藥企微生物基礎(chǔ)知識培訓(xùn)考核試卷及答案一、單項選擇題（每題2分，共30分）1.以下微生物中，屬于原核生物的是：A.酵母菌B.霉菌C.金黃色葡萄球菌D.流感病毒2.革蘭氏染色法中，革蘭氏陽性菌最終呈現(xiàn)的顏色是：A.紅色B.紫色C.藍色D.無色3.濕熱滅菌的常用條件是：A.105℃，30分鐘B.121℃，15分鐘C.160℃，2小時D.254nm紫外線照射30分鐘4.非無菌藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)中，口服固體制劑需氧菌總數(shù)不得超過：A.10^2cfu/gB.10^3cfu/gC.10^4cfu/gD.10^5cfu/g5.以下培養(yǎng)基中，屬于選擇性培養(yǎng)基的是：A.營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基B.麥康凱瓊脂培養(yǎng)基C.沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基D.胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基6.微生物實驗室中，超凈工作臺的主要作用是：A.提供無菌操作環(huán)境B.控制溫度和濕度C.殺滅空氣中的微生物D.監(jiān)測浮游菌數(shù)量7.對滅菌效果進行驗證時，生物指示劑通常選擇：A.大腸桿菌B.枯草芽孢桿菌C.白色念珠菌D.銅綠假單胞菌8.潔凈區(qū)環(huán)境監(jiān)測中，沉降菌的采樣時間一般為：A.5分鐘B.30分鐘C.60分鐘D.120分鐘9.以下微生物中，能形成芽胞的是：A.肺炎鏈球菌B.破傷風(fēng)梭菌C.白色葡萄球菌D.白色念珠菌10.微生物限度檢測時，供試品稀釋液的制備需使用：A.純化水B.注射用水C.0.9%無菌氯化鈉溶液D.磷酸鹽緩沖液（pH7.2）11.GMP規(guī)定，無菌藥品生產(chǎn)的B級潔凈區(qū)，浮游菌的最大允許數(shù)為：A.5cfu/m3B.10cfu/m3C.50cfu/m3D.100cfu/m312.以下滅菌方法中，屬于化學(xué)滅菌的是：A.干熱滅菌B.環(huán)氧乙烷滅菌C.輻射滅菌D.過濾滅菌13.霉菌的繁殖方式主要是：A.二分裂B.芽殖C.產(chǎn)生孢子D.復(fù)制14.微生物檢測中，用于檢測控制菌（如沙門菌）的培養(yǎng)基是：A.膽鹽乳糖培養(yǎng)基B.營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基C.沙氏液體培養(yǎng)基D.胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基15.潔凈區(qū)表面微生物監(jiān)測常用的方法是：A.沉降法B.浮游菌采樣器法C.接觸碟法D.過濾法二、填空題（每空1分，共20分）1.微生物按細胞結(jié)構(gòu)可分為______、______和非細胞型微生物三大類。2.細菌的基本形態(tài)包括球菌、______和______。3.濕熱滅菌的原理是通過______使微生物的蛋白質(zhì)變性凝固，從而達到滅菌效果。4.培養(yǎng)基按物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、______和______。5.微生物限度檢測中，需氧菌總數(shù)的培養(yǎng)條件通常為______℃培養(yǎng)______天。6.潔凈區(qū)的空氣潔凈度等級分為A級、B級、C級和______級，其中A級區(qū)為______環(huán)境。7.控制菌檢測中，大腸埃希菌的特征反應(yīng)包括______試驗陽性和______試驗陽性。8.實驗室常用的消毒方法包括______消毒（如75%乙醇）、______消毒（如紫外線）和熱力消毒。9.非無菌藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)中，含動物組織（包括提取物）的口服制劑不得檢出______和______。10.微生物實驗室的“三區(qū)劃分”通常指______區(qū)、______區(qū)和陽性菌操作區(qū)。三、判斷題（每題1分，共10分）1.所有微生物都需要在有氧條件下才能生長。（）2.普通肉湯培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基。（）3.紫外線滅菌的有效波長為254nm，適用于空氣和物體表面的消毒。（）4.霉菌的菌絲分為營養(yǎng)菌絲和氣生菌絲，其中氣生菌絲負責(zé)吸收營養(yǎng)。（）5.無菌檢查時，供試品若為抑菌性藥品，需采用中和法或稀釋法消除抑菌活性。（）6.潔凈區(qū)的溫濕度控制僅需滿足人員舒適度要求，對微生物生長無直接影響。（）7.芽孢是細菌的繁殖體，對熱、干燥和化學(xué)消毒劑的抵抗力較弱。（）8.微生物限度檢測中，同一供試品的需氧菌總數(shù)和霉菌酵母菌總數(shù)可使用同一份稀釋液進行接種。（）9.GMP規(guī)定，潔凈區(qū)的沉降菌監(jiān)測需在動態(tài)條件下進行，浮游菌監(jiān)測可在靜態(tài)條件下進行。（）10.實驗室廢棄的培養(yǎng)基需先進行高壓滅菌處理，再按醫(yī)療廢物處理。（）四、簡答題（每題6分，共30分）1.簡述微生物限度檢測的基本流程。2.說明革蘭氏染色法的操作步驟及結(jié)果判斷依據(jù)。3.GMP對潔凈區(qū)微生物監(jiān)測的要求包括哪些關(guān)鍵內(nèi)容？4.列舉5種常見的控制菌及其對應(yīng)的檢測意義。5.分析濕熱滅菌與干熱滅菌的主要區(qū)別（從原理、適用范圍、效果等方面）。五、綜合分析題（10分）某藥企在進行無菌原料藥生產(chǎn)時，發(fā)現(xiàn)B級潔凈區(qū)的沉降菌監(jiān)測結(jié)果為15cfu/Φ90mm平皿（標(biāo)準(zhǔn)為≤5cfu/Φ90mm平皿），請分析可能的原因及應(yīng)采取的處理措施。答案一、單項選擇題1.C2.B3.B4.C5.B6.A7.B8.B9.B10.C11.B12.B13.C14.A15.C二、填空題1.原核細胞型；真核細胞型2.桿菌；螺旋菌3.高溫高濕4.半固體培養(yǎng)基；液體培養(yǎng)基5.30-35；3-56.D；高風(fēng)險操作7.靛基質(zhì)（吲哚）；甲基紅（或乳糖發(fā)酵）8.化學(xué)；物理9.沙門菌；金黃色葡萄球菌10.清潔；操作三、判斷題1.×（存在厭氧菌）2.×（屬于營養(yǎng)培養(yǎng)基）3.√4.×（營養(yǎng)菌絲吸收營養(yǎng)）5.√6.×（溫濕度直接影響微生物生長）7.×（芽孢是休眠體，抵抗力強）8.√9.×（均需動態(tài)監(jiān)測）10.√四、簡答題1.微生物限度檢測的基本流程：①樣品處理：根據(jù)供試品特性（如抑菌性、溶解性）選擇稀釋液（如0.9%無菌氯化鈉溶液），制成1:10的供試品原液；②系列稀釋：將原液按10倍梯度稀釋至適宜濃度（如10?2、10?3）；③接種培養(yǎng)：需氧菌總數(shù)用胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，30-35℃培養(yǎng)3-5天；霉菌酵母菌總數(shù)用沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，20-25℃培養(yǎng)5-7天；④計數(shù)選擇菌落數(shù)在30-300cfu的平板進行計數(shù)，計算平均值并報告結(jié)果；⑤控制菌檢測：按《中國藥典》規(guī)定的方法（如增菌、分離、鑒定）檢測大腸埃希菌、沙門菌等特定控制菌。2.革蘭氏染色法操作步驟及結(jié)果判斷：步驟：①涂片固定；②結(jié)晶紫初染1分鐘，水洗；③碘液媒染1分鐘，水洗；④95%乙醇脫色30秒（至無紫色脫出），水洗；⑤沙黃復(fù)染1分鐘，水洗；⑥干燥后鏡檢。結(jié)果判斷：紫色為革蘭氏陽性菌（細胞壁肽聚糖層厚，乙醇脫色后保留結(jié)晶紫-碘復(fù)合物）；紅色為革蘭氏陰性菌（細胞壁脂類含量高，乙醇溶解脂類后結(jié)晶紫被洗脫，復(fù)染為紅色）。3.GMP對潔凈區(qū)微生物監(jiān)測的關(guān)鍵要求：①監(jiān)測項目：沉降菌、浮游菌、表面微生物（接觸碟法或棉簽擦拭法）、人員表面微生物；②監(jiān)測頻率：A級區(qū)每日監(jiān)測，B級區(qū)每周至少一次，C級和D級區(qū)每月至少一次；③監(jiān)測點布局：覆蓋關(guān)鍵操作區(qū)（如灌裝機、稱量臺）、人員活動頻繁區(qū)及潔凈區(qū)角落；④動態(tài)要求：監(jiān)測需在生產(chǎn)狀態(tài)下進行（動態(tài)），靜態(tài)監(jiān)測僅用于驗證；⑤標(biāo)準(zhǔn)限值：如A級區(qū)沉降菌≤1cfu/Φ90mm平皿，B級區(qū)≤5cfu/Φ90mm平皿，浮游菌A級≤1cfu/m3，B級≤10cfu/m3；⑥記錄與偏差處理：監(jiān)測結(jié)果需完整記錄，超標(biāo)時需啟動偏差調(diào)查，分析原因并采取糾正措施（如消毒、設(shè)備維護、人員培訓(xùn)）。4.5種常見控制菌及檢測意義：①大腸埃希菌：指示藥品被糞便污染，可能存在腸道致病菌；②沙門菌：強致病性腸道桿菌，藥品中不得檢出；③金黃色葡萄球菌：可產(chǎn)生腸毒素，導(dǎo)致食物中毒；④銅綠假單胞菌：條件致病菌，易污染潮濕環(huán)境，可能引發(fā)感染；⑤梭菌（如破傷風(fēng)梭菌）：產(chǎn)生外毒素，可導(dǎo)致嚴重疾?。ㄈ缙苽L(fēng)）。5.濕熱滅菌與干熱滅菌的主要區(qū)別：①原理：濕熱滅菌通過高溫高濕使蛋白質(zhì)變性（凝固速度快）；干熱滅菌通過高溫使蛋白質(zhì)氧化、脫水（作用較慢）。②溫度與時間：濕熱滅菌常用121℃、15分鐘；干熱滅菌需160℃、2小時或170℃、1小時。③適用范圍：濕熱滅菌適用于耐高溫高濕的物品（如培養(yǎng)基、玻璃器皿）；干熱滅菌適用于耐高溫但忌濕的物品（如油脂、粉劑、金屬器械）。④效果：濕熱滅菌穿透力強，滅菌效果更可靠；干熱滅菌穿透力弱，需更高溫度或更長時間。五、綜合分析題可能原因：①人員操作不當(dāng)：如未按要求穿戴無菌服（如口罩、手套未完全覆蓋）、操作時動作幅度過大導(dǎo)致氣流擾動；②環(huán)境控制異常：空調(diào)凈化系統(tǒng)（HVAC）故障（如風(fēng)速降低、過濾器堵塞），導(dǎo)致潔凈區(qū)空氣置換效率下降；③清潔消毒不徹底：地面、設(shè)備表面未按SOP進行消毒（如消毒頻率不足、消毒劑種類單一導(dǎo)致耐藥菌滋生）；④物料帶入污染：原輔料或包裝材料未經(jīng)過有效清潔或滅菌，帶入微生物；⑤監(jiān)測操作失誤：采樣平皿暴露時間過長、培養(yǎng)條件不符合要求（如溫度偏差）導(dǎo)致菌落異常生長。處理措施：①立即復(fù)測：在原超標(biāo)點及周邊區(qū)域增加采樣點，確認是否為偶然誤差或系統(tǒng)性污染；②排查HVAC系統(tǒng)：檢測風(fēng)速、換氣次數(shù)、高效過濾器完整性（如DOP檢漏），確認送風(fēng)質(zhì)量；③追溯人員操作：調(diào)取監(jiān)控錄像，檢查人員無菌操作規(guī)范（如手消毒