*第八章

超臨界流體色譜及其它8.2.1

激光色譜的基本原理8.2.2激光色譜的特點8.2.3激光色譜的應用前景與發(fā)展第二節(jié)

激光色譜SupercriticalfluidchromatographandothersLaserchromatograph*概述

激光色譜（opticalchromatography）是板今太郎于1995年首次提出的利用激光作為推動力的一類新型的色譜分離技術。分析化學領域的又一個前沿課題。為人們提供了一個用于研究微米區(qū)域內（甚至更?。┝Ｗ拥奈锢?、化學及生物特性的全新方法。對化學、分子生物學和生物醫(yī)學工程等領域產(chǎn)生影響。*8.2.1

激光色譜的基本原理1.光捕集

OpticalTrapTechnique；Ashkin

1970年

通過光學系統(tǒng)將一束特定波長的激光聚焦于溶液中，由于溶液中粒子的折光指數(shù)大于溶劑的折光指數(shù)，所以粒子在激光的輻射壓力作用下被聚焦，相當于粒子被捕集一樣(在物理上將這種現(xiàn)象稱為激光致冷)。為光色譜的誕生奠定了基礎將待分離組分（或粒子）按幾何尺寸的大小分離的技術。*2.激光分離原理

粒子受流動相的推動力f推和激光束的輻射壓力f輻共同作用。粒子受輻射壓力的作用聚焦在激光束的中心線上。

f輻>f推時，粒子運動方向發(fā)生反轉并獲得一定的加速度，并受流動相的阻力而逐漸減速，當f輻=f推時，離子在該處停留。大粒子受到的輻射壓力大，離激光光源位置遠，從而實現(xiàn)分離。

*8.2.2

激光色譜的特點1．進樣簡單2．優(yōu)化分離條件容易

改變激光束的聚焦條件可以控制粒子的分離效果。光色譜可以控制測定時間。3．不需要用標準物質對照定性

知道分析物粒子的尺寸大小和折光指數(shù)，就可以通過計算來確定粒子的位置而定性。4．可以隨時檢測

檢測效率100%。

*5．可同時實現(xiàn)分離和富集

改變激光器的輸出功率就可以將粒子按幾何尺寸大小收集。6．可以更有效地分離單個“粒子”或“大分子”

如生物細胞和生物大分子。7．只要中斷激光束就可以恢復樣品的初始濃度8．可以進行“原位”反應或性質研究

粒子位置確定，并可根據(jù)需要確定停留時間，可方便地對離子進行化學反應或其他研究。9．色譜柱的尺寸可以減小至微米級

為微米區(qū)域內的化學或分子生物研究提供了場所。

*8.2.3

激光色譜的應用前景與發(fā)展對聚合物微球、生物細胞、生物大分子(如蛋白質、肽、DNA、RNA的細粒體)進行分離研究。從理論上講，可以檢測到一個蛋白質分子，這是其他分析方法所不具備的突出特點。發(fā)展方向：1．完善光色譜理論：分離數(shù)學模型，影響分離因素。2．研制高靈敏度的檢測器：提高檢測技術。3．研制性能優(yōu)良、自動化程度高的光色譜儀器。4．進行深入的應用研究：生物大分子的微區(qū)研究