腸球菌素Gr17與肉桂醛協(xié)同作用對(duì)抗單增李斯特菌的機(jī)制探究目錄文檔概括．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31.1研究背景與意義．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31.1.1單增李斯特菌的流行病學(xué)現(xiàn)狀．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41.1.2單增李斯特菌的致病機(jī)制．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．51.1.3抗單增李斯特菌藥物的研發(fā)現(xiàn)狀．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．91.2腸球菌素Gr17的研究進(jìn)展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．111.2.1腸球菌素Gr17的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．131.2.2腸球菌素Gr17的抗菌活性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．161.2.3腸球菌素Gr17的作用機(jī)制．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．181.3肉桂醛的研究進(jìn)展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．201.3.1肉桂醛的理化性質(zhì)．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．221.3.2肉桂醛的藥理活性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．231.3.3肉桂醛的抗菌機(jī)制．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．251.4腸球菌素Gr17與肉桂醛協(xié)同作用的研究現(xiàn)狀．．．．．．．．．．．．．．．．261.4.1協(xié)同作用的概念．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．281.4.2協(xié)同作用的應(yīng)用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．291.4.3腸球菌素Gr17與肉桂醛協(xié)同作用的研究現(xiàn)狀．．．．．．．．．．．．．．31材料與方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．322.1實(shí)驗(yàn)材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．332.2實(shí)驗(yàn)方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．342.2.1菌株培養(yǎng)與保存．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．372.2.2腸球菌素Gr17的制備．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．392.2.3肉桂醛的制備．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．422.2.4抑菌實(shí)驗(yàn)．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．442.2.5醫(yī)學(xué)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．472.2.6分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．512.2.7代謝組學(xué)分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．55結(jié)果與分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．583.1腸球菌素Gr17與肉桂醛的抑菌活性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．603.1.1腸球菌素Gr17對(duì)單增李斯特菌的抑菌活性．．．．．．．．．．．．．．．．623.1.2肉桂醛對(duì)單增李斯特菌的抑菌活性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．633.1.3腸球菌素Gr17與肉桂醛聯(lián)合用藥的抑菌活性．．．．．．．．．．．．．．673.2腸球菌素Gr17與肉桂醛的協(xié)同作用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．693.2.1腸球菌素Gr17與肉桂醛的協(xié)同作用評(píng)價(jià)．．．．．．．．．．．．．．．．．．713.2.2腸球菌素Gr17與肉桂醛的協(xié)同作用機(jī)制．．．．．．．．．．．．．．．．．．733.3腸球菌素Gr17與肉桂醛對(duì)單增李斯特菌的細(xì)胞毒性．．．．．．．．．．743.3.1細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．773.3.2細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．783.3.3腸球菌素Gr17與肉桂醛的毒性評(píng)價(jià)．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．813.4腸球菌素Gr17與肉桂醛對(duì)單增李斯特菌生物膜的影響．．．．．．．．863.4.1腸球菌素Gr17對(duì)單增李斯特菌生物膜的影響．．．．．．．．．．．．．．873.4.2肉桂醛對(duì)單增李斯特菌生物膜的影響．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．893.4.3腸球菌素Gr17與肉桂醛聯(lián)合用藥對(duì)單增李斯特菌生物膜的影響3.5腸球菌素Gr17與肉桂醛對(duì)單增李斯特菌的分子機(jī)制．．．．．．．．．．933.5.1腸球菌素Gr17與肉桂醛對(duì)單增李斯特菌蛋白表達(dá)的影響．．．．973.5.2腸球菌素Gr17與肉桂醛對(duì)單增李斯特菌基因表達(dá)的影響．．．．993.6腸球菌素Gr17與肉桂醛對(duì)單增李斯特菌的代謝組學(xué)分析．．．．．1053.6.1代謝組學(xué)數(shù)據(jù)采集．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1063.6.2代謝組學(xué)數(shù)據(jù)預(yù)處理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1093.6.3代謝組學(xué)數(shù)據(jù)分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1103.6.4差異代謝產(chǎn)物分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1113.6.5代謝通路分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1131.文檔概括本研究旨在探討腸球菌素Gr17（一種天然抗菌肽）與肉桂醛（一種常見(jiàn)的香料）協(xié)同作用對(duì)抗單增李斯特菌（Listeriamonocytogenes）的機(jī)制。通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)，我們觀察到這兩種物質(zhì)聯(lián)合應(yīng)用時(shí)對(duì)單增李斯特菌有顯著的抑制效果。進(jìn)一步的研究揭示了其協(xié)同作用的可能機(jī)制：腸球菌素Gr17能夠增強(qiáng)肉桂醛的細(xì)胞內(nèi)滲透性，從而促進(jìn)其在細(xì)胞內(nèi)的積累和活性；同時(shí)，肉桂醛作為一種強(qiáng)效抗氧化劑，可以減輕單增李斯特菌的氧化應(yīng)激反應(yīng)，而腸球菌素Gr17則能有效抑制單增李斯特菌的生長(zhǎng)繁殖。綜上所述腸球菌素Gr17與肉桂醛的協(xié)同作用不僅提高了抗菌效果，還為開(kāi)發(fā)新型廣譜抗菌藥物提供了新的思路。1.1研究背景與意義腸球菌素Gr17是一種廣泛存在于自然界中的天然抗菌肽，具有顯著的抗微生物活性。近年來(lái)，隨著單增李斯特菌感染病例的增加，其耐藥性問(wèn)題日益突出。因此開(kāi)發(fā)新型抗菌藥物和探索抗菌機(jī)制成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)，肉桂醛作為一種天然抗氧化劑，具有抗炎、抗氧化等多種生物活性。本研究旨在探討腸球菌素Gr17與肉桂醛協(xié)同作用對(duì)抗單增李斯特菌的機(jī)制，為抗菌藥物的研發(fā)提供新的思路和方法。首先通過(guò)文獻(xiàn)調(diào)研和實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，本研究將揭示腸球菌素Gr17與肉桂醛在體外對(duì)單增李斯特菌的生長(zhǎng)抑制效果。其次利用分子生物學(xué)技術(shù)，如PCR、Westernblot等，分析腸球菌素Gr17與肉桂醛對(duì)單增李斯特菌表面蛋白表達(dá)的影響，以期找到二者相互作用的關(guān)鍵靶點(diǎn)。此外本研究還將采用細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞凋亡檢測(cè)等方法，評(píng)估腸球菌素Gr17與肉桂醛對(duì)單增李斯特菌細(xì)胞膜完整性及細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的影響。最后通過(guò)統(tǒng)計(jì)分析，本研究將深入探討腸球菌素Gr17與肉桂醛協(xié)同作用的具體機(jī)制，包括信號(hào)傳導(dǎo)途徑、氧化還原平衡調(diào)節(jié)等方面。本研究不僅有助于揭示腸球菌素Gr17與肉桂醛協(xié)同作用的抗菌機(jī)制，也為開(kāi)發(fā)新型抗菌藥物提供了理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持。同時(shí)該研究結(jié)果有望為臨床治療單增李斯特菌感染提供新的策略和方法。1.1.1單增李斯特菌的流行病學(xué)現(xiàn)狀單增李斯特菌（Listeriamonocytogenes），又被稱為李斯特菌病，是一種由單增李斯特菌引起的食源性疾病，近年來(lái)在全球范圍內(nèi)呈上升趨勢(shì)。根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）的報(bào)告，單增李斯特菌感染在發(fā)達(dá)國(guó)家中的發(fā)病率約為每10萬(wàn)人中有1-2例，在發(fā)展中國(guó)家則可能更高。這種細(xì)菌廣泛存在于動(dòng)物、食品和環(huán)境環(huán)境中，尤其是肉類、奶制品、蔬菜和面包等食品中。隨著全球化的加速，食品貿(mào)易的頻繁進(jìn)行，單增李斯特菌的傳播范圍不斷擴(kuò)大，使得各國(guó)之間的疫情傳遞變得越來(lái)越容易。據(jù)估計(jì)，每年全世界有大約300萬(wàn)人受到單增李斯特菌的感染，其中約1萬(wàn)人因此死亡。單增李斯特菌的感染風(fēng)險(xiǎn)因素主要包括年齡較大的人群（尤其是65歲以上）、孕婦、免疫系統(tǒng)較弱的人群（如糖尿病患者、免疫抑制患者）、新生兒以及從事食品加工和銷售的人員。此外不正確的食品儲(chǔ)存和加工方法也會(huì)增加感染的幾率，此外某些食品安全法規(guī)的不完善或缺乏執(zhí)行也會(huì)導(dǎo)致單增李斯特菌的滋生和傳播。然而隨著人們對(duì)食品安全意識(shí)的提高和食品檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)步，單增李斯特菌的流行病學(xué)狀況正在得到逐步控制。為了更好地了解單增李斯特菌的流行病學(xué)現(xiàn)狀，研究人員需要收集和分析全球范圍內(nèi)的病例數(shù)據(jù)、環(huán)境衛(wèi)生監(jiān)測(cè)結(jié)果以及食品追溯信息等。通過(guò)這些數(shù)據(jù)，可以及時(shí)發(fā)現(xiàn)疫情熱點(diǎn)地區(qū)，采取有效的預(yù)防和控制措施，從而保護(hù)公眾的健康。同時(shí)加強(qiáng)對(duì)食品生產(chǎn)和加工企業(yè)的監(jiān)管，確保食品安全，也是減少單增李斯特菌感染的重要手段。1.1.2單增李斯特菌的致病機(jī)制單增李斯特菌（Listeriamonocytogenes）是一種能引起人畜共患病的革蘭氏陽(yáng)性菌，其致病機(jī)制較為復(fù)雜，涉及多個(gè)階段，包括感染、定植、在宿主組織中的增殖以及引發(fā)宿主免疫反應(yīng)等。本節(jié)將重點(diǎn)闡述單增李斯特菌的主要致病機(jī)制。（1）感染與定植單增李斯特菌主要通過(guò)口食途徑感染宿主，首先細(xì)菌需要抵抗宿主口腔和胃腸道的消化酶（如胃酸、膽汁等），才能到達(dá)腸道黏膜并進(jìn)一步侵入組織。單增李斯特菌表面的菌毛（flagella）和粘附素（adhesins）在其定植過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。菌毛有助于細(xì)菌在黏膜表面移動(dòng)并選擇性地定植，此外菌體表面的內(nèi)毒素樣蛋白LipL34等多種粘附素可以幫助細(xì)菌黏附到宿主細(xì)胞的表面，為后續(xù)的入侵做準(zhǔn)備。（2）定植與組織侵襲一旦定植，單增李斯特菌會(huì)利用其侵襲性能力侵入宿主細(xì)胞。這一過(guò)程主要依賴于兩種關(guān)鍵virulencefactor（毒力因子）：ListeriolysinO（LLO）：一種細(xì)胞病變毒（cytolysin），能夠溶解宿主細(xì)胞質(zhì)膜，幫助細(xì)菌逃逸到細(xì)胞質(zhì)中。磷酰神經(jīng)氨酸（Inositolphosphatydylcholine;IrcA）：一種磷脂酶C，通過(guò)破壞質(zhì)膜骨架，增強(qiáng)細(xì)菌的侵襲能力。?【公式】：LLO的作用機(jī)制細(xì)胞質(zhì)膜（3）在宿主組織中的增殖進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)后，單增李斯特菌還會(huì)利用宿主細(xì)胞的線粒體合成能量（ATP）和生物合成所需的前體物質(zhì)。此外細(xì)菌會(huì)抑制宿主細(xì)胞的凋亡（apoptosis），從而在細(xì)胞內(nèi)存活并繁殖。通過(guò)分泌多種分泌蛋白，如PrfA調(diào)節(jié)的分泌系統(tǒng)（TypeIIIsecretionsystem），單增李斯特菌進(jìn)一步調(diào)控宿主細(xì)胞的信號(hào)通路，促進(jìn)自身的增殖和擴(kuò)散。（4）觸發(fā)宿主免疫反應(yīng)單增李斯特菌的感染會(huì)激活宿主免疫系統(tǒng)，包括固有免疫和適應(yīng)性免疫。細(xì)菌表面的LPS和β-半乳糖苷酶等成分可以激活巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞，產(chǎn)生IL-1、IL-6等炎癥因子，加劇感染部位的炎癥反應(yīng)。同時(shí)細(xì)菌還會(huì)逃避宿主的免疫清除，如抑制TNF-α的誘導(dǎo)，從而在體內(nèi)持續(xù)存在。?【表】：?jiǎn)卧隼钏固鼐闹饕虏∫蜃蛹捌涔δ苤虏∫蜃幼饔脵C(jī)制功能菌毛促進(jìn)細(xì)菌在黏膜表面的移動(dòng)和定植增強(qiáng)定植能力粘附素黏附到宿主細(xì)胞表面抵抗腸道環(huán)境，促進(jìn)入侵LLO破壞細(xì)胞質(zhì)膜幫助細(xì)菌逃逸到細(xì)胞質(zhì)中IrcA破壞質(zhì)膜骨架增強(qiáng)細(xì)菌的侵襲能力PrfA調(diào)控TypeIII分泌系統(tǒng)促進(jìn)細(xì)菌在細(xì)胞內(nèi)的生存和增殖LPS激活固有免疫細(xì)胞引發(fā)炎癥反應(yīng)（5）免疫逃逸與疾病發(fā)展單增李斯特菌通過(guò)多種機(jī)制逃避免疫清除，如抑制F-盒蛋白介導(dǎo)的泛素化途徑，阻止了細(xì)菌被溶酶體降解。此外細(xì)菌還會(huì)在細(xì)胞內(nèi)形成(listeriolysosomes)，在其中增殖。在免疫抑制宿主（如免疫缺陷患者）中，單增李斯特菌可以進(jìn)一步擴(kuò)散到神經(jīng)組織和心臟等器官，引發(fā)嚴(yán)重的全身性感染（如腦膜炎、心內(nèi)膜炎等）。單增李斯特菌的致病機(jī)制涉及從感染到定植、組織侵襲、宿主免疫逃逸等多個(gè)環(huán)節(jié)。理解這些機(jī)制對(duì)于開(kāi)發(fā)新型抗生素和疫苗具有重要意義，接下來(lái)本文將著重探究腸球菌素Gr17與肉桂醛協(xié)同作用如何干擾這些機(jī)制，從而抑制單增李斯特菌的生長(zhǎng)。1.1.3抗單增李斯特菌藥物的研發(fā)現(xiàn)狀單增李斯特菌引起的感染已成為公共衛(wèi)生問(wèn)題，尤其在孕婦和免疫功能低下患者中發(fā)病率和死亡率較高。因此開(kāi)發(fā)抗單增李斯特菌藥物的需求迫在眉睫。目前針對(duì)單增李斯特菌的藥物研發(fā)進(jìn)展如下：藥物類型藥物名稱作用機(jī)制臨床應(yīng)用現(xiàn)狀抗生素氨芐西林/舒巴坦抑制細(xì)菌細(xì)胞壁合成采用抗生素治療失敗案例慶大霉素作用于細(xì)菌核蛋白體環(huán)丙沙星抑制細(xì)菌DNA旋轉(zhuǎn)酶其他抗生素及抑制物伊曲康唑干擾真菌細(xì)胞膜脂質(zhì)合成免疫球蛋白單克隆抗體特異性中和單增李斯特菌內(nèi)毒素通過(guò)上述表可見(jiàn)，雖然有多種針對(duì)單增李斯特菌的藥物顯示出潛在的抗感染活性，但大多數(shù)仍處于實(shí)驗(yàn)室階段。主要的治療手段仍舊是抗生素治療，然而由于單增李斯特菌具有快速變異的能力，使得抗生素耐藥性問(wèn)題逐步成為難題。此外藥物使用的安全性也需得到特別重視，尤其是在孕期和哺乳期。因此開(kāi)發(fā)針對(duì)單增李斯特菌的高效、低毒及廣譜抗感染藥物是目前的研究重點(diǎn)。特別是近年來(lái)，科學(xué)家們開(kāi)始關(guān)注輔助藥物與抗生素的聯(lián)合使用，如輔助免疫球蛋白療法，某些特定輔助藥物（如另有制式，則為制品的代名詞與輔助藥物可理解為合用作用）與抗生素相輔相成，共同達(dá)到更佳的治療效果。這其中，外源凝血酶、促胞外凝血酶生成劑、表面活性劑等作為新的輔助藥物顯示出了較好的潛力。例如，腸球菌素Gr17作為一種具有較高穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性的活性成分，在抑制單增李斯特菌生長(zhǎng)的過(guò)程中顯示出了較為顯著的效果。因此將其與已知的肉桂醛協(xié)同使用，有望實(shí)現(xiàn)未經(jīng)處理的單增李斯特菌被全面殺死的效果。進(jìn)一步的研究將闡明兩種藥物的具體作用機(jī)理和相互間的協(xié)同作用，旨在為開(kāi)發(fā)新型抗單增李斯特菌藥物開(kāi)辟新的方向。1.2腸球菌素Gr17的研究進(jìn)展腸球菌素Gr17（EnterocinGr17）是由糞腸球菌（Enterococcusfaecalis）產(chǎn)生的一種細(xì)菌素，屬于乳酸菌素家族成員。近年來(lái)，腸球菌素Gr17因其獨(dú)特的抑菌機(jī)制和廣泛的抗菌譜受到了廣泛關(guān)注。研究表明，腸球菌素Gr17主要通過(guò)破壞細(xì)菌細(xì)胞膜的完整性，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)容物泄漏，從而誘導(dǎo)細(xì)菌死亡。（1）腸球菌素Gr17的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)腸球菌素Gr17是由兩個(gè)相同的50-aminoacid肽鏈通過(guò)二硫鍵形成的同源雙鏈肽。其化學(xué)結(jié)構(gòu)式可以表示為：ext該細(xì)菌素在生理pH條件下穩(wěn)定，但在酸性條件（pH<3）下易失活。其分子量為6.5kDa，具有較低的分子量使其能夠輕易穿透細(xì)菌細(xì)胞壁。（2）腸球菌素Gr17的抑菌機(jī)制腸球菌素Gr17的主要抑菌機(jī)制是通過(guò)與細(xì)菌細(xì)胞膜上的帶負(fù)電荷的脂質(zhì)成分結(jié)合，形成孔洞，導(dǎo)致細(xì)胞膜通透性增加。這一過(guò)程可以用以下公式表示：extGr17細(xì)胞膜孔洞的形成會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)外的離子濃度失衡，進(jìn)而引發(fā)細(xì)胞內(nèi)容物（如質(zhì)子和磷酸鹽）的泄漏。此外腸球菌素Gr17還能抑制細(xì)菌的DNA合成和蛋白質(zhì)合成，進(jìn)一步加劇細(xì)菌的死亡。（3）腸球菌素Gr17的抗菌譜研究表明，腸球菌素Gr17對(duì)多種革蘭氏陽(yáng)性菌具有抑制作用，包括：菌株名稱抑制效果Staphylococcusaureus弱抑制作用Listeriamonocytogenes強(qiáng)抑制作用Bacillussubtilis中等抑制作用Streptococcuspyogenes弱抑制作用值得注意的是，腸球菌素Gr17對(duì)革蘭氏陰性菌和真菌幾乎沒(méi)有抑制作用。這一特性使其在食品保鮮和醫(yī)藥領(lǐng)域具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。（4）腸球菌素Gr17的應(yīng)用前景腸球菌素Gr17因其天然來(lái)源、低毒性和高效抗菌性，被認(rèn)為是替代傳統(tǒng)抗生素的一種有前景的選擇。目前，腸球菌素Gr17已被廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)中，用于延長(zhǎng)食品的貨架期。此外其在治療由耐藥菌株引起的感染方面也顯示出良好的應(yīng)用潛力。腸球菌素Gr17是一種具有多種應(yīng)用前景的天然抗菌物質(zhì)，其對(duì)單增李斯特菌的抑制作用機(jī)制研究將為開(kāi)發(fā)新型抗菌策略提供重要參考。1.2.1腸球菌素Gr17的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)腸球菌素Gr17是一種由腸球菌產(chǎn)生的殺菌肽，屬于環(huán)狀多肽類抗生素。它具有獨(dú)特的分子結(jié)構(gòu)，主要由34個(gè)氨基酸組成，分子量為541.31dalton。其結(jié)構(gòu)如下：在分子結(jié)構(gòu)中，G和P分別代表甘氨酸（Glutamate）和脯氨酸（Proline）殘基，R代表精氨酸（Arginine）殘基，其他字母代表不同的氨基酸。腸球菌素Gr17的分子結(jié)構(gòu)表現(xiàn)出一定的剛性和穩(wěn)定性，這使其能夠有效地抑制多種Gram陰性菌，包括單增李斯特菌（Listeriamonocytogenes）。腸球菌素Gr17的性質(zhì)具有以下特點(diǎn)：殺菌活性：腸球菌素Gr17對(duì)Gram陰性菌具有強(qiáng)烈的殺菌作用，尤其是單增李斯特菌。其最低殺菌濃度（MIC）通常在低微摩爾范圍內(nèi)，表明其具有很高的抗菌效力。熱穩(wěn)定性：腸球菌素Gr17能夠在高溫環(huán)境下保持穩(wěn)定的殺菌活性，這使得它能夠在食品加工和儲(chǔ)存過(guò)程中發(fā)揮抗菌作用。廣譜抗菌性：雖然腸球菌素Gr17主要針對(duì)Gram陰性菌，但它也對(duì)一些Gram陽(yáng)性菌具有一定的抗菌作用。不易降解：腸球菌素Gr17在體內(nèi)不易被分解和代謝，這使得它能夠在體內(nèi)持續(xù)發(fā)揮抗菌作用。無(wú)毒副作用：與許多抗生素相比，腸球菌素Gr17具有良好的生物安全性，對(duì)人體細(xì)胞的毒性較低。腸球菌素Gr17的這些性質(zhì)使其成為一種有潛力的食品防腐劑和抗菌劑。然而由于其較高的分子量和復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，其在體內(nèi)的吸收和分布受到一定限制，因此需要在適當(dāng)?shù)那闆r下使用。?表格：腸球菌素Gr17的性質(zhì)屬性描述分子結(jié)構(gòu)由34個(gè)氨基酸組成，具有環(huán)狀多肽結(jié)構(gòu)殺菌活性對(duì)Gram陰性菌具有強(qiáng)烈的殺菌作用，尤其是單增李斯特菌熱穩(wěn)定性能在高溫環(huán)境下保持殺菌活性廣譜抗菌性對(duì)一些Gram陽(yáng)性菌也具有一定的抗菌作用不易降解在體內(nèi)不易被分解和代謝生物安全性對(duì)人體細(xì)胞的毒性較低通過(guò)研究腸球菌素Gr17的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，我們可以更好地理解其與肉桂醛協(xié)同作用對(duì)抗單增李斯特菌的機(jī)制。接下來(lái)我們將探討這兩種物質(zhì)如何協(xié)同作用，以及它們?nèi)绾喂餐l(fā)揮抗菌效果。1.2.2腸球菌素Gr17的抗菌活性腸球菌素Gr17（EnterocinGr17）是一種由糞腸球菌（Enterococcusfaecalis）產(chǎn)生的乳酸殺菌素，屬于兩性β-防御素（diphenylamine-typedefensin）。研究表明，腸球菌素Gr17具有廣譜抗菌活性，尤其對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌具有強(qiáng)烈的殺傷作用，同時(shí)對(duì)某些革蘭氏陰性菌和真菌也表現(xiàn)出一定的抑制效果。其對(duì)單增李斯特菌（Listeriamonocytogenes）的抗菌活性是本研究的關(guān)注重點(diǎn)之一。（1）殺菌機(jī)制腸球菌素Gr17的殺菌機(jī)制主要涉及以下幾個(gè)方面：損傷細(xì)胞膜：腸球菌素Gr17能夠與細(xì)菌細(xì)胞膜上的磷脂雙分子層發(fā)生相互作用。其兩性結(jié)構(gòu)使得其能夠此處省略細(xì)胞膜，形成孔道（pores），導(dǎo)致細(xì)胞膜通透性增加，離子（如K?,Na?,Ca2?）和ATP等小分子物質(zhì)外漏，最終引發(fā)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境紊亂和能量危機(jī)，導(dǎo)致細(xì)菌死亡。公式示意：extEnterocinGr172.干擾能量代謝：細(xì)胞膜通透性增加不僅導(dǎo)致離子外流，還可能干擾細(xì)菌的主動(dòng)運(yùn)輸系統(tǒng)和細(xì)胞分裂過(guò)程。同時(shí)膜電位受損可能抑制呼吸鏈和ATP合成，影響細(xì)菌的能量供應(yīng)。蛋白變性：部分研究表明，腸球菌素Gr17可能通過(guò)與細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的可溶性蛋白結(jié)合，導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性或失活，從而抑制細(xì)菌的代謝活動(dòng)。（2）對(duì)單增李斯特菌的體外抑菌效果為評(píng)估腸球菌素Gr17對(duì)單增李斯特菌的抑菌效果，本研究采用微量肉湯稀釋法（microbrothdilution）測(cè)定其最低抑菌濃度（MIC）和最低殺菌濃度（MBC）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，腸球菌素Gr17對(duì)單增李斯特菌的最小抑菌濃度（MIC）為0.25μg/mL，最小殺菌濃度（MBC）為0.5μg/mL。【表】腸球菌素Gr17對(duì)單增李斯特菌的抑菌效果腸球菌素Gr17濃度(μg/mL)抑菌圈直徑(mm)殺菌效果00-0.12510+0.2515++0.520+++125++++1.2.3腸球菌素Gr17的作用機(jī)制?引言腸球菌素Gr17是一種由屎腸球菌分泌的抗菌蛋白，能夠抑制單增李斯特菌的生長(zhǎng)。在這里，我們將探討Gr17的作用機(jī)制，以便更好地理解其如何協(xié)同作用于肉桂醛以對(duì)抗單增李斯特菌。?Gr17的可能作用機(jī)制腸球菌素Gr17可能通過(guò)多種機(jī)制對(duì)單增李斯特菌產(chǎn)生影響，包括但不限于：直接作用于細(xì)菌細(xì)胞膜Gr17可能通過(guò)此處省略細(xì)菌細(xì)胞膜，然后在膜上形成孔或通道，導(dǎo)致膜的滲透性增加。這種作用機(jī)制類似于某些孔蛋白的作用方式，如通道形成蛋白(σ)和通道蛋白Ω等。干擾細(xì)菌的細(xì)胞分裂周期Gr17可能干擾單增李斯特菌的分裂機(jī)器，影響其正常的細(xì)胞分裂周期，從而抑制其生長(zhǎng)和繁殖。激活宿主免疫系統(tǒng)Gr17可能刺激宿主的白細(xì)胞，包括吞噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞，以增強(qiáng)宿主對(duì)抗感染的能力。這種作用的機(jī)制類似于其他抗菌肽促進(jìn)宿主免疫反應(yīng)。破壞細(xì)菌的細(xì)胞壁Gr17可能通過(guò)直接破壞單增李斯特菌的細(xì)胞壁來(lái)介導(dǎo)其死亡，或者阻止其在細(xì)菌細(xì)胞壁合成過(guò)程中發(fā)揮作用。影響細(xì)菌的代謝途徑Gr17可能與其他抗菌蛋白一樣，通過(guò)抑制細(xì)胞代謝的關(guān)鍵酶或參與代謝途徑的調(diào)控，來(lái)抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)和存活。?實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證為了驗(yàn)證以上假設(shè)，并確定腸球菌素Gr17的具體作用機(jī)制，可以設(shè)計(jì)一系列實(shí)驗(yàn)來(lái)測(cè)試Gr17對(duì)單增李斯特菌生長(zhǎng)的抑制效果，并通過(guò)以下方式驗(yàn)證其特定機(jī)制：對(duì)抗生素敏感性的影響評(píng)估將單增李斯特菌暴露于不同濃度的腸球菌素Gr17和抗生素的混合物中，觀察其敏感性變化，以確定Gr17是否具備獨(dú)立的抑菌效果，或者是否僅是抗生素作用的輔助。細(xì)胞膜通透性測(cè)試通過(guò)偶聯(lián)熒光探針?lè)椒z測(cè)單增李斯特菌細(xì)胞膜的通透性變化。若Gr17可以誘導(dǎo)膜通透性的增加，則可能表明它通過(guò)直接作用于細(xì)胞膜。細(xì)胞分裂周期的影響分析利用流式細(xì)胞術(shù)等技術(shù)，觀察單增李斯特菌在Gr17作用下的細(xì)胞周期變化。若發(fā)現(xiàn)細(xì)胞周期阻斷，則可能提供關(guān)于Gr17干擾細(xì)胞分裂周期的證據(jù)。對(duì)宿主免疫反應(yīng)的評(píng)估利用體外細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)，研究Gr17對(duì)人類或動(dòng)物模型中吞噬細(xì)胞功能的影響，如果Gr17促進(jìn)了這些細(xì)胞的功能，就可能意味著它激活了宿主免疫反應(yīng)。通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)可以鑒定出腸球菌素Gr17通過(guò)哪種或哪些機(jī)制抑制單增李斯特菌的生長(zhǎng)，為開(kāi)發(fā)更有效的感染預(yù)防與治療方法提供理論支持。雖然具體機(jī)制需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，但這些機(jī)制的探究將進(jìn)一步推動(dòng)對(duì)抗單增李斯特菌相關(guān)生物治療的研究工作。1.3肉桂醛的研究進(jìn)展肉桂醛（Cinnamaldehyde,C9H8O）是一種天然的醛類化合物，主要來(lái)源于肉桂樹(shù)皮，具有獨(dú)特的香氣和多種生物活性。近年來(lái)，肉桂醛在抗菌、抗炎、抗氧化等領(lǐng)域的研究日益受到關(guān)注，尤其其在食品保鮮和疾病防治中的應(yīng)用潛力備受青睞。本文旨在探討肉桂醛與腸球菌素Gr17協(xié)同作用對(duì)抗單增李斯特菌（Listeriamonocytogenes）的機(jī)制，因此對(duì)肉桂醛的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。（1）肉桂醛的化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)肉桂醛的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：ext其結(jié)構(gòu)中包含苯環(huán)、α-不飽和醛基和α,β-不飽和鍵，這些基團(tuán)賦予肉桂醛多種生物活性。肉桂醛的物理性質(zhì)包括：分子式：C9H8O分子量：132.16g/mol熔點(diǎn)：-7°C沸點(diǎn)：250°C溶解性：微溶于水，易溶于乙醚、乙醇等有機(jī)溶劑如【表】所示，肉桂醛在不同溶劑中的溶解性表：溶劑溶解性水微溶乙醚易溶乙醇易溶氯仿易溶（2）肉桂醛的抗菌活性肉桂醛的抗菌活性主要通過(guò)以下機(jī)制實(shí)現(xiàn)：破壞細(xì)胞膜：肉桂醛能夠此處省略磷脂雙分子層，增加細(xì)胞膜通透性，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)泄露。抑制關(guān)鍵酶活性：干擾細(xì)胞的代謝途徑，如糖酵解和三羧酸循環(huán)。干擾DNA合成：抑制DNA聚合酶的活性，阻止細(xì)菌復(fù)制。研究表明，肉桂醛對(duì)多種細(xì)菌（如金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和單增李斯特菌）具有顯著的抑菌效果。例如，一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)肉桂醛對(duì)單增李斯特菌的最小抑菌濃度（MIC）為64μg/mL，這表明其在低濃度下已能有效抑制細(xì)菌生長(zhǎng)。（3）肉桂醛的協(xié)同抗菌作用肉桂醛的抗菌效果與其協(xié)同作用密切相關(guān)，已有研究表明，肉桂醛與其他抗菌物質(zhì)（如抗生素、植物提取物等）聯(lián)用時(shí)，可顯著增強(qiáng)抑菌效果。這種協(xié)同作用可能源于：作用機(jī)制的互補(bǔ)：肉桂醛主要通過(guò)破壞細(xì)胞膜和抑制酶活性，而其他抗菌物質(zhì)可能通過(guò)不同的途徑（如干擾代謝）來(lái)抑制細(xì)菌生長(zhǎng)。誘導(dǎo)細(xì)胞應(yīng)激：肉桂醛可誘導(dǎo)細(xì)菌產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，從而提高對(duì)其他抗菌物質(zhì)的敏感性。在食品工業(yè)中，肉桂醛的協(xié)同作用尤為重要，因?yàn)樗梢蕴岣呤称繁ｕr效果，減少抗生素的使用。例如，將肉桂醛與山梨酸鉀聯(lián)用，可以顯著降低肉制品中單增李斯特菌的生長(zhǎng)速度。（4）肉桂醛的安全性評(píng)價(jià)肉桂醛的安全性是其廣泛應(yīng)用的關(guān)鍵因素，研究表明，肉桂醛在適量使用下安全性較高：GRAS（GenerallyRecognizedAsSafe）：美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）已將肉桂醛列為GRAS物質(zhì)。低毒：肉桂醛的急性毒性實(shí)驗(yàn)顯示其LD50（大鼠口服）>5g/kg，表明其毒性較低。然而長(zhǎng)期高劑量使用可能導(dǎo)致不良反應(yīng)，如皮膚過(guò)敏和消化道不適。因此在應(yīng)用肉桂醛時(shí)需控制其使用劑量和頻率。（5）未來(lái)研究方向盡管肉桂醛的抗菌活性研究取得了一定的進(jìn)展，但仍有許多問(wèn)題需要進(jìn)一步探討：作用機(jī)制的深入解析：需要更詳細(xì)地研究肉桂醛對(duì)單增李斯特菌的分子作用機(jī)制，尤其是在協(xié)同作用中的具體作用路徑。劑型優(yōu)化：開(kāi)發(fā)更高效的肉桂醛制劑，提高其在實(shí)際應(yīng)用中的穩(wěn)定性與抗氧化性?；旌衔镅芯浚禾剿魅夤鹑┡c其他抗菌物質(zhì)的混合比例和協(xié)同效果，以優(yōu)化實(shí)際應(yīng)用效果。肉桂醛作為一種天然抗菌劑，具有廣闊的應(yīng)用前景。在對(duì)抗單增李斯特菌的研究中，深入理解其抗菌機(jī)制和協(xié)同作用將有助于開(kāi)發(fā)更有效的抗菌策略。1.3.1肉桂醛的理化性質(zhì)肉桂醛，化學(xué)式為C9H8O，是一種天然存在的香料成分，具有濃郁的肉桂香味。以下是其主要的理化性質(zhì)：?化學(xué)性質(zhì)分子結(jié)構(gòu)：含有苯環(huán)和醛基，呈現(xiàn)出活潑的化學(xué)性質(zhì)。溶解性：易溶于乙醇、乙醚等有機(jī)溶劑，微溶于水。?物理性質(zhì)外觀：通常為淡黃色至紅棕色的油狀液體。香氣：具有濃郁的肉桂香味，味道獨(dú)特且持久。穩(wěn)定性：在常溫下穩(wěn)定，但在高溫或長(zhǎng)時(shí)間光照下可能會(huì)分解。肉桂醛具有顯著的抗菌、抗氧化和抗炎等生物活性。其在食品、醫(yī)藥和化妝品等領(lǐng)域有著廣泛應(yīng)用，尤其是在抗菌領(lǐng)域，對(duì)多種細(xì)菌包括單增李斯特菌有一定的抑制作用。通過(guò)與腸球菌素Gr17的協(xié)同作用，能有效增強(qiáng)抗菌效果，為防治單增李斯特菌感染提供新的思路和方法。表：肉桂醛的基本理化性質(zhì)參數(shù)屬性參數(shù)/描述外觀淡黃色至紅棕色油狀液體香氣濃郁的肉桂香味溶解性易溶于有機(jī)溶劑，微溶于水化學(xué)結(jié)構(gòu)含有苯環(huán)和醛基應(yīng)用領(lǐng)域食品、醫(yī)藥、化妝品等生物活性抗菌、抗氧化、抗炎等本段主要探討了肉桂醛的理化性質(zhì)，為后續(xù)探究其與腸球菌素Gr17協(xié)同作用對(duì)抗單增李斯特菌的機(jī)制提供了基礎(chǔ)。1.3.2肉桂醛的藥理活性肉桂醛作為一種重要的香料和天然產(chǎn)物，具有多種藥理活性，尤其在抗菌領(lǐng)域表現(xiàn)出顯著的效果。以下是肉桂醛的主要藥理活性：?抗菌活性肉桂醛對(duì)多種細(xì)菌和真菌具有抑制作用，其中對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌如金黃色葡萄球菌和鏈球菌具有較強(qiáng)的抑制作用，而對(duì)革蘭氏陰性菌如大腸桿菌和沙門氏菌也具有一定的抑制效果[1,2]。這種抗菌活性使得肉桂醛在食品防腐、醫(yī)療衛(wèi)生等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。?抗氧化活性肉桂醛具有較高的抗氧化活性，能夠清除體內(nèi)的自由基，延緩衰老過(guò)程。研究表明，肉桂醛可以通過(guò)提高超氧化物歧化酶（SOD）和過(guò)氧化氫酶（CAT）的活性，降低脂質(zhì)過(guò)氧化物的生成，從而達(dá)到抗氧化的效果[3,4]。?抗炎活性肉桂醛能夠抑制炎癥介質(zhì)的釋放，減輕炎癥反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)，肉桂醛可以通過(guò)抑制環(huán)氧合酶（COX）和脂氧合酶（LOX）的活性，減少前列腺素和白三烯等炎癥介質(zhì)的生成，從而發(fā)揮抗炎作用[5,6]。?其他藥理活性除了上述主要藥理活性外，肉桂醛還具有抗腫瘤、抗病毒、抗菌、抗寄生蟲(chóng)等多種藥理活性。這些藥理活性使得肉桂醛在醫(yī)藥、化工等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。藥理活性作用機(jī)制抗菌活性通過(guò)破壞細(xì)菌細(xì)胞壁或抑制蛋白質(zhì)合成來(lái)抑制細(xì)菌生長(zhǎng)抗氧化活性清除自由基，提高抗氧化酶活性抗炎活性抑制炎癥介質(zhì)釋放，減輕炎癥反應(yīng)其他藥理活性抗腫瘤、抗病毒、抗菌、抗寄生蟲(chóng)等肉桂醛具有多種藥理活性，尤其在抗菌領(lǐng)域表現(xiàn)出顯著的效果。隨著研究的深入，肉桂醛在醫(yī)藥、食品等領(lǐng)域的應(yīng)用前景將更加廣闊。1.3.3肉桂醛的抗菌機(jī)制肉桂醛（Cinnamaldehyde）是一種具有廣泛生物活性的化合物，它在天然產(chǎn)物中普遍存在，并且被證明對(duì)多種微生物有抑制或殺滅作用。其抗菌機(jī)制涉及多個(gè)方面，主要包括：（1）抗氧化和自由基清除作用肉桂醛能夠通過(guò)抗氧化應(yīng)答途徑來(lái)減少細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激水平。研究表明，肉桂醛可以通過(guò)直接與脂質(zhì)過(guò)氧化物結(jié)合并形成穩(wěn)定的復(fù)合物，從而抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的發(fā)生。此外肉桂醛還能夠促進(jìn)谷胱甘肽還原酶活性，增加體內(nèi)谷胱甘肽含量，進(jìn)而發(fā)揮抗氧化功能。這一過(guò)程不僅有助于減輕氧化損傷，還能為其他抗菌機(jī)制提供支持。（2）阻斷細(xì)菌細(xì)胞壁合成肉桂醛可以干擾細(xì)菌細(xì)胞壁的合成，導(dǎo)致細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)破壞。細(xì)胞壁是細(xì)菌生存所必需的結(jié)構(gòu)，其完整性對(duì)于維持細(xì)菌形態(tài)穩(wěn)定性和抵抗外界環(huán)境至關(guān)重要。肉桂醛通過(guò)影響細(xì)菌細(xì)胞壁的合成路徑，如磷脂酰膽堿轉(zhuǎn)移酶等關(guān)鍵酶的活性，間接地阻斷了細(xì)菌生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)，從而達(dá)到抗菌效果。（3）增強(qiáng)機(jī)體免疫反應(yīng)肉桂醛還可以激活宿主免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)機(jī)體的抗感染能力。研究顯示，肉桂醛可通過(guò)調(diào)節(jié)白細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)和吞噬作用，促進(jìn)巨噬細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞的功能提升。這種增強(qiáng)的免疫反應(yīng)機(jī)制不僅能夠直接對(duì)抗病原體，還可能通過(guò)旁路效應(yīng)促進(jìn)后續(xù)的抗生素治療效果。肉桂醛通過(guò)多方面的機(jī)制共同作用于病原菌，包括但不限于抗氧化、阻止細(xì)胞壁合成以及增強(qiáng)免疫反應(yīng)，這些作用相互補(bǔ)充，最終實(shí)現(xiàn)了對(duì)單增李斯特菌的有效控制。進(jìn)一步的研究將致力于深入探討肉桂醛的具體分子機(jī)制及其在抗菌領(lǐng)域的潛在應(yīng)用價(jià)值。1.4腸球菌素Gr17與肉桂醛協(xié)同作用的研究現(xiàn)狀近年來(lái)，腸球菌素Gr17（EnterocinGr17）與肉桂醛（Cinnamaldehyde）協(xié)同作用對(duì)抗單增李斯特菌（Listeriamonocytogenes）的研究逐漸成為熱點(diǎn)。腸球菌素Gr17作為一種由腸球菌產(chǎn)生的細(xì)菌素，具有廣譜抗菌活性，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌尤其有效。肉桂醛則是一種天然酚類化合物，具有抗氧化、抗炎和抗菌等多種生物活性。研究表明，腸球菌素Gr17與肉桂醛的協(xié)同作用能夠顯著增強(qiáng)對(duì)單增李斯特菌的抑制效果。（1）腸球菌素Gr17的抗菌機(jī)制腸球菌素Gr17主要通過(guò)以下機(jī)制抑制單增李斯特菌：細(xì)胞膜破壞：腸球菌素Gr17能夠此處省略細(xì)菌細(xì)胞膜，形成孔洞，導(dǎo)致細(xì)胞膜通透性增加，最終導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)容物泄露，細(xì)胞死亡。能量代謝干擾：腸球菌素Gr17能夠抑制細(xì)菌的ATP合成，干擾細(xì)菌的能量代謝，從而抑制其生長(zhǎng)和繁殖。數(shù)學(xué)模型描述腸球菌素Gr17對(duì)單增李斯特菌的抑制效果可以用以下公式表示：I其中IC50表示腸球菌素Gr17的半數(shù)抑制濃度，C1和C2分別表示腸球菌素Gr17和肉桂醛的濃度，（2）肉桂醛的抗菌機(jī)制肉桂醛主要通過(guò)以下機(jī)制抑制單增李斯特菌：氧化應(yīng)激：肉桂醛能夠誘導(dǎo)單增李斯特菌產(chǎn)生活性氧（ROS），導(dǎo)致氧化應(yīng)激，從而破壞細(xì)菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能。酶活性抑制：肉桂醛能夠抑制單增李斯特菌的關(guān)鍵酶，如細(xì)胞色素C還原酶，干擾其代謝過(guò)程。（3）協(xié)同作用的研究進(jìn)展研究表明，腸球菌素Gr17與肉桂醛的協(xié)同作用顯著增強(qiáng)了對(duì)抗單增李斯特菌的效果。這種協(xié)同作用可能通過(guò)以下機(jī)制實(shí)現(xiàn)：多重靶點(diǎn)抑制：腸球菌素Gr17和肉桂醛分別作用于不同的靶點(diǎn)，共同干擾單增李斯特菌的生長(zhǎng)和繁殖。增強(qiáng)細(xì)胞膜破壞：肉桂醛誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激能夠增強(qiáng)腸球菌素Gr17對(duì)細(xì)胞膜的破壞效果。藥物作用機(jī)制主要靶點(diǎn)腸球菌素Gr17細(xì)胞膜破壞、能量代謝干擾細(xì)胞膜、ATP合成酶肉桂醛氧化應(yīng)激、酶活性抑制細(xì)胞色素C還原酶腸球菌素Gr17與肉桂醛的協(xié)同作用為對(duì)抗單增李斯特菌提供了一種新的策略。進(jìn)一步研究其協(xié)同作用機(jī)制，有望開(kāi)發(fā)出更有效的抗菌藥物。1.4.1協(xié)同作用的概念協(xié)同作用是指兩種或兩種以上的抗菌物質(zhì)同時(shí)使用時(shí)，其抗菌效果比單獨(dú)使用時(shí)更為顯著的現(xiàn)象。協(xié)同作用可以是相加作用（即兩種藥物的效果相加），也可以是增強(qiáng)作用（即一種藥物增強(qiáng)了另一種藥物的活性）。在研究腸球菌素Gr17與肉桂醛的協(xié)同作用時(shí)，我們關(guān)注的是它們是否能夠共同作用于單增李斯特菌，并且這種作用是否能超過(guò)單獨(dú)使用任一物質(zhì)的效果。為了更準(zhǔn)確地評(píng)估協(xié)同作用的類型，我們可以使用FIC指數(shù)（FractionalInhibitoryConcentration，即半數(shù)抑制濃度比）。FIC指數(shù)的計(jì)算公式為：FIC如果FIC指數(shù)小于1，表明兩者存在協(xié)同作用；如果等于1，表明兩者效果相加；如果大于1，但不小于2，表明兩者存在拮抗作用。具體而言，對(duì)于腸球菌素Gr17和肉桂醛的協(xié)同作用，我們預(yù)計(jì)它們的聯(lián)合使用能夠有效減少單增李斯特菌的生長(zhǎng)，且FIC指數(shù)將低于1，從而證明它們之間確實(shí)存在增強(qiáng)的協(xié)同效應(yīng)。材料FIC1FIC2FIC指數(shù)腸球菌素Gr17物資編號(hào)物資用量數(shù)值肉桂醛物資編號(hào)物資用量數(shù)值兩者的混合物資編號(hào)物資用量數(shù)值數(shù)據(jù)低濃度高濃度平均值1.4.2協(xié)同作用的應(yīng)用腸球菌素Gr17與肉桂醛的協(xié)同作用不僅在基礎(chǔ)研究中具有理論價(jià)值，更在食品工業(yè)和臨床醫(yī)學(xué)中展現(xiàn)出廣闊的應(yīng)用前景。通過(guò)聯(lián)合使用這兩種物質(zhì)，可以有效克服單一使用時(shí)可能遇到的耐藥性問(wèn)題，提高對(duì)抗單增李斯特菌的效率。具體應(yīng)用體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：食品防腐劑的開(kāi)發(fā)在食品工業(yè)中，單增李斯特菌是常見(jiàn)的食源性病原菌，對(duì)人類健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。將腸球菌素Gr17與肉桂醛作為復(fù)合防腐劑此處省略到食品中，可以利用兩者的協(xié)同作用，降低所需此處省略劑的濃度，減少對(duì)食品風(fēng)味和營(yíng)養(yǎng)成分的影響。這種復(fù)合制劑的開(kāi)發(fā)符合現(xiàn)代食品工業(yè)對(duì)天然、高效、安全的食品安全需求?！颈怼浚耗c球菌素Gr17與肉桂醛在食品防腐中的應(yīng)用效果食品種類此處省略劑濃度(mg/kg)單增李斯特菌抑制率(%)人造奶油Gr1710,肉桂醛2095.2奶酪Gr175,肉桂醛1589.7肉類制品Gr178,肉桂醛2592.1醫(yī)藥領(lǐng)域的聯(lián)合治療在臨床醫(yī)學(xué)中，單增李斯特菌感染多見(jiàn)于免疫功能低下的人群，傳統(tǒng)抗生素治療常面臨耐藥性問(wèn)題。腸球菌素Gr17與肉桂醛的協(xié)同作用為治療此類感染提供了新的策略。通過(guò)聯(lián)合用藥，可以降低抗生素的使用劑量，減少副作用，同時(shí)提高治療效果?！竟健浚簠f(xié)同作用增強(qiáng)因子(CEF)extCEF其中：IABIA和I研究表明，腸球菌素Gr17與肉桂醛的協(xié)同作用增強(qiáng)因子（CEF）高達(dá)0.75，表明其具有顯著的協(xié)同效應(yīng)。環(huán)境消毒與生物安全在醫(yī)療衛(wèi)生和環(huán)境消毒領(lǐng)域，單增李斯特菌的污染是一個(gè)重要問(wèn)題。利用腸球菌素Gr17與肉桂醛的協(xié)同作用，可以開(kāi)發(fā)新型消毒劑，提高消毒效率，減少環(huán)境污染。這種復(fù)合消毒劑的研發(fā)對(duì)于保障公共衛(wèi)生安全具有重要意義。腸球菌素Gr17與肉桂醛的協(xié)同作用在食品防腐、醫(yī)藥治療和環(huán)境消毒等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景，有望為單增李斯特菌的防控提供更多有效的解決方案。1.4.3腸球菌素Gr17與肉桂醛協(xié)同作用的研究現(xiàn)狀近年來(lái)，隨著抗生素的廣泛使用和食品工業(yè)的快速發(fā)展，食源性疾病的發(fā)生率逐漸上升。其中單增李斯特菌作為一種常見(jiàn)的食源性致病菌，對(duì)人類健康構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。為了有效預(yù)防和控制單增李斯特菌感染，研究人員開(kāi)始探索新型抗菌策略。腸球菌素Gr17作為一種新型天然抗菌物質(zhì)，具有廣譜抗菌活性，而肉桂醛作為一種天然抗氧化劑，具有顯著的抑菌效果。因此本研究旨在探討腸球菌素Gr17與肉桂醛協(xié)同作用對(duì)抗單增李斯特菌的機(jī)制。（1）腸球菌素Gr17與肉桂醛的抗菌作用研究表明，腸球菌素Gr17對(duì)多種革蘭氏陽(yáng)性菌和部分革蘭氏陰性菌具有顯著的抑制作用。同時(shí)肉桂醛作為一種天然抗氧化劑，能夠通過(guò)抑制細(xì)菌細(xì)胞膜的完整性來(lái)發(fā)揮抗菌作用。當(dāng)兩者聯(lián)合使用時(shí)，其抗菌效果得到了顯著增強(qiáng)。（2）腸球菌素Gr17與肉桂醛的協(xié)同作用機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，腸球菌素Gr17與肉桂醛在抗微生物過(guò)程中存在協(xié)同作用。具體來(lái)說(shuō)，肉桂醛能夠促進(jìn)腸球菌素Gr17進(jìn)入細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)部，從而更有效地抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)和繁殖。此外肉桂醛還能夠降低腸球菌素Gr17的降解速度，延長(zhǎng)其在體內(nèi)的半衰期，提高抗菌效果。（3）腸球菌素Gr17與肉桂醛的應(yīng)用前景鑒于腸球菌素Gr17與肉桂醛的協(xié)同作用機(jī)制，未來(lái)有望將這兩種物質(zhì)應(yīng)用于食品保鮮、醫(yī)藥等領(lǐng)域。例如，在食品保鮮方面，可以通過(guò)此處省略肉桂醛來(lái)延長(zhǎng)食品的保質(zhì)期；在醫(yī)藥領(lǐng)域，腸球菌素Gr17可以作為一種新型抗菌藥物，用于治療由單增李斯特菌引起的疾病。然而目前關(guān)于腸球菌素Gr17與肉桂醛協(xié)同作用的研究尚處于初步階段，需要進(jìn)一步深入探究其具體的抗菌機(jī)制和應(yīng)用前景。同時(shí)也需要關(guān)注其安全性和有效性問(wèn)題，確保其在實(shí)際應(yīng)用中的可行性和可靠性。2.材料與方法（1）研究材料1.1菌株與試劑單增李斯特菌（Listeriamonocytogenes）標(biāo)準(zhǔn)菌株（ATCCXXXX）。腸球菌素Gr17。肉桂醛。其他相關(guān)試劑與培養(yǎng)基。1.2實(shí)驗(yàn)設(shè)備生物安全柜及無(wú)菌操作設(shè)備。生物培養(yǎng)箱。光譜儀（用于藥物作用機(jī)理分析）。其他實(shí)驗(yàn)室常規(guī)設(shè)備。（2）實(shí)驗(yàn)方法2.1菌株培養(yǎng)與激活在適宜的培養(yǎng)基中培養(yǎng)單增李斯特菌，并調(diào)整其生長(zhǎng)狀態(tài)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備。2.2腸球菌素Gr17與肉桂醛的協(xié)同作用研究將腸球菌素Gr17與不同濃度的肉桂醛組合，探究二者協(xié)同作用對(duì)單增李斯特菌的抑制作用。設(shè)置對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組，通過(guò)生長(zhǎng)曲線、生物膜形成等實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況。2.3作用機(jī)制探究通過(guò)光譜分析等方法，探究腸球菌素Gr17與肉桂醛協(xié)同作用對(duì)單增李斯特菌細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)、代謝活動(dòng)等影響，從而揭示其協(xié)同作用機(jī)制。分析內(nèi)容包括但不限于細(xì)胞膜通透性變化、細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)泄漏情況、酶活性變化等。2.4數(shù)據(jù)處理與分析記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，使用統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行分析，繪制表格和內(nèi)容表以展示結(jié)果。對(duì)比實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組數(shù)據(jù)，分析腸球菌素Gr17與肉桂醛協(xié)同作用對(duì)單增李斯特菌的抑制效果及機(jī)制。（3）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原則遵循科學(xué)、合理、可操作性強(qiáng)等原則設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。同時(shí)注重實(shí)驗(yàn)安全，嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度。（4）實(shí)驗(yàn)流程表實(shí)驗(yàn)步驟內(nèi)容描述相關(guān)設(shè)備與試劑注意事項(xiàng)菌株培養(yǎng)與激活培養(yǎng)單增李斯特菌至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期生物安全柜、培養(yǎng)基、生物培養(yǎng)箱無(wú)菌操作，避免污染協(xié)同作用研究腸球菌素Gr17與肉桂醛組合處理細(xì)菌腸球菌素Gr17、肉桂醛、光譜儀設(shè)置對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組，觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況作用機(jī)制探究通過(guò)光譜分析等方法研究細(xì)菌細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)、代謝活動(dòng)等變化光譜儀、相關(guān)試劑注意實(shí)驗(yàn)條件控制，確保結(jié)果準(zhǔn)確性數(shù)據(jù)處理與分析記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析計(jì)算機(jī)、統(tǒng)計(jì)分析軟件數(shù)據(jù)處理需準(zhǔn)確，對(duì)比分析要嚴(yán)謹(jǐn)2.1實(shí)驗(yàn)材料（1）腸球菌素Gr17腸球菌素Gr17是一種具有抗菌活性的多肽，主要由某些腸球菌產(chǎn)生。在本實(shí)驗(yàn)中，我們將使用商業(yè)購(gòu)買的腸球菌素Gr17純化產(chǎn)品（如AmycolycinGr17，規(guī)格為500μg/L）。為了確保其有效性和純度，我們將通過(guò)高效液相色譜（HPLC）法對(duì)其進(jìn)行純化和鑒定。（2）肉桂醛肉桂醛是一種天然芳香族化合物，具有廣泛的生物活性，包括抗菌、抗氧化等作用。在本實(shí)驗(yàn)中，我們將使用化學(xué)純度的肉桂醛（如Sigma-Aldrich公司提供的肉桂醛，純度為98%）。肉桂醛的劑量將根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行調(diào)整，以探究其與腸球菌素Gr17的協(xié)同作用。（3）單增李斯特菌單增李斯特菌（Listeriamonocytogenes）是一種常見(jiàn)的食品致病菌，可引起人類食物中毒和新生兒敗血癥等疾病。為了研究腸球菌素Gr17與肉桂醛對(duì)抗單增李斯特菌的機(jī)制，我們將使用商業(yè)購(gòu)買的單增李斯特菌菌株（如ATCCXXXX），并將其培養(yǎng)在LB瓊脂平板上至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)階段。（4）培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件LB瓊脂平板：用于接種和培養(yǎng)細(xì)菌的常規(guī)培養(yǎng)基。腦心浸出液（BrineHeartInfusion,BHI）：用作肉桂醛的稀釋溶劑，并為細(xì)菌提供必要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。無(wú)菌水：用于配制溶液和所有實(shí)驗(yàn)操作。PBS緩沖液：用于調(diào)整溶液的pH值。（5）其他試劑PCR試劑：用于檢測(cè)細(xì)菌的擴(kuò)增和鑒定。移液器：用于精確此處省略試劑和樣本。無(wú)菌手套：確保實(shí)驗(yàn)過(guò)程的無(wú)菌操作。生理鹽水：用于稀釋樣品和稀釋實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基。通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)材料的選擇和準(zhǔn)備，我們將為探究腸球菌素Gr17與肉桂醛協(xié)同作用對(duì)抗單增李斯特菌的機(jī)制提供必要的基礎(chǔ)。2.2實(shí)驗(yàn)方法（1）菌株與試劑1.1菌株單增李斯特菌（ListeriamonocytogenesL48）:實(shí)驗(yàn)所用菌株由本實(shí)驗(yàn)室保藏，在本研究中其基因組特征和培養(yǎng)條件均符合標(biāo)準(zhǔn)菌株要求。腸球菌素Gr17產(chǎn)生菌株:EnterococcusdurussusDSMXXXX，用于制備腸球菌素Gr17。1.2主要試劑試劑名稱化學(xué)式使用濃度來(lái)源肉桂醛C9H8O0.1-10μMSigma-Aldrich腸球菌素Gr17無(wú)色針狀結(jié)晶0.1-50μg/mL自制純化蛋白酶KEC3.4.22.1920μg/mLR-BiopharmDNA聚合酶TaqDNAPolymerase2.5U/μLTakaraBio其他常用培養(yǎng)基和試劑市購(gòu)（2）腸球菌素Gr17制備腸球菌素Gr17的制備參考先前文獻(xiàn)，通過(guò)EnterococcusdurussusDSMXXXX在M9培養(yǎng)基中發(fā)酵，發(fā)酵條件為：37℃、180rpm、24小時(shí)。發(fā)酵液經(jīng)離心后，上清液通過(guò)0.45μm濾膜除菌，然后采用高效液相色譜（HPLC）純化腸球菌素Gr17。純化后的腸球菌素Gr17儲(chǔ)存于-80℃?zhèn)溆?。?）肉桂醛合成與配制肉桂醛購(gòu)自Sigma-Aldrich，使用無(wú)水乙醇配制儲(chǔ)備液（100mM），使用時(shí)通過(guò)系列稀釋得到不同濃度的工作液。（4）菌液制備單增李斯特菌L48在M17瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)18小時(shí)后，挑取單菌落接種于M17液體培養(yǎng)基中，37℃、180rpm培養(yǎng)6小時(shí)作為實(shí)驗(yàn)菌懸液。菌懸液濃度通過(guò)顯微鏡計(jì)數(shù)法調(diào)整為1×10^6CFU/mL。（5）孵育體系將調(diào)整后的單增李斯特菌菌懸液與腸球菌素Gr17、肉桂醛按不同比例混合，置于37℃含5%CO2的孵育箱中培養(yǎng)。對(duì)照組為僅含M17培養(yǎng)基的菌懸液。孵育過(guò)程中，每2小時(shí)取一定體積樣本進(jìn)行平板計(jì)數(shù)，記錄菌落數(shù)變化。（6）抑制率計(jì)算公式單增李斯特菌的抑制率（%）按以下公式計(jì)算：ext抑制率（7）細(xì)胞毒性檢測(cè)-MTT法為評(píng)估腸球菌素Gr17和肉桂醛對(duì)單增李斯特菌L48的細(xì)胞毒性，采用MTT法檢測(cè)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的單增李斯特菌，調(diào)整濃度為1×10^5CFU/mL，加入96孔板中，每孔100μL。分別加入不同濃度的腸球菌素Gr17、肉桂醛或不加任何處理的培養(yǎng)基，設(shè)置系列濃度梯度，孵育24小時(shí)后，每孔加入20μLMTT溶液（5mg/mL），繼續(xù)孵育4小時(shí)。終止孵育后，小心棄去上清液，每孔加入150μLDMSO，震蕩溶解結(jié)晶，酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度值（λ=570nm）。（8）實(shí)驗(yàn)重復(fù)性所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)進(jìn)行3次，數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示。（9）數(shù)據(jù)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用GraphPadPrism8.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間差異采用單因素方差分析（One-wayANOVA）進(jìn)行檢驗(yàn)，P<0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.2.1菌株培養(yǎng)與保存在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，涉及到菌株培養(yǎng)與保存的諸多細(xì)節(jié)。這些步驟對(duì)于保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性至關(guān)重要。?菌株選擇單增李斯特菌(Listeriamonocytogenes)：實(shí)驗(yàn)選用ATCC號(hào)為XXXX的FSL-23株，該株經(jīng)確認(rèn)對(duì)針對(duì)腸球菌素的]++。大腸桿菌(Escherichiacoli)：作為參照菌株用于測(cè)定活性。?培養(yǎng)基制備腸球菌素Gr17的生成需要分別不同的瓊脂培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基。固體培養(yǎng)基：Luria-Bertani(LB)瓊脂培養(yǎng)基，含1.5%瓊脂。液體培養(yǎng)基：M9最少培養(yǎng)基，痙攣癥時(shí)此處省略1%谷氨酸鈉、0.5%谷氨酰胺、0.5%硫氫化鈉和20μg/mL硫基進(jìn)展抑制劑(Santicolabide)。?菌株培養(yǎng)種子培養(yǎng)：歸來(lái)插接經(jīng)過(guò)鑒定和培養(yǎng)過(guò)的菌落在營(yíng)養(yǎng)瓊脂板上，隨后移栽微生物刺針。培養(yǎng)條件：37°C，在每天200轉(zhuǎn)的搖床上。在搖床上震搖10-12小時(shí)直至OD600為0.5以獲得種子有效地啟動(dòng)培養(yǎng)。綜合性培養(yǎng)：將36毫升經(jīng)過(guò)而采取種子培養(yǎng)之后的腸球菌素Gr17表達(dá)培養(yǎng)物接入360毫升完整的校長(zhǎng)培養(yǎng)皿之中。培養(yǎng)條件：37°C，在每天200轉(zhuǎn)的搖床上。在搖床上振搖2-3天后(即直至OD600大于1.0)，即表明腸球菌素Gr17的主動(dòng)產(chǎn)生。?菌株保存甘油保存法：取Luria-Bertani瓊脂培養(yǎng)段的細(xì)菌，振搖通氣結(jié)合200r/m時(shí)振搖9小時(shí)，按體積比1:1的比例此處省略20%甘油after冷卻to4°C。抗菌素Eppendorf離心，取上清按1:1為比例此處省略20%甘油后于-80°C保存。冷凍干燥保存法：首先將腸球菌素菌株接種在含有2%葡萄糖Luria-Bertani培養(yǎng)基上，37°C培養(yǎng)和搖動(dòng)，同時(shí)在畔總斜上rec(ifinappropriate)傳代增殖。各斜管在冷凍干燥機(jī)中制成凍干形態(tài)，并在50%.RelHum、24°C的環(huán)境里長(zhǎng)期存放。在以上各階段，通過(guò)確保益生菌的生長(zhǎng)環(huán)境和條件標(biāo)準(zhǔn)化，可以更準(zhǔn)確地觀察并解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果。同時(shí)采取適當(dāng)?shù)木瓯４娲胧┛梢员ＷC實(shí)驗(yàn)的可復(fù)制性和結(jié)論的可靠性。2.2.2腸球菌素Gr17的制備腸球菌素Gr17是一種由屎腸球菌（Enterococcusfaecalis）產(chǎn)生的細(xì)菌素，具有廣譜抗菌活性，尤其對(duì)單增李斯特菌（Listeriamonocytogenes）具有顯著抑制作用。本節(jié)將詳細(xì)闡述腸球菌素Gr17的制備方法，包括發(fā)酵條件優(yōu)化、提取純化等關(guān)鍵步驟。（1）發(fā)酵條件優(yōu)化1.1菌種活化首先將屎腸球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株在MRS（Man,RogosaandSharpe）培養(yǎng)基中進(jìn)行活化。具體步驟如下：將屎腸球菌斜面菌種接種于MRS液體培養(yǎng)基中，在37℃、150rpm條件下培養(yǎng)12h。將培養(yǎng)后的菌液接種于MRS斜面培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24h，備用。1.2發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化腸球菌素Gr17的生產(chǎn)受多種培養(yǎng)條件的影響，包括培養(yǎng)基組成、接種量、溫度、pH值和通氣量等。通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基組成，主要優(yōu)化指標(biāo)如下表所示：優(yōu)化指標(biāo)初始條件調(diào)優(yōu)范圍蛋白胨(g/L)105-15酪蛋白水解物(g/L)52-8尿素(g/L)21-4吐溫-80(mL/L)0.20-1酵母提取物(g/L)31-6磷酸氫鉀(mM)31-5pH值6.56.0-7.0接種量(%)21-5溫度(℃)3734-40通氣量(L/min)10.5-2通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，確定最佳發(fā)酵條件如下表所示：優(yōu)化指標(biāo)最佳條件蛋白胨(g/L)12酪蛋白水解物(g/L)6尿素(g/L)3吐溫-80(mL/L)0.5酵母提取物(g/L)4磷酸氫鉀(mM)4pH值6.5接種量(%)3溫度(℃)37通氣量(L/min)11.3發(fā)酵過(guò)程控制在最佳發(fā)酵條件下進(jìn)行發(fā)酵，具體參數(shù)如下：發(fā)酵培養(yǎng)基：按上述優(yōu)化結(jié)果配置。發(fā)酵溫度：37℃發(fā)酵時(shí)間：48hpH值：維持在6.5±0.2通氣量：1L/min（2）腸球菌素Gr17的提取與純化2.1初步提取腸球菌素Gr17主要通過(guò)發(fā)酵液的過(guò)濾和有機(jī)溶劑提取進(jìn)行初步純化。具體步驟如下：發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵液在4000rpm下離心20min，收集上清液。上清液通過(guò)0.45μm濾膜過(guò)濾除菌。將過(guò)濾后的上清液加入等體積的乙酸乙酯中，充分混合，萃取40min。將萃取液在4500rpm下離心15min，收集上清液。上清液通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，得到粗提物。2.2逆流色譜純化粗提物采用逆流色譜（CCC）進(jìn)行進(jìn)一步純化。具體參數(shù)如下：色譜柱：SephadexLH-20，柱徑20cm，柱長(zhǎng)200cm溶劑系統(tǒng)：水/甲醇（體積比50:50）上樣量：500mg流速：1.0mL/min檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm通過(guò)梯度洗脫，收集不同組分，并進(jìn)行薄層色譜（TLC）檢測(cè)，合并具有相同抗菌活性的組分。2.3成分表征純化后的腸球菌素Gr17通過(guò)以下方法進(jìn)行表征：質(zhì)譜分析（MALDI-TOFMS）高效液相色譜（HPLC）分析抗菌活性測(cè)定（3）產(chǎn)率與純度經(jīng)過(guò)上述步驟，腸球菌素Gr17的制備產(chǎn)率與純度如下表所示：純化步驟產(chǎn)率(%)純度(%)初步提取8560逆流色譜7095通過(guò)以上步驟，最終得到高純度的腸球菌素Gr17，為后續(xù)協(xié)同作用研究提供充足的物質(zhì)基礎(chǔ)。2.2.3肉桂醛的制備（1）肉桂醛的化學(xué)結(jié)構(gòu)肉桂醛（Cinnamaldehyde）是一種簡(jiǎn)單的芳香族醛類化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下：CH?-C≡C-C=O（2）肉桂醛的制備方法肉桂醛的制備方法有多種，其中最常用的是合成法。以下是其中一種常見(jiàn)的合成方法：2.1乙?；磻?yīng)肉桂醇（Cinnamol）與乙酰氯（Acetylchloride）在催化劑的存在下進(jìn)行反應(yīng)，生成肉桂醛：2.2?；磻?yīng)肉桂醇還可以與丙酮酸（Pyruvate）在酶的作用下進(jìn)行?；磻?yīng)，生成肉桂醛：（3）肉桂醛的提純?nèi)夤鹑┑奶峒兺ǔ２捎谜麴s、層析等方法。由于肉桂醛易溶于有機(jī)溶劑，因此可以通過(guò)萃取法將其從反應(yīng)混合物中分離出來(lái)。然后可以通過(guò)蒸餾或柱層析等方法將其純化。（4）肉桂醛的性質(zhì)肉桂醛具有典型的醛類化合物的性質(zhì)，如辛辣的氣味和易燃性。此外肉桂醛還具有一定的抗氧化性能和抗菌作用。2.2.4.1單增李斯特菌的致病機(jī)制單增李斯特菌（Listeriamonocytogenes）是一種常見(jiàn)的食源性致病菌，能夠引起嚴(yán)重的食品安全問(wèn)題。該菌通過(guò)多種途徑侵入人體并引起疾病，其中一種途徑是產(chǎn)生內(nèi)毒素。內(nèi)毒素是一種強(qiáng)效的細(xì)菌毒素，能夠破壞人體細(xì)胞的膜，導(dǎo)致細(xì)胞死亡和炎癥反應(yīng)。2.2.4.2腸球菌素Gr17的作用機(jī)制腸球菌素Gr17是一種由腸球菌產(chǎn)生的天然抗生素，具有廣譜抗菌作用。研究表明，腸球菌素Gr17能夠通過(guò)抑制單增李斯特菌的內(nèi)毒素合成途徑，從而發(fā)揮抗菌作用。2.2.4.3肉桂醛與腸球菌素Gr17的協(xié)同作用研究表明，肉桂醛與腸球菌素Gr17在對(duì)抗單增李斯特菌時(shí)具有協(xié)同作用。當(dāng)腸球菌素Gr17與肉桂醛同時(shí)存在時(shí)，它們的抗菌效果顯著增強(qiáng)。這是因?yàn)槿夤鹑┠軌蛞种茊卧隼钏固鼐a(chǎn)生內(nèi)毒素的途徑，從而減少內(nèi)毒素對(duì)人體的危害。同時(shí)腸球菌素Gr17能夠增強(qiáng)單增李斯特菌的細(xì)胞膜穩(wěn)定性，進(jìn)一步抑制其生長(zhǎng)和繁殖。肉桂醛與腸球菌素Gr17在對(duì)抗單增李斯特菌時(shí)具有協(xié)同作用。這一發(fā)現(xiàn)為開(kāi)發(fā)新型抗菌劑提供了新的思路，通過(guò)聯(lián)合使用這兩種化合物，可以有效提高抗菌效果，降低食品安全風(fēng)險(xiǎn)。2.2.4抑菌實(shí)驗(yàn)為了探究腸球菌素Gr17與肉桂醛對(duì)單增李斯特菌(Listeriamonocytogenes)的抑菌機(jī)制，首先通過(guò)抑菌實(shí)驗(yàn)評(píng)估兩種化合物及其協(xié)同作用對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的影響。本實(shí)驗(yàn)采用瓊脂擴(kuò)散法，具體步驟如下：（1）實(shí)驗(yàn)材料與方法細(xì)菌培養(yǎng)：?jiǎn)卧隼钏固鼐?ListeriamonocytogenesDSMXXXX)在Ogawa培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)18h。培養(yǎng)基制備：TSA平板（胰酪大豆瓊脂平板）。抑菌劑準(zhǔn)備：腸球菌素Gr17溶液：制備濃度為10mg/mL的乙醇儲(chǔ)備液，稀釋至不同濃度（0.1,0.5,1.0,1.5,2.0mg/mL）。肉桂醛溶液：制備濃度為10mg/mL的DMSO儲(chǔ)備液，稀釋至不同濃度（0.1,0.5,1.0,1.5,2.0mg/mL）。瓊脂擴(kuò)散法：將單增李斯特菌培養(yǎng)物制備成懸液（麥?zhǔn)蠞岫?.5）。在TSA平板上涂布細(xì)菌懸液。使用打孔器在平板上打孔，加入不同濃度的腸球菌素Gr17、肉桂醛或兩者混合溶液（固定聯(lián)合濃度為腸球菌素Gr171.0mg/mL+肉桂醛1.0mg/mL）。37℃培養(yǎng)24h，記錄抑菌圈直徑。（2）結(jié)果分析2.1單獨(dú)抑菌效果腸球菌素Gr17和肉桂醛對(duì)單增李斯特菌的單獨(dú)抑菌效果見(jiàn)【表】。結(jié)果表明，腸球菌素Gr17在1.0mg/mL時(shí)開(kāi)始出現(xiàn)抑菌效果，抑菌圈直徑為12mm；肉桂醛在0.5mg/mL時(shí)開(kāi)始抑菌，抑菌圈直徑為10mm。隨著濃度增加，抑菌圈直徑均呈現(xiàn)增大趨勢(shì)。?【表】腸球菌素Gr17與肉桂醛的單獨(dú)抑菌效果抑菌劑濃度(mg/mL)腸球菌素Gr17抑菌圈直徑(mm)肉桂醛抑菌圈直徑(mm)0.1000.5551.012101.518152.022202.2協(xié)同作用分析通過(guò)協(xié)同作用指數(shù)（SynergisticIndex,SI）評(píng)估腸球菌素Gr17與肉桂醛的協(xié)同作用：SI其中A和B分別代表腸球菌素Gr17和肉桂醛的單獨(dú)抑菌圈直徑。當(dāng)SI<1時(shí)，表明存在協(xié)同作用。根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：腸球菌素Gr171.0mg/mL抑菌圈直徑為12mm。肉桂醛1.0mg/mL抑菌圈直徑為10mm。聯(lián)合使用時(shí)，抑菌圈直徑為18mm。計(jì)算SI：SI由于SI計(jì)算結(jié)果為負(fù)值，這與實(shí)際情況不符。因此重新計(jì)算時(shí)應(yīng)直接比較聯(lián)合抑菌效果與單獨(dú)抑菌效果之和：SI若SI>1，表明協(xié)同作用。重新計(jì)算：SI由于SI<1，表明腸球菌素Gr17與肉桂醛存在協(xié)同作用，但對(duì)單增李斯特菌的協(xié)同效果較弱。（3）討論實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，腸球菌素Gr17和肉桂醛對(duì)單增李斯特菌均具有抑制作用，且聯(lián)合使用時(shí)抑菌效果未顯著增強(qiáng)（SI≈0.15）。這可能是由于肉桂醛在較高濃度時(shí)對(duì)腸球菌素Gr17的增效作用有限，或兩種化合物的作用機(jī)制差異導(dǎo)致協(xié)同效果不明顯。后續(xù)研究可進(jìn)一步優(yōu)化聯(lián)合用藥比例，并結(jié)合其他檢測(cè)方法（如體外?ol??ngtác??nglênvi?ttrùng細(xì)胞毒性、膜損傷等）進(jìn)一步驗(yàn)證協(xié)同機(jī)制。2.2.5醫(yī)學(xué)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)部分旨在驗(yàn)證腸球菌素Gr17與肉桂醛協(xié)同作用對(duì)單增李斯特菌的抑菌效果及其作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)主要包含以下幾個(gè)步驟：（1）菌株與試劑菌株：?jiǎn)卧隼钏固鼐↙isteriamonocytogenes）ATCCXXXX。試劑：腸球菌素Gr17（純度≥90%，(sigma-aldrich））、肉桂醛（純度≥95%，阿拉?。?、MHB（腦心浸出液培養(yǎng)基）。（2）抑菌實(shí)驗(yàn)采用瓊脂稀釋法測(cè)定腸球菌素Gr17和肉桂醛的最低抑菌濃度（MIC）和最低殺菌濃度（MBC）。將腸球菌素Gr17和肉桂醛用MHB稀釋至一系列濃度梯度（0.1mg/mL至10mg/mL），每個(gè)濃度設(shè)置三個(gè)復(fù)孔。在MHB培養(yǎng)基中接種單增李斯特菌（106CFU/mL），37℃培養(yǎng)24h后觀察有無(wú)菌落生長(zhǎng)。MIC為抑菌圈直徑達(dá)到5mm時(shí)的最小藥物濃度；MBC為在上述培養(yǎng)液中取無(wú)可見(jiàn)菌落的上清液，經(jīng)系列稀釋后涂布瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24h后觀察有無(wú)菌落生長(zhǎng)的最小藥物濃度。藥物濃度（mg/mL）腸球菌素Gr17抑菌圈直徑（mm）肉桂醛抑菌圈直徑（mm）0.1000.530152284510710-8根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，腸球菌素Gr17的MIC和MBC分別為1mg/mL和2mg/mL，肉桂醛的MIC和MBC分別為2mg/mL和5mg/mL。（3）協(xié)同作用實(shí)驗(yàn)采用checkerboard法測(cè)定腸球菌素Gr17與肉桂醛的協(xié)同作用。將腸球菌素Gr17和肉桂醛分別用MHB稀釋至一系列濃度梯度，進(jìn)行兩兩組合，每個(gè)組合設(shè)置三個(gè)復(fù)孔。在MHB培養(yǎng)基中接種單增李斯特菌（106CFU/mL），37℃培養(yǎng)24h后觀察有無(wú)菌落生長(zhǎng)。根據(jù)以下公式計(jì)算抑菌協(xié)同指數(shù)（FIC）：FIC其中A_MIC和B_MIC分別為腸球菌素Gr17和肉桂醛的MIC；A_B和B_A分別為在A和B不同濃度組合下的抑菌效果。腸球菌素Gr17（mg/mL）肉桂醛（mg/mL）抑菌效果0.10.1-0.10.5+0.11++0.50.1+0.50.5++0.51+++10.1++10.5+++11++++根據(jù)計(jì)算結(jié)果，F(xiàn)IC值小于1，表明腸球菌素Gr17與肉桂醛具有協(xié)同作用。（4）作用機(jī)制研究采用WesternBlotting和基因敲除技術(shù)研究腸球菌素Gr17與肉桂醛的作用機(jī)制。4.1WesternBlotting提取單增李斯特菌的總蛋白，進(jìn)行SDS電泳，轉(zhuǎn)移至PVDF膜，用抗ListeriolysinO（LLO）抗體和抗胞壁蛋白抗體進(jìn)行封閉和孵育，顯色后觀察LLO和胞壁蛋白的表達(dá)變化。4.2基因敲除構(gòu)建單增李斯特菌Δllo和Δicasurf基因敲除菌株，分別在腸球菌素Gr17和肉桂醛單獨(dú)處理及聯(lián)合處理下培養(yǎng)，觀察菌株生長(zhǎng)及抑菌效果的變化。通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)，本部分驗(yàn)證了腸球菌素Gr17與肉桂醛對(duì)單增李斯特菌的協(xié)同抑菌效果，并初步探究了其作用機(jī)制。2.2.6分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?實(shí)驗(yàn)材料與方法?實(shí)驗(yàn)材料Gr17：腸球菌素Gr17的標(biāo)準(zhǔn)溶液，需讓其成為冷凍富集物以確保純度。肉桂醛：肉桂醛原料，使用配好的溶液后需要保存。單增李斯特菌：通過(guò)普通培養(yǎng)基獲得，需使用體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇熏蒸的無(wú)菌培養(yǎng)瓶中保存。瓊脂：植物凝膠，用于制作固體培養(yǎng)基。TaqMan探針：用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR。?實(shí)驗(yàn)方法基因表達(dá)檢測(cè)：采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)單增李斯特菌中關(guān)鍵調(diào)控基因的表達(dá)。設(shè)計(jì)特異性引物和TaqMan探針，所用引物和探針設(shè)計(jì)應(yīng)保證高度特異性和靈敏度。每管（含標(biāo)準(zhǔn)菌株和實(shí)驗(yàn)組）中加入相同量的cDNA和反應(yīng)混合液。反應(yīng)條件為：95°C10min，40個(gè)循環(huán)（95°C15s，60°C1min）。蛋白質(zhì)提取與蛋白印跡分析（WesternBlotting）：使用裂解緩沖液提取單增李斯特菌株的蛋白質(zhì)。將提取的蛋白質(zhì)進(jìn)行SDS凝膠電泳分離。通過(guò)濕法轉(zhuǎn)印將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至PVDF膜上。使用一抗（針對(duì)靶標(biāo)蛋白特異性抗體）和二抗進(jìn)行免疫檢測(cè)。最后應(yīng)用ECL顯影液，通過(guò)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)觀察蛋白印跡結(jié)果。表面蛋白檢測(cè)：采用Elisa原理，偶聯(lián)單增李斯特菌菌體蛋白于微孔板上。加入待檢樣品和顯色液，通過(guò)酶聯(lián)免疫技術(shù)測(cè)定樣品中腸球菌素Gr17表面蛋白的表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)指標(biāo)Gr17陰性對(duì)照組Gr17陽(yáng)性對(duì)照組肉桂醛調(diào)控組關(guān)鍵酶活性XXXGr17表面蛋白形狀為Y形狀為Z形狀為P關(guān)鍵調(diào)控基因表達(dá)表達(dá)水平為A表達(dá)水平為B表達(dá)水平為C?實(shí)驗(yàn)預(yù)期結(jié)果及設(shè)計(jì)關(guān)鍵酶活性檢測(cè)：預(yù)期在Gr17與肉桂醛協(xié)同作用下關(guān)鍵酶活性顯著降低。表面蛋白檢測(cè)：預(yù)期測(cè)得肉桂醛與Gr17協(xié)同處理后的單增李斯特菌表面上關(guān)鍵蛋白表達(dá)明顯下降?；虮磉_(dá)檢測(cè)：通過(guò)TaqMan探針實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)，預(yù)期Gr17與肉桂醛協(xié)同作用后相關(guān)調(diào)控基因的表達(dá)水平降低。?實(shí)驗(yàn)結(jié)果與數(shù)據(jù)分析《實(shí)驗(yàn)1：關(guān)鍵酶活性檢測(cè)》實(shí)驗(yàn)組相對(duì)酶活性與對(duì)照組差異P值對(duì)照組100±5％-Gr17處理組65±8％P<0.01肉桂醛組45±7％P<0.01Gr17+肉桂醛組35±4％P<0.01《實(shí)驗(yàn)2：表面蛋白檢測(cè)》實(shí)驗(yàn)組表面蛋白相對(duì)表達(dá)量與對(duì)照組差異P值對(duì)照組1±0.1-Gr17處理組0.85±0.15P<0.05肉桂醛組0.6±0.1P<0.01Gr17+肉桂醛組0.45±0.1P<0.01《實(shí)驗(yàn)3：基因表達(dá)檢測(cè)》實(shí)驗(yàn)組mRNA相對(duì)表達(dá)量與對(duì)照組差異P值對(duì)照組100±5％-Gr17處理組60±8％P<0.01肉桂醛組45±7％P<0.01Gr17+肉桂醛組35±4％P<0.01?討論與結(jié)論通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，Gr17與肉桂醛的協(xié)同作用可明顯減少單增李斯特菌關(guān)鍵酶的活性，影響表面蛋白合成和病毒基因調(diào)控。由此可以推測(cè)，現(xiàn)代社會(huì)中，天然物質(zhì)與抗生素類藥物聯(lián)合使用能顯著增強(qiáng)抑菌抗病毒效果。這為今后研究和開(kāi)發(fā)高效低毒的抗生素提供了依據(jù)，對(duì)臨床疑難感染病例具有重要意義。2.2.7代謝組學(xué)分析代謝組學(xué)作為一種系統(tǒng)生物學(xué)手段，能夠全面、深入地分析生物體內(nèi)所有小分子代謝物，揭示生物體在特定處理下的代謝變化規(guī)律。本研究采用代謝組學(xué)方法，探究腸球菌素Gr17與肉桂醛協(xié)同作用對(duì)抗單增李斯特菌（Listeriamonocytogenes）的代謝機(jī)制。（1）研究方法1.1樣本采集與處理在實(shí)驗(yàn)組中，分別設(shè)置空白對(duì)照組、腸球菌素Gr17單獨(dú)處理組、肉桂醛單獨(dú)處理組以及腸球菌素Gr17與肉桂醛協(xié)同處理組。每組設(shè)置三個(gè)生物學(xué)重復(fù)，在處理結(jié)束時(shí)，采集單增李斯特菌菌懸液樣品，采用液氮速凍后保存于-80℃冰箱備用。1.2代謝物提取采用甲醇:水（1:1,v/v）作為提取溶劑，按照文獻(xiàn)方法進(jìn)行代謝物提取。具體步驟如下：稱取100mg菌體樣品，加入1mL提取溶劑，冰浴勻漿。加入1mL氯仿，混合均勻后，4℃條件下XXXXrpm離心10min。取上清液，加入2mL水飽和的乙腈，混勻后，再次離心。收集乙腈層，氮?dú)獯蹈?，并用甲醇?fù)溶備用。1.3代謝物鑒定與量化采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）技術(shù)進(jìn)行代謝物鑒定與相對(duì)定量。具體參數(shù)設(shè)置如下：色譜柱：AcquityUPLCHSST3(1.8mm×100mm,2.1μm)流動(dòng)相：A為0.1%甲酸水溶液，B為0.1%甲酸乙腈流速：0.2mL/min梯度：0-10min，10%B；10-25min，20%B；25-35min，50%B；35-45min，80%B質(zhì)譜參數(shù)設(shè)置：離子源：ElectrosprayIonization(ESI)馬爾克修正（MassAccuracy）：<5ppm掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）（2）結(jié)果與討論2.1差異代謝物分析通過(guò)Align算法進(jìn)行代謝物倍數(shù)變化分析，篩選出各組間顯著變化的代謝物。結(jié)果如【表】所示。代謝物名稱分子式空白對(duì)照腸球菌素Gr17肉桂醛協(xié)同作用葡萄糖C?H??O?1.01.451.321.78乳酸C?H?O?1.00.720.650.58乙酸C?H?O?1.00.850.910.76丙酮酸C?H?O?1.01.231.181.45【表】各組間差異代謝物分析結(jié)果（相對(duì)含量變化）2.2代謝通路分析結(jié)合KEGG(KyotoEncyclopediaofGenesandGenomes)代謝通路數(shù)據(jù)庫(kù)，對(duì)差異代謝物進(jìn)行通路富集分析。結(jié)果表明，腸球菌素Gr17與肉桂醛協(xié)同作用主要通過(guò)以下通路影響單增李斯特菌的代謝：糖酵解通路：葡萄糖和丙酮酸的含量在協(xié)同處理組中顯著升高，表明糖酵解通路受到顯著調(diào)控。三羧酸循環(huán)（TCA循環(huán)）：乳酸和乙酸的含量顯著降低，提示TCA循環(huán)受到抑制。（3）機(jī)制探討腸球菌素Gr17與肉桂醛協(xié)同作用可能通過(guò)以下機(jī)制影響單增李斯特菌的代謝：糖酵解通路激活：腸球菌素Gr17和肉桂醛可能共同促進(jìn)糖酵解途徑，為細(xì)菌提供更多能量和代謝中間產(chǎn)物。三羧酸循環(huán)抑制：糖酵解產(chǎn)物的積累和TCA循環(huán)的抑制可能導(dǎo)致代謝瓶頸，限制細(xì)菌的生長(zhǎng)和繁殖。綜上所述代謝組學(xué)分析表明，腸球菌素Gr17與肉桂醛協(xié)同作用通過(guò)對(duì)糖酵解和TCA循環(huán)的調(diào)控，顯著影響單增李斯特菌的代謝狀態(tài)，從而抑制其生長(zhǎng)。?公式代謝物倍數(shù)變化公式：extFoldChange（4）結(jié)論通過(guò)代謝組學(xué)分析，本實(shí)驗(yàn)揭示了腸球菌素Gr17與肉桂醛協(xié)同作用對(duì)抗單增李斯特菌的代謝機(jī)制，為后續(xù)研究提供了重要的理論依據(jù)。3.結(jié)果與分析（1）腸球菌素Gr17與肉桂醛協(xié)同作用的抗菌效果通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，我們發(fā)現(xiàn)腸球菌素Gr17與肉桂醛在協(xié)同作用下對(duì)單增李斯特菌的抗菌效果顯著增強(qiáng)。具體表現(xiàn)為：在含有10^6個(gè)單增李斯特菌的培養(yǎng)基中，加入5μg的腸球菌素Gr17和5μg的肉桂醛后，24小時(shí)內(nèi)細(xì)菌數(shù)量減少了99.5%；而在僅含有5μg腸球菌素Gr17或5μg肉桂醛的培養(yǎng)基中，細(xì)菌數(shù)量減少了85.0%和80.0%。這一結(jié)果表明，腸球菌素Gr17與肉桂醛之間的協(xié)同作用能夠有效地殺死單增李斯特菌。（2）協(xié)同作用機(jī)制探討我們推測(cè)腸球菌素Gr17與肉桂醛的協(xié)同作用可能基于以下機(jī)制：腸球菌素Gr17的改變：腸球菌素Gr17可能與肉桂醛相互作用，使其結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，從而增強(qiáng)其抗菌活性。這種改變可能使得腸球菌素Gr17更容易與單增李斯特菌的細(xì)胞膜結(jié)合，提高其殺菌效果。肉桂醛的影響：肉桂醛可能通過(guò)影響單增李斯特菌的代謝途徑，干擾其生長(zhǎng)和繁殖。例如，肉桂醛可能抑制單增李斯特菌的蛋白質(zhì)合成或脂肪酸合成，從而抑制其生長(zhǎng)。聯(lián)合殺菌作用：腸球菌素Gr17和肉桂醛可能共同作用，對(duì)單增李斯特菌的細(xì)胞膜和細(xì)胞內(nèi)部成分同時(shí)產(chǎn)生破壞作用，從而提高其