動物實驗樣本保存制度一、動物實驗樣本保存制度概述

動物實驗樣本保存制度是確保實驗數(shù)據(jù)真實性、完整性和可追溯性的重要環(huán)節(jié)。建立規(guī)范的樣本保存制度，有助于后續(xù)的數(shù)據(jù)分析、成果驗證和學術交流。本制度旨在明確樣本保存的流程、要求和責任，以保障動物實驗的科學性和嚴謹性。

二、樣本保存的基本要求

（一）樣本采集

1.樣本采集應遵循實驗設計，確保采集的樣本類型和數(shù)量符合實驗要求。

2.采集過程中應避免污染，使用無菌工具和容器，并做好標記。

3.樣本采集后應立即記錄相關信息，包括實驗動物編號、品種、性別、年齡、采集時間等。

（二）樣本處理

1.樣本采集后應盡快進行處理，避免長時間放置導致樣本降解。

2.根據(jù)實驗需求，對樣本進行相應的保存處理，如離心、分裝、添加固定液等。

3.處理過程中應做好記錄，包括處理方法、操作人員、處理時間等。

（三）樣本保存

1.樣本保存應選擇合適的保存條件，如低溫、干燥、避光等。

2.常見的樣本保存方法包括冷凍保存、干燥保存和固定保存。

(1)冷凍保存：適用于大多數(shù)生物樣本，如組織、細胞等。保存溫度通常為-20℃或-80℃。

(2)干燥保存：適用于需要長期保存的樣本，如干血片等。保存環(huán)境應為干燥、低溫、避光。

(3)固定保存：適用于需要用于形態(tài)學觀察的樣本，如石蠟包埋組織等。保存介質為固定液，如甲醛溶液等。

3.樣本保存容器應選擇合適的材質，如凍存管、離心管等，并做好標記。

三、樣本保存的流程

（一）樣本采集與處理

1.根據(jù)實驗設計，確定樣本類型和數(shù)量。

2.使用無菌工具和容器進行樣本采集，避免污染。

3.采集后立即進行處理，如離心、分裝等。

4.記錄樣本相關信息，包括實驗動物編號、品種、性別、年齡、采集時間等。

（二）樣本標記與記錄

1.對處理后的樣本進行標記，包括實驗名稱、樣本類型、保存條件等。

2.建立樣本信息數(shù)據(jù)庫，記錄樣本編號、實驗信息、保存條件、操作人員等。

3.定期核對樣本信息，確保信息的準確性和完整性。

（三）樣本保存與維護

1.將樣本放入合適的保存容器中，如凍存管、離心管等。

2.根據(jù)樣本類型選擇合適的保存條件，如冷凍保存、干燥保存或固定保存。

3.定期檢查樣本保存條件，如溫度、濕度等，確保樣本質量。

4.樣本保存過程中應避免頻繁取出，減少樣本降解的風險。

四、樣本保存的責任與監(jiān)督

（一）責任分工

1.實驗設計者負責制定樣本采集和處理方案。

2.實驗操作人員負責樣本的采集、處理和保存。

3.樣本管理員負責樣本的日常管理和維護。

4.實驗負責人負責監(jiān)督樣本保存制度的執(zhí)行。

（二）監(jiān)督與檢查

1.定期對樣本保存情況進行檢查，確保樣本質量。

2.對樣本保存過程中出現(xiàn)的問題進行及時處理和記錄。

3.建立樣本保存的應急預案，如溫度異常、樣本污染等。

五、樣本保存的注意事項

（一）避免污染

1.樣本采集和處理過程中應使用無菌工具和容器。

2.樣本保存容器應選擇合適的材質，避免樣本污染。

（二）避免降解

1.樣本采集后應盡快進行處理和保存，避免長時間放置。

2.根據(jù)樣本類型選擇合適的保存條件，如冷凍保存、干燥保存或固定保存。

（三）避免丟失

1.建立樣本信息數(shù)據(jù)庫，記錄樣本編號、實驗信息、保存條件等。

2.定期核對樣本信息，確保樣本的完整性和可追溯性。

**一、動物實驗樣本保存制度概述**

動物實驗樣本保存制度是確保實驗數(shù)據(jù)真實性、完整性和可追溯性的核心環(huán)節(jié)之一。規(guī)范的樣本保存不僅關系到實驗結果的準確性，也直接影響后續(xù)的數(shù)據(jù)分析、成果驗證、方法復現(xiàn)以及潛在的轉化應用。一個完善的樣本保存制度能夠最大程度地減少樣本降解、丟失或污染的風險，為科研工作的順利進行提供堅實保障。本制度旨在通過明確樣本從采集到最終處置的全流程操作規(guī)范、質量標準、責任分工和監(jiān)督機制，全面提升動物實驗樣本管理的科學化、標準化水平。

**二、樣本保存的基本要求**

（一）樣本采集

1.**遵循方案原則**：樣本的采集必須嚴格依據(jù)預先批準的實驗方案進行，確保采集的樣本類型（如組織、血液、尿液、糞便、毛發(fā)、細胞等）、數(shù)量、部位和時機等完全符合研究目的和設計要求。不得隨意更改采集方案。

2.**無菌操作與污染預防**：采集過程中必須采取無菌操作，使用經(jīng)過滅菌處理的無菌器械（如手術刀、剪、鑷子、注射器、采血管等）。采集容器（如離心管、凍存管、組織盒等）必須使用一次性無菌容器，并在開口處使用酒精燈火焰或其他有效方式消毒。操作人員需保持清潔，穿戴合適的防護用品（如無菌手套、手術衣、口罩），在潔凈環(huán)境下操作，以最大限度避免微生物、化學物質或其他外部因素的污染。

3.**詳細標識記錄**：樣本采集后，必須立即進行清晰、牢固的標識。標識內容應至少包括但不限于：實驗項目名稱、實驗動物唯一標識（如動物編號、耳號）、動物品種品系、性別、年齡、體重、采集日期與時間、采集部位、操作人員姓名等信息。標識應防水、防脫落，并放置在樣本容器外部明顯位置。同時，需填寫詳細的樣本采集記錄單，作為樣本信息的原始檔案。

（二）樣本處理

1.**及時性原則**：樣本采集后應盡快進行處理，以減少因時間延長導致的生物活性喪失、成分降解或結構改變。對于不同保存要求的樣本，應優(yōu)先處理或分批處理，避免長時間堆積。

2.**標準化操作**：根據(jù)樣本類型和后續(xù)研究需求，采用標準化的處理流程。例如：

***組織樣本**：需盡快置于合適的固定液中（如10%中性緩沖甲醛、Bouin's液等，根據(jù)組織類型和后續(xù)染色方法選擇），固定液量應為組織體積的10-20倍。固定時間需遵循標準或實驗要求。固定后的組織可進行常規(guī)石蠟包埋、乙醇脫水、二甲苯透明、浸蠟、包埋、切片等步驟，或直接進行冷凍切片。

***液體樣本（血液、尿液、灌流液等）**：血液樣本采集后應立即根據(jù)需要添加抗凝劑（如EDTA、肝素、檸檬酸鈉等）或促凝劑，并盡快進行離心（如4℃、3000rpm，離心5-10分鐘），分離血漿或細胞成分。分離后的血漿/細胞部分應立即轉移至凍存管或進行其他處理。尿液樣本可立即進行離心除沉，上清液根據(jù)需要保存。

***細胞樣本**：需盡快進行細胞計數(shù)、培養(yǎng)基更換、藥物處理等，或直接進行凍存（如添加DMSO、調整細胞濃度后置于凍存管）或接種。

3.**過程記錄**：詳細記錄樣本處理過程中的每一個關鍵步驟，包括所使用的試劑名稱、濃度、體積、操作溫度、操作時間、離心參數(shù)、操作人員等。這些信息對于后續(xù)結果解釋和問題追溯至關重要。

（三）樣本保存

1.**選擇適宜條件**：樣本保存條件的選擇直接關系到樣本長期保存的質量。應根據(jù)樣本類型、研究目的和保存期限，選擇最合適的保存方法，并嚴格控制保存環(huán)境的各項參數(shù)。

2.**常見保存方法及條件**：

***冷凍保存（最常用）**：

***原理**：通過降低溫度，使生物大分子活動停止，減緩酶解和降解過程。

***適用樣本**：幾乎所有類型的生物樣本，特別是細胞、組織、血漿、DNA、RNA、蛋白質等。

***保存溫度**：

*-20℃：適用于大多數(shù)需要長期保存的樣本，如細胞系、部分組織樣本、血漿、血清等。建議使用程序降溫（如從4℃緩慢降至-80℃）以減少冰晶損傷，特別是對于細胞和DNA/RNA。

*-80℃：適用于對溫度更敏感的樣本，如RNA、新鮮制備的cDNA、某些蛋白質、需要長期超低溫保存的細胞和組織樣本。是保存RNA和DNA的理想溫度。

***介質**：通常使用細胞凍存液（含DMSO或GSM）、RNAlater溶液、或直接用無血清培養(yǎng)基/緩沖液等。需確保凍存介質與樣本相容。

***容器**：使用預冷的、耐低溫的凍存管（如聚丙烯、聚四氟乙烯材質），管蓋需密封良好，防止水分蒸發(fā)和樣本污染。建議使用螺口蓋或專用密封蓋。

***儲存**：樣本應分裝在小體積（如500μl-1ml）的凍存管中，避免反復凍融。將凍存管水平放置于帶隔板的凍存管架中，置于-20℃或-80℃冰箱的冷凍層內。避免直接接觸冰箱內壁，以防局部溫度過低導致樣本凍傷。

***干燥保存（常溫/低溫干燥）**：

***原理**：通過降低水分活度，抑制微生物生長和酶活性。

***適用樣本**：主要用于需要長期常溫保存的樣本，如干血斑（用于激素、微量元素檢測）、糞便樣本（用于DNA提取、菌群分析）、毛發(fā)樣本（用于DNASTR分型）等。

***保存條件**：通常置于干燥、避光的環(huán)境中，可在干燥器中或使用真空干燥設備除水。部分樣本可能需要置于-20℃以下干燥保存以更好地保持穩(wěn)定性。

***容器**：使用密封性好的容器，如EP管、玻璃管或真空密封袋。

***固定保存（濕固定）**：

***原理**：使用化學固定液使細胞和組織的蛋白質變性凝固，維持其原有結構和形態(tài)。

***適用樣本**：主要用于需要進行形態(tài)學觀察（如病理學檢查）的組織樣本。

***保存介質**：如前述的甲醛溶液、乙醇、丙酮、Bouin's液等。保存液量需足夠完全浸沒樣本。

***保存條件**：通常在室溫或4℃條件下保存。長期保存需冷藏。

***后續(xù)處理**：固定后的樣本需經(jīng)過系列脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色等步驟，才能進行顯微鏡觀察。

3.**容器選擇與標記**：根據(jù)保存方法選擇合適的容器。所有容器在保存前必須進行清晰、持久的標識，內容同采集時要求。標記應清晰可見，不易因保存條件（如低溫、光照）而褪色或模糊。建議使用防水墨水或電子標簽。

**三、樣本保存的流程**

（一）樣本采集與處理

1.**接收實驗指令**：樣本管理員或操作人員接收經(jīng)過批準的實驗方案，明確實驗目的、所需樣本類型、數(shù)量及保存要求。

2.**準備采集用品**：根據(jù)方案準備齊全所需的無菌器械、消毒用品、采集容器、固定液、記錄單、標識標簽等，并檢查其狀態(tài)是否合格。

3.**實施樣本采集**：在符合要求的操作環(huán)境下（如實驗室、手術臺），嚴格按照無菌操作規(guī)程進行動物麻醉（如適用）、保定、消毒、采樣。確保每個樣本采集過程獨立、規(guī)范。

4.**即時標識與記錄**：樣本剛采集完畢，立即粘貼/標記好唯一標識，并填寫詳細的樣本采集記錄單，信息需準確無誤，字跡清晰。

5.**初步處理**：根據(jù)樣本類型和保存要求，立即進行必要的初步處理，如血液樣本立即抗凝和離心分離血漿、組織樣本立即放入固定液中等。處理過程需在潔凈臺或指定區(qū)域進行，并做好記錄。

（二）樣本標記與記錄

1.**二級標識確認**：將初步處理后的樣本轉移至最終保存容器（如凍存管、離心管），再次核對并確認標識信息（項目、動物ID、日期、樣本類型等）與采集記錄單一致，無遺漏或錯誤。

2.**建立樣本信息數(shù)據(jù)庫**：為每個樣本分配唯一的樣本編號（可按項目、日期、動物編號等規(guī)則生成）。將所有樣本的詳細信息（樣本編號、對應動物信息、采集日期時間、樣本類型、采集部位、處理方法、保存液/介質、保存條件要求、操作人員等）錄入樣本信息管理系統(tǒng)或登記在樣本臺賬中。確保數(shù)據(jù)庫的實時更新和準確性。

3.**存儲位置記錄**：記錄每個樣本當前的存儲位置（如具體冰箱號、層位、架號、抽屜號）。

4.**定期數(shù)據(jù)核查**：定期（如每月）核對樣本數(shù)據(jù)庫中的信息與實際存儲樣本及物理記錄（如冰箱溫度記錄）的一致性。

（三）樣本保存與維護

1.**轉移至目標存儲**：根據(jù)樣本的保存要求，將標記好的樣本轉移至對應的存儲設備中。例如，需冷凍的樣本轉移至-20℃或-80℃冰箱。轉移過程需快速、小心，避免樣本受到劇烈搖晃或反復凍融。

2.**放置與排列**：在冰箱內合理放置樣本，遵循“先進先出”原則，將近期采集或優(yōu)先使用的樣本放在方便取用但遠離門和邊角的位置。冷凍樣本應使用帶隔板的管架，使樣本之間有間隔，確保冷氣流通均勻，避免局部過冷或過熱。液體樣本應盡量減少暴露在空氣中。

3.**存儲環(huán)境監(jiān)控**：

***溫度監(jiān)控**：所有用于樣本保存的冰箱/冰柜必須配備經(jīng)過校準的溫度記錄儀或傳感器。定期（如每日或根據(jù)設備性能）檢查并記錄溫度，確保維持在設定范圍（如-20℃±5℃，-80℃±10℃）。建立溫度異常報警和應急處理機制。溫度記錄需妥善保存至少3-5年。

***濕度監(jiān)控**：對于干燥保存的樣本，需監(jiān)控存儲環(huán)境的相對濕度，確保其低于臨界值（如50%）。

***除霜管理**：定期對冷凍設備進行除霜，確保其運行效率，避免因霜層過厚導致溫度波動。

4.**防止物理損傷與污染**：定期檢查存儲設備內部是否有異物、冰塊掉落風險，確保樣本存放環(huán)境清潔。操作人員需在清潔區(qū)域更換手套，避免交叉污染。

5.**存期管理與提醒**：根據(jù)實驗設計和倫理要求，設定樣本的保存期限。利用樣本管理系統(tǒng)或日歷設置提醒，對于臨近保存期限的樣本，需評估是否需要續(xù)存或按計劃進行使用/銷毀。

6.**防止丟失與混淆**：建立嚴格的取用和歸還制度。取用樣本時需填寫取用申請單，記錄樣本編號、取用日期、取用者、用途等信息。取用后需清點數(shù)量，確保與申請一致。歸還時需核對無誤。

**四、樣本保存的責任與監(jiān)督**

（一）責任分工

1.**實驗研究者/負責人**：對整個實驗的樣本采集、處理和保存的合規(guī)性、科學性負總責。負責制定或確認樣本保存方案，確保方案符合研究需求和倫理規(guī)范。

2.**實驗操作人員**：直接執(zhí)行樣本采集、處理和初步保存的操作，對操作的規(guī)范性和準確性負責。需經(jīng)過專業(yè)培訓，熟悉操作流程和注意事項。

3.**樣本管理員/實驗室技術員**：負責樣本的接收、登記、轉移、精細處理（如分裝、標記）、存入指定存儲設備、環(huán)境監(jiān)控、信息數(shù)據(jù)庫維護、樣本發(fā)放取用管理等日常管理工作。需具備扎實的樣本管理知識和技能。

4.**實驗室負責人/主管**：監(jiān)督樣本保存制度的整體執(zhí)行情況，提供必要的資源支持（如設備、試劑），處理樣本管理中出現(xiàn)的重大問題，確保制度有效運行。

（二）監(jiān)督與檢查

1.**日常巡查**：樣本管理員或指定人員每日對樣本存儲環(huán)境（冰箱、冰柜）進行巡查，檢查溫度顯示是否正常、設備運行是否穩(wěn)定、有無異常情況（如門未關緊、結霜嚴重、樣本破損、標識不清等）。

2.**定期審計**：由實驗室負責人或指定高級別人員定期（如每季度或每半年）對樣本保存情況進行審計，內容包括：

*樣本存儲環(huán)境溫度記錄的完整性和準確性。

*樣本數(shù)據(jù)庫信息的準確性和更新頻率。

*樣本標識的清晰度和規(guī)范性。

*樣本保存流程的依從性。

*存儲設備的維護保養(yǎng)記錄。

*存期管理的執(zhí)行情況。

3.**記錄與報告**：所有巡查和審計結果均需記錄在案。對于發(fā)現(xiàn)的問題，需及時報告給相關負責人，并跟蹤整改措施的落實情況。定期形成樣本管理報告，向實驗室負責人匯報。

4.**內部培訓與考核**：定期組織與樣本保存相關的內部培訓，更新知識和技能?？蛇M行操作考核，確保人員能力符合崗位要求。

5.**應急預案**：制定針對樣本保存異常情況（如停電、設備故障、溫度失控、樣本污染、丟失等）的應急預案，明確響應流程、負責人和聯(lián)系方式，并定期進行演練。

**五、樣本保存的注意事項**

（一）避免污染

1.**全程無菌**：從樣本采集、處理、分裝到標記、存儲的每一個環(huán)節(jié)，都必須嚴格控制無菌操作，防止微生物（細菌、真菌）、內源性酶（如DNase、RNase）或其他化學物質的污染。

2.**環(huán)境控制**：在樣本操作區(qū)域（如超凈工作臺、生物安全柜）內進行操作，保持環(huán)境清潔和相對負壓（如適用）。

3.**個人防護**：操作人員必須穿戴潔凈的防護服、手套，佩戴口罩，避免毛發(fā)、皮屑等落入樣本。

4.**容器清潔**：所有使用