性。二、分子病理（FFPE組織核酸提?。?.脫蠟消化：10張10μm切片→二甲苯脫蠟→乙醇洗滌→干燥→加蛋白酶K+裂解液，56℃過夜消化。2.核酸提?。悍?氯仿抽提→異丙醇沉淀→乙醇洗滌→無酶水溶解，-20℃保存。3.PCR擴增：無酶臺配制體系（模板、引物、酶等），分區(qū)操作（試劑/樣本/擴增），設(shè)陰/陽性對照，避免污染。第六章質(zhì)量控制一、標本處理質(zhì)控檢查固定液濃度/體積，固定后組織無自溶、腐??；脫水后組織質(zhì)地適中，浸蠟后無空洞/裂隙。二、切片染色質(zhì)控切片厚度均勻（3~5μm）、無褶皺，染色后核漿對比清晰；免疫組化陽性信號定位準確，陰/陽性對照符合預(yù)期。定期校準設(shè)備，更換試劑，參加室間質(zhì)評。三、記錄追溯詳細記錄標本處理、操作人、試劑使用、質(zhì)控結(jié)果等，確保流程可追溯。第七章安全與防護一、生物安全處理標本時戴手套、口罩、帽子，穿工作服；避免利器劃傷，職業(yè)暴露后立即處理（擠血、沖洗、消毒、就醫(yī)）。醫(yī)療廢物（標本、蠟塊、染液等）分類處置，交由資質(zhì)機構(gòu)處理。二、化學(xué)安全試劑分類存放于通風柜，遠離火源；操作時戴防護手套，試劑濺灑立即清水沖洗。三、設(shè)備安全切片機使用后清潔、關(guān)電；脫水機、包埋機定期檢查參數(shù)；設(shè)備故障及時報修，防止漏電、過熱。第八章設(shè)備維護與管理一、切片機維護每次使用后清潔表面，每周清潔內(nèi)部；每月潤滑運動部件，每季度校準厚度；刀片用后清潔消毒，妥善存放。二、脫水機/包埋機維護脫水機定期換液、清潔管路；包埋機清理蠟槽，檢查加熱溫度；每月校準程序參數(shù)。三、染色機