2025/11/13第七章

高效液相色譜分析法7.1.1

高效液相色譜儀7.1.2高效液相色譜法的特點7.1.3流程及主要部件第一節(jié)

高效液相色譜的特點與儀器Highperformanceliquidchromatograph,HPLCFeatureandinstrumentofHPLC2025/11/137.1.1液相色譜儀2025/11/13液相色譜儀（2）2025/11/13液相色譜儀（3）2025/11/13液相色譜儀（4）2025/11/13液相色譜儀（5）2025/11/13液相色譜儀（5）2025/11/137.1.2

高效液相色譜法的特點

特點：高壓、高效、高速高沸點、熱不穩(wěn)定有機及生化試樣的高效分離分析方法。2025/11/137.1.3流程及主要部件1.結(jié)構(gòu)流程2025/11/132025/11/132.主要部件(1)高壓輸液泵主要部件之一，壓力：150×105～350×105

Pa。為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相(<10μm)，液體的流動相高速通過時，將產(chǎn)生很高的壓力，因此高壓、高速是高效液相色譜的特點之一。應具有壓力平穩(wěn)、脈沖小、流量穩(wěn)定可調(diào)、耐腐蝕等特性。（動畫）2025/11/13(2)梯度淋洗裝置外梯度（高壓梯度）:

利用兩臺高壓輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按一定的比例送入梯度混合室，混合后進入色譜柱。內(nèi)梯度（低壓梯度）:一臺高壓泵，通過比例調(diào)節(jié)閥，將兩種或多種不同極性的溶劑按一定的比例抽入高壓泵中混合。2025/11/13(3)進樣裝置

流路中為高壓力工作狀態(tài)，通常使用耐高壓的六通閥進樣裝置，結(jié)構(gòu)如圖所示：2025/11/13(4)高效分離柱

柱體為直形不銹鋼管，內(nèi)徑1～6mm，柱長5～40cm。發(fā)展趨勢是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。1.色譜柱類型

按內(nèi)徑大小可大致分為常規(guī)分析柱、制備或半制備柱、小內(nèi)徑或微徑柱、毛細管柱四種類型。2.保護柱

一般在分析柱前裝上較短的保護柱，不僅可除去溶劑中的顆粒雜質(zhì)和污染物，而且可除去樣品中含有與固定相不可逆結(jié)合的組分，以保護較昂貴的分析柱，延長使用壽命。3.柱恒溫器

對色譜柱嚴格控制溫度可獲得重現(xiàn)性更高保留值和更好分離色譜圖。2025/11/13(5)液相色譜檢測器

a.紫外檢測器應用最廣，對大部分有機化合物有響應。特點：

靈敏度高；線形范圍寬；流通池可做得很小(1mm×10mm，容積8μL)；

對流動相的流速和溫度變化不敏感；波長可選，易于操作；可用于梯度洗脫。2025/11/13b.光電二極管陣列檢測器

紫外檢測器的重要進展；光電二極管陣列檢測器：1024個二極管陣列，各檢測特定波長，計算機快速處理，三維立體譜圖。2025/11/132025/11/13光電二極管陣列檢測器2025/11/13三維：光譜-色譜圖2025/11/13c.示差折光檢測器

（Differentialrefractiveindexdetector）

除紫外檢測器之外應用最多的檢測器?？蛇B續(xù)檢測參比池和樣品池中流動相之間的折光指數(shù)差值。差值與濃度成正比。

通用型檢測器（每種物質(zhì)具有不同的折光指數(shù)）。靈敏度低、對溫度敏感，不能用于梯度洗脫。

偏轉(zhuǎn)式、反射式和干涉型三種。2025/11/13示差折光檢測器2025/11/13d.熒光檢測器

（Fluorescencedetector）高靈敏度，高選擇性。對多環(huán)芳烴，維生素B、黃曲霉素、卟啉類化合物、農(nóng)藥、藥物、氨基酸、甾類化合物等有響應。2025/11/131.色譜柱出口;2.液壓釋放口;3.氮氣入口;4.霧化器;5.加熱漂移管;6.樣品液滴;7.激光光源;8.排氣口;9.光電檢測器;10.放大器;11.連接記錄系統(tǒng)。A.色譜柱洗出液霧化區(qū)；B.溶劑蒸發(fā)區(qū);C.樣品粒子光散射。蒸發(fā)光散射檢測器2025/11/13請選擇內(nèi)容結(jié)束