淄博市中醫(yī)院分子平臺維護(hù)考核一、單選題（每題2分，共20題）1.淄博市中醫(yī)院分子平臺日常維護(hù)中，以下哪項(xiàng)操作不屬于常規(guī)保養(yǎng)范圍？（）A.更換反應(yīng)管墊圈B.校準(zhǔn)熒光檢測儀光源強(qiáng)度C.清潔樣本處理模塊的吸頭D.調(diào)整高速離心機(jī)的轉(zhuǎn)速參數(shù)2.在進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)前，平臺應(yīng)重點(diǎn)檢查以下哪項(xiàng)設(shè)備的溫度穩(wěn)定性？（）A.移液器的吸放液準(zhǔn)確性B.熱循環(huán)儀的梯度升溫曲線C.樣本存儲冰箱的制冷效率D.電泳儀的電壓輸出穩(wěn)定性3.以下哪種情況會導(dǎo)致電泳凝膠條帶模糊不清？（）A.染色液濃度過高B.電泳緩沖液pH值偏堿C.DNA樣品濃度過低D.瓊脂糖凝膠濃度不均4.淄博地區(qū)冬季環(huán)境溫度較低時(shí)，分子平臺應(yīng)優(yōu)先檢查以下哪項(xiàng)設(shè)備的保溫性能？（）A.實(shí)時(shí)熒光定量儀的鏡頭清潔度B.冷凍樣品柜的密封性C.儀器電腦的操作系統(tǒng)更新D.空氣凈化系統(tǒng)的濾網(wǎng)堵塞情況5.在處理臨床樣本時(shí)，以下哪項(xiàng)操作可能增加PCR污染風(fēng)險(xiǎn)？（）A.使用一次性移液器吸頭B.在超凈工作臺內(nèi)完成樣本分裝C.多個(gè)樣本共用一個(gè)離心管D.定期消毒工作臺面6.淄博市中醫(yī)院分子平臺常用的核酸提取試劑盒中，哪種適用于高鹽分樣本？（）A.磁珠法純化試劑盒B.硅膠膜法純化試劑盒C.裂解液預(yù)處理的酶解法試劑盒D.有機(jī)溶劑萃取試劑盒7.若發(fā)現(xiàn)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)Ct值異常偏高，可能的原因是？（）A.樣本DNA濃度過高B.內(nèi)對照引物設(shè)計(jì)不合理C.離心機(jī)轉(zhuǎn)速不足D.試劑儲存條件不當(dāng)8.在進(jìn)行基因測序前的文庫構(gòu)建過程中，以下哪項(xiàng)步驟對平臺環(huán)境要求最高？（）A.PCR擴(kuò)增B.文庫定量C.測序模板構(gòu)建D.數(shù)據(jù)分析9.淄博市中醫(yī)院分子平臺使用離心機(jī)時(shí)，以下哪項(xiàng)屬于安全操作規(guī)范？（）A.在離心管未蓋緊時(shí)啟動設(shè)備B.超速離心時(shí)使用金屬材質(zhì)管蓋C.定期檢查轉(zhuǎn)子平衡性D.將離心機(jī)放置在易燃材料附近10.若發(fā)現(xiàn)電泳儀凝膠加熱不均，可能的原因是？（）A.加熱板表面有氣泡B.冷卻液循環(huán)管路堵塞C.電泳儀電源電壓不足D.瓊脂糖濃度過高二、多選題（每題3分，共10題）1.淄博市中醫(yī)院分子平臺日常維護(hù)中，需要定期校準(zhǔn)的設(shè)備包括？（）A.移液器精度B.熱循環(huán)儀溫度曲線C.電泳儀電壓穩(wěn)定性D.空氣凈化系統(tǒng)風(fēng)量2.可能導(dǎo)致核酸提取失敗的常見因素有？（）A.裂解液pH值不匹配B.樣本保存溫度過高C.磁珠清洗次數(shù)不足D.提取柱干涸3.熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中，以下哪些指標(biāo)可用于評估擴(kuò)增效率？（）A.Ct值離散度B.熒光信號曲線斜率C.內(nèi)對照擴(kuò)增倍數(shù)D.空白對照Ct值4.淄博地區(qū)夏季高溫環(huán)境下，分子平臺應(yīng)重點(diǎn)監(jiān)控哪些設(shè)備的運(yùn)行狀態(tài)？（）A.實(shí)時(shí)熒光定量儀的散熱系統(tǒng)B.冷凍樣品柜的制冷功率C.電泳儀的冷卻液溫度D.儀器電腦的內(nèi)存占用率5.電泳實(shí)驗(yàn)中，以下哪些操作可提高條帶分辨率？（）A.優(yōu)化瓊脂糖凝膠濃度B.調(diào)整電泳緩沖液離子強(qiáng)度C.延長電泳時(shí)間D.使用預(yù)電泳處理凝膠6.可能導(dǎo)致PCR擴(kuò)增失敗的原因包括？（）A.引物二聚體形成B.基因模板降解C.退火溫度過高D.試劑儲存不當(dāng)7.在進(jìn)行基因測序數(shù)據(jù)質(zhì)控時(shí)，以下哪些指標(biāo)需要重點(diǎn)關(guān)注？（）A.GC含量分布B.讀長分布均勻性C.N堿基比例D.高質(zhì)量堿基占比8.淄博市中醫(yī)院分子平臺常用的電泳儀維護(hù)項(xiàng)目包括？（）A.更換電泳液B.清潔紫外透射燈管C.檢查凝膠冷卻系統(tǒng)D.校準(zhǔn)電壓輸出精度9.核酸提取過程中，以下哪些措施可降低污染風(fēng)險(xiǎn)？（）A.單管操作B.超凈工作臺內(nèi)完成所有操作C.使用不同批次的試劑D.定期紫外線消毒工作臺10.若發(fā)現(xiàn)測序數(shù)據(jù)峰圖異常，可能的原因有？（）A.樣本DNA濃度過高B.測序試劑失效C.電泳儀參數(shù)設(shè)置錯(cuò)誤D.儀器溫度波動三、判斷題（每題1分，共20題）1.淄博市中醫(yī)院分子平臺使用的離心機(jī)轉(zhuǎn)子必須定期進(jìn)行動平衡校準(zhǔn)。（）2.電泳實(shí)驗(yàn)中，凝膠濃度越高，條帶分辨率越差。（）3.熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中，Ct值越低表示靶基因表達(dá)量越高。（）4.核酸提取過程中，樣本保存溫度越高越有利于RNA完整性。（）5.淄博地區(qū)冬季使用冷凍樣品柜時(shí)，建議將樣品放置在靠近制冷單元的位置。（）6.電泳儀的紫外透射燈管需定期更換，以保持足夠強(qiáng)度。（）7.PCR實(shí)驗(yàn)中，引物退火溫度越高越好。（）8.測序文庫構(gòu)建時(shí)，DNA濃度越高越好。（）9.淄博市中醫(yī)院分子平臺使用的移液器需定期進(jìn)行吸放液精度校準(zhǔn)。（）10.實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中，內(nèi)對照Ct值應(yīng)與靶基因Ct值接近。（）11.電泳實(shí)驗(yàn)中，電泳緩沖液pH值過高會導(dǎo)致條帶遷移異常。（）12.核酸提取過程中，裂解液應(yīng)與樣本充分混勻以確保裂解效果。（）13.測序數(shù)據(jù)質(zhì)控時(shí)，GC含量異?？赡芴崾緲颖疚廴尽＃ǎ?4.淄博地區(qū)夏季使用離心機(jī)時(shí)，需注意散熱不良可能導(dǎo)致設(shè)備故障。（）15.熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中，空白對照Ct值應(yīng)接近35個(gè)循環(huán)。（）16.電泳儀的凝膠加熱板需定期檢查，避免表面劃痕影響加熱均勻性。（）17.核酸提取過程中，離心管未蓋緊可能導(dǎo)致樣本損失。（）18.測序文庫構(gòu)建時(shí)，PCR擴(kuò)增循環(huán)數(shù)越多越好。（）19.淄博市中醫(yī)院分子平臺使用的電泳儀需定期校準(zhǔn)電壓輸出精度。（）20.實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中，熒光信號曲線斜率越陡峭表示擴(kuò)增效率越高。（）四、簡答題（每題5分，共5題）1.簡述淄博市中醫(yī)院分子平臺電泳實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化操作流程。2.列舉可能導(dǎo)致熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)Ct值異常偏高的三種原因及對應(yīng)解決措施。3.說明淄博地區(qū)冬季使用冷凍樣品柜時(shí)應(yīng)注意哪些事項(xiàng)。4.描述電泳凝膠條帶模糊不清的常見原因及改善方法。5.解釋核酸提取過程中如何降低PCR污染風(fēng)險(xiǎn)。五、論述題（每題10分，共2題）1.結(jié)合淄博市中醫(yī)院分子平臺的實(shí)際工作特點(diǎn)，論述如何優(yōu)化日常維護(hù)流程以提高設(shè)備運(yùn)行穩(wěn)定性。2.分析影響基因測序數(shù)據(jù)質(zhì)控的因素，并提出相應(yīng)的質(zhì)量控制措施。答案與解析一、單選題答案與解析1.D解析：調(diào)整高速離心機(jī)轉(zhuǎn)速參數(shù)屬于操作設(shè)置范疇，不屬于常規(guī)保養(yǎng)。其他選項(xiàng)均為設(shè)備維護(hù)內(nèi)容。2.B解析：熱循環(huán)儀的溫度曲線直接影響PCR擴(kuò)增效果，需重點(diǎn)檢查。其他選項(xiàng)雖重要，但與溫度穩(wěn)定性關(guān)聯(lián)度較低。3.C解析：DNA樣品濃度過低會導(dǎo)致條帶信號弱、模糊。其他選項(xiàng)可能導(dǎo)致條帶變寬或變形，但模糊主要與信號強(qiáng)度相關(guān)。4.B解析：冬季低溫易導(dǎo)致冷凍樣品柜密封性下降，影響樣本保存效果。其他選項(xiàng)雖需關(guān)注，但低溫影響更直接。5.C解析：多個(gè)樣本共用離心管會增加交叉污染風(fēng)險(xiǎn)。其他選項(xiàng)均為標(biāo)準(zhǔn)無菌操作。6.B解析：硅膠膜法對高鹽分樣本適用性更強(qiáng)。磁珠法適用于多種樣本類型，但有機(jī)溶劑法對高鹽分效果較差。7.B解析：內(nèi)對照引物設(shè)計(jì)不合理會導(dǎo)致Ct值異常。其他選項(xiàng)可能導(dǎo)致Ct值升高，但內(nèi)對照問題更直接。8.C解析：測序模板構(gòu)建對環(huán)境潔凈度要求最高，需在超凈臺或生物安全柜內(nèi)完成。其他步驟環(huán)境要求相對較低。9.C解析：定期檢查轉(zhuǎn)子平衡是離心機(jī)安全操作的核心要求。其他選項(xiàng)均存在安全隱患。10.A解析：加熱板氣泡會導(dǎo)致局部溫度不均。其他選項(xiàng)可能導(dǎo)致加熱異常，但氣泡影響更直接。二、多選題答案與解析1.ABCD解析：所有選項(xiàng)均需定期校準(zhǔn)，以確保實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性。2.ABCD解析：均為核酸提取失敗常見原因。裂解液不匹配、樣本高溫保存、清洗次數(shù)不足、柱干涸均會影響提取效果。3.BCD解析：Ct值離散度和斜率反映擴(kuò)增效率，內(nèi)對照和空白對照用于評估實(shí)驗(yàn)可靠性。4.ABC解析：散熱、制冷、冷卻液溫度是夏季重點(diǎn)監(jiān)控對象。電腦內(nèi)存占用雖需關(guān)注，但影響相對較小。5.ABD解析：凝膠濃度、緩沖液離子強(qiáng)度、預(yù)電泳可提高分辨率。延長電泳時(shí)間可能導(dǎo)致條帶彌散。6.ABC解析：引物二聚體、模板降解、退火溫度過高均影響擴(kuò)增。試劑儲存不當(dāng)雖可能影響，但非直接原因。7.ABCD解析：均為質(zhì)控關(guān)鍵指標(biāo)。GC含量、讀長分布、N比例、高質(zhì)量堿基占比均反映數(shù)據(jù)質(zhì)量。8.ABCD解析：均為電泳儀常規(guī)維護(hù)項(xiàng)目。9.ABD解析：單管操作、超凈臺、定期消毒是降低污染的有效措施。不同批次試劑影響較小。10.ABD解析：樣本濃度過高、試劑失效、溫度波動均導(dǎo)致峰圖異常。電泳儀參數(shù)錯(cuò)誤雖可能影響，但非主要原因。三、判斷題答案與解析1.正確解析：離心機(jī)轉(zhuǎn)子需定期校準(zhǔn)，確保平衡性。2.錯(cuò)誤解析：凝膠濃度越高，條帶分辨率越好。3.錯(cuò)誤解析：Ct值越低表示擴(kuò)增效率越高，但需結(jié)合內(nèi)對照判斷。4.錯(cuò)誤解析：低溫保存更利于RNA完整性。5.正確解析：靠近制冷單元可提高保溫效果。6.正確解析：紫外燈管強(qiáng)度衰減影響染色效果。7.錯(cuò)誤解析：退火溫度需根據(jù)Tm值優(yōu)化，過高可能導(dǎo)致非特異性結(jié)合。8.錯(cuò)誤解析：過高濃度可能導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。9.正確解析：移液器精度直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。10.正確解析：兩者應(yīng)接近，反映實(shí)驗(yàn)一致性。11.正確解析：pH值偏堿影響酶活性。12.正確解析：充分混勻確保裂解充分。13.正確解析：GC含量異常可能提示測序錯(cuò)誤或污染。14.正確解析：高溫易導(dǎo)致過熱。15.錯(cuò)誤解析：理想Ct值在15-35循環(huán)。16.正確解析：劃痕影響熱傳導(dǎo)。17.正確解析：未蓋緊可能導(dǎo)致樣本飛濺。18.錯(cuò)誤解析：需根據(jù)模板量優(yōu)化循環(huán)數(shù)。19.正確解析：電壓精度影響電泳效果。20.正確解析：斜率越陡峭表示擴(kuò)增效率越高。四、簡答題答案與解析1.電泳實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化操作流程答：（1）準(zhǔn)備階段：檢查電泳儀電壓、緩沖液pH值，配制瓊脂糖凝膠，預(yù)冷電泳槽。（2）凝膠制備：稱量瓊脂糖，加緩沖液，微波加熱溶解，倒入模具。（3）樣本加載：標(biāo)記電泳管，混合樣本與上樣緩沖液，點(diǎn)樣。（4）電泳運(yùn)行：預(yù)電泳5分鐘，接通電源，設(shè)定電壓和時(shí)間。（5）結(jié)果觀察：關(guān)閉電源，紫外透射觀察，拍照記錄。（6）清洗維護(hù)：更換緩沖液，清潔電泳槽。2.Ct值異常偏高的原因及解決措施答：（1）內(nèi)對照引物設(shè)計(jì)不合理：優(yōu)化引物特異性，重新設(shè)計(jì)。（2）樣本DNA降解：改進(jìn)提取方法，增加RNA保護(hù)措施。（3）PCR反應(yīng)條件不匹配：重新優(yōu)化退火溫度，調(diào)整Mg2?濃度。3.冬季冷凍樣品柜使用注意事項(xiàng)答：（1）定期檢查制冷效率，避免霜凍堵塞風(fēng)道。（2）樣品分層存放，避免集中過冷。（3）減少頻繁開關(guān)門次數(shù)，使用推車傳送。（4）監(jiān)控溫度記錄，異常及時(shí)報(bào)警。4.電泳凝膠條帶模糊原因及改善方法答：（1）凝膠濃度不均：精確稱量，均勻灌注。（2）緩沖液pH值異常：使用新鮮配制緩沖液。（3）電壓過高：適當(dāng)降低電壓。（4）電泳時(shí)間過長：縮短運(yùn)行時(shí)間。5.核酸提取降低PCR污染措施答：（1）單管操作，避免交叉污染。（2）超凈臺內(nèi)完成所有步驟。（3）使用不同批次試劑，避免殘留。（4）定期紫外線消毒工作臺面。五、論述題答案與解析1.優(yōu)化日常維護(hù)流程答：結(jié)合淄博地區(qū)冬季低溫、夏季高溫特點(diǎn)，建議建立季度維護(hù)計(jì)劃：（1）建立設(shè)備臺賬，標(biāo)注校準(zhǔn)周期（如離心機(jī)6個(gè)月，熱循環(huán)儀1年）。（2）制定環(huán)境監(jiān)控標(biāo)準(zhǔn)，夏季每日檢查空調(diào)制冷功率，冬季每日檢查冷凍柜溫度。（3）優(yōu)化試劑管理，設(shè)置冰箱溫度分區(qū)，避免試劑混放。（4）加強(qiáng)人員培訓(xùn)，定期考核操作規(guī)范性。（5）引入預(yù)防性維護(hù)，如定期更換移液器吸頭，減少故障率。