新冠核酸PCR上崗證考試題及答案一、單項選擇題（每題1分，共40分。每題只有一個正確答案，請將正確選項字母填入括號內(nèi)）1.新型冠狀病毒屬于哪一類病毒？A.DNA病毒B.逆轉(zhuǎn)錄病毒C.RNA病毒D.朊病毒答案：C2.實時熒光RT-PCR檢測新冠病毒的靶基因通常不包括：A.ORF1abB.N基因C.E基因D.S基因答案：D3.下列哪項不是PCR反應(yīng)體系必需組分？A.引物B.dNTPsC.逆轉(zhuǎn)錄酶D.DNA聚合酶答案：C4.逆轉(zhuǎn)錄步驟的溫度一般設(shè)置為：A.37℃B.50℃C.72℃D.95℃答案：B5.熒光定量PCR中，Ct值含義為：A.循環(huán)閾值B.臨界溫度C.熒光強度D.擴增效率答案：A6.內(nèi)標(biāo)基因的主要作用是：A.提高靈敏度B.監(jiān)控提取與擴增抑制C.降低背景D.增加熒光信號答案：B7.下列哪種耗材必須無RNA酶？A.離心管B.移液器C.手套D.以上全部答案：D8.生物安全柜開機后需穩(wěn)定至少：A.1minB.5minC.15minD.30min答案：C9.樣本采集后如不能立即檢測，應(yīng)置于：A.常溫B.4℃C.?20℃D.?70℃以下答案：D10.核酸提取試劑盒中用于裂解病毒的組分通常為：A.Tris-HClB.異硫氰酸胍C.EDTAD.Tween-20答案：B11.實時熒光PCR儀校準(zhǔn)周期建議為：A.每天B.每周C.每月D.每季度答案：C12.下列哪項操作最容易產(chǎn)生氣溶膠污染？A.開蓋離心B.貼膜離心C.靜置孵育D.冰浴降溫答案：A13.陽性對照的Ct值應(yīng)落在廠家說明書規(guī)定的：A.任意區(qū)間B.±0.5循環(huán)C.±1循環(huán)D.±2循環(huán)答案：D14.若陰性對照出現(xiàn)擴增曲線，應(yīng)首先：A.復(fù)測樣本B.更換試劑C.檢查實驗室污染D.降低熒光閾值答案：C15.下列哪項不是PCR實驗室分區(qū)的基本原則？A.單向流動B.物品專用C.人員固定D.分區(qū)可逆向答案：D16.提取RNA時，用于沉淀核酸的醇類是：A.甲醇B.乙醇C.丙醇D.丁醇答案：B17.熒光探針5′端標(biāo)記通常使用：A.FAMB.ROXC.TAMRAD.Cy5答案：A18.逆轉(zhuǎn)錄酶缺乏下列哪種活性？A.RNA指導(dǎo)的DNA聚合酶B.DNA指導(dǎo)的DNA聚合酶C.RNaseHD.3′→5′外切酶答案：D19.若樣本Ct=38，內(nèi)標(biāo)Ct=25，則判定為：A.陽性B.陰性C.可疑D.重新提取答案：B20.下列哪項措施不能降低假陰性風(fēng)險？A.增加采樣頻次B.使用快速提取法C.采用雙靶標(biāo)檢測D.內(nèi)標(biāo)監(jiān)控答案：B21.實時熒光PCR報告應(yīng)保存至少：A.1個月B.3個月C.1年D.3年答案：D22.下列哪項不屬于個人三級防護裝備？A.N95口罩B.護目鏡C.一次性隔離衣D.棉質(zhì)手套答案：D23.樣本運輸箱外應(yīng)貼的標(biāo)簽顏色為：A.綠色B.黃色C.紅色D.藍(lán)色答案：C24.若提取效率低，內(nèi)標(biāo)Ct值會：A.不變B.降低C.升高D.消失答案：C25.下列哪項不是PCR抑制物？A.肝素B.血紅蛋白C.尿素D.鎂離子答案：D26.熒光閾值線應(yīng)設(shè)定在：A.基線期上方B.平臺期中部C.指數(shù)期下方D.任意位置答案：A27.若陽性對照未檢出，應(yīng)首先：A.更換儀器B.檢查試劑有效期C.降低退火溫度D.增加循環(huán)數(shù)答案：B28.下列哪項不是實驗室質(zhì)量指標(biāo)？A.報告及時率B.假陽性率C.投訴率D.員工年齡答案：D29.實時熒光PCR儀的光源常用：A.鹵素?zé)鬊.LEDC.氙燈D.激光答案：B30.下列哪項屬于嚴(yán)重實驗室事故？A.手套破損B.陽性對照溢出形成氣溶膠C.標(biāo)簽?zāi)：鼶.打印機卡紙答案：B31.若ORF1ab陽性、N基因陰性，應(yīng)：A.報陽性B.報陰性C.復(fù)測D.報可疑答案：C32.下列哪項不是RNA酶污染源？A.皮膚B.唾液C.金屬器械D.塑料制品答案：C33.實驗室相對濕度應(yīng)控制在：A.20–30%B.30–40%C.40–60%D.60–80%答案：C34.下列哪項不屬于PCR擴增曲線四期？A.基線期B.指數(shù)期C.線性期D.衰減期答案：D35.若樣本Ct=22，陽性對照Ct=20，則該樣本病毒載量：A.高于對照B.低于對照C.與對照相等D.無法判斷答案：B36.下列哪項不是防污染試劑？A.UNG酶B.dUTPC.光照修復(fù)酶D.以上均可答案：C37.實驗室門禁記錄保存期限不少于：A.1周B.1個月C.3個月D.1年答案：D38.若同時檢測流感A與新冠，應(yīng)：A.同一管擴增B.分區(qū)提取C.共用陰性對照D.降低退火溫度答案：B39.下列哪項不是PCR儀維護內(nèi)容？A.校準(zhǔn)熱塊B.清潔熒光透鏡C.更換保險絲D.校準(zhǔn)天平答案：D40.若檢測結(jié)果處于灰區(qū)，復(fù)測后Ct值仍介于37–39，應(yīng)：A.報陽性B.報陰性C.報可疑并建議重采D.忽略答案：C二、多項選擇題（每題2分，共20分。每題有兩個或兩個以上正確答案，多選少選均不得分）41.以下哪些屬于RNA提取關(guān)鍵步驟？A.樣本裂解B.醇沉淀C.洗滌D.洗脫答案：ABCD42.實時熒光PCR儀日常質(zhì)控應(yīng)包括：A.溫度校準(zhǔn)B.熒光背景檢測C.靈敏度測試D.噪音測試答案：ABD43.下列哪些情況可導(dǎo)致假陽性？A.氣溶膠污染B.引物二聚體C.探針降解D.陰性對照污染答案：ABD44.以下哪些屬于實驗室生物安全二級要求？A.高壓滅菌器B.生物安全柜C.洗眼器D.獨立通風(fēng)系統(tǒng)答案：ABC45.下列哪些措施可降低RNA降解風(fēng)險？A.冰上操作B.使用RNA酶抑制劑C.快速提取D.紫外照射答案：ABC46.關(guān)于Ct值，下列說法正確的是：A.與起始模板量呈反比B.不同儀器可比較C.同一批實驗可比較D.不同試劑可比較答案：AC47.以下哪些屬于PCR實驗室“三區(qū)兩緩”？A.試劑準(zhǔn)備區(qū)B.樣本制備區(qū)C.擴增區(qū)D.產(chǎn)物分析區(qū)答案：ABC48.下列哪些屬于核酸檢測報告必填信息？A.采樣時間B.檢測方法C.儀器型號D.檢驗者簽名答案：ABD49.以下哪些屬于RNA質(zhì)量評估指標(biāo)？A.260/280比值B.260/230比值C.電泳條帶D.熒光強度答案：ABC50.下列哪些情況需啟動實驗室污染應(yīng)急預(yù)案？A.陰性對照陽性B.陽性對照陰性C.連續(xù)三批假陽性D.通風(fēng)系統(tǒng)故障答案：ACD三、判斷題（每題1分，共10分。正確打“√”，錯誤打“×”）51.實時熒光PCR可直接檢測RNA，無需逆轉(zhuǎn)錄。答案：×52.內(nèi)標(biāo)基因必須與靶基因使用相同熒光通道。答案：×53.實驗室出口應(yīng)設(shè)置手消毒器。答案：√54.提取試劑含胍鹽，可滅活病毒。答案：√55.同一人員可在一天內(nèi)往返試劑區(qū)與擴增區(qū)。答案：×56.熒光閾值越低，Ct值越大。答案：√57.陽性對照濃度降低會導(dǎo)致Ct值升高。答案：√58.實驗室地面應(yīng)每日濕式清潔。答案：√59.檢測結(jié)果為陰性即可排除感染。答案：×60.所有廢棄物均需高壓滅菌后出實驗室。答案：√四、填空題（每空1分，共20分）61.新型冠狀病毒基因組為________鏈________RNA。答案：單、正62.實時熒光PCR中，用于定量計算的標(biāo)準(zhǔn)曲線橫坐標(biāo)為________，縱坐標(biāo)為________。答案：起始拷貝數(shù)對數(shù)、Ct值63.實驗室生物安全標(biāo)識中，紅色代表________危險。答案：高度64.核酸提取時，________nm吸光度用于估算RNA濃度。答案：26065.逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系通常加入________引物，包括Oligo(dT)、隨機六聚體或________。答案：逆轉(zhuǎn)錄、基因特異性66.PCR擴增效率理想范圍為________%–________%。答案：90、11067.實驗室質(zhì)量手冊應(yīng)至少________年修訂一次。答案：168.若樣本檢測限為1000copies/mL，則Ct值約為________（取整數(shù)）。答案：3569.熒光通道間干擾稱為________效應(yīng)。答案：串?dāng)_70.實驗室準(zhǔn)入培訓(xùn)記錄保存期限不少于________年。答案：371.核酸提取儀磁棒應(yīng)每周用________%乙醇擦拭。答案：7572.實時熒光PCR報告發(fā)出前需經(jīng)過________級審核。答案：兩73.實驗室個人防護脫卸順序應(yīng)遵循________原則。答案：由外向內(nèi)、由上向下74.若陽性對照Ct值比說明書大2，則報告應(yīng)________。答案：無效并復(fù)測75.樣本編號應(yīng)采用________碼，避免人工書寫錯誤。答案：二維76.實驗室溫度應(yīng)控制在________℃±2℃。答案：2277.熒光探針淬滅基團常用________。答案：BHQ78.實驗室應(yīng)每年至少參加________次室間質(zhì)評。答案：兩79.若提取RNA后需長期保存，應(yīng)置于________℃以下。答案：?8080.實驗室應(yīng)急預(yù)案演練每年不少于________次。答案：一五、簡答題（每題6分，共30分）81.簡述實時熒光RT-PCR檢測新冠病毒的基本原理。答案：以病毒RNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄酶合成cDNA；再以cDNA為模板，DNA聚合酶擴增靶序列；熒光探針與擴增產(chǎn)物結(jié)合后釋放熒光信號，儀器實時監(jiān)測熒光強度，Ct值與起始模板量呈反比，實現(xiàn)定性或相對定量。82.列舉導(dǎo)致假陰性的五種常見原因并給出糾正措施。答案：1.采樣不當(dāng)：培訓(xùn)采樣人員，增加咽拭子擦拭次數(shù)；2.運輸保存不當(dāng)：嚴(yán)格?70℃保存，縮短運輸時間；3.提取效率低：更換提取試劑，增加內(nèi)標(biāo)監(jiān)控；4.抑制物殘留：稀釋樣本或重新提取；5.突變導(dǎo)致引物不匹配：采用雙靶標(biāo)或多重引物。83.實驗室發(fā)生氣溶膠污染后應(yīng)如何處置？答案：立即停止實驗，封存相關(guān)試劑與耗材；通風(fēng)系統(tǒng)連續(xù)運行4h以上；使用含氯消毒劑擦拭所有表面；紫外照射過夜；更換移液器濾芯與手套；對污染區(qū)域進(jìn)行三次陰性對照檢測，合格后方可恢復(fù)實驗；提交事故報告并培訓(xùn)全員。84.簡述RNA提取過程中如何防止RNase污染。答案：人員戴雙層手套，外層接觸器材后及時更換；使用RNase-free耗材與試劑；工作臺用0.5%SDS+3%H2O2擦拭后再用DEPC水擦拭；提取儀磁棒每周用RNaseZap處理；在冰上快速操作，加入RNase抑制劑；避免說話朝向樣本。85.如何驗證新建新冠病毒核酸檢測項目的檢測限？答案：使用數(shù)字PCR定量高濃度陽性樣本，十倍系列稀釋至理論1–5000copies/mL；每個濃度提取24復(fù)孔，重復(fù)三天；Probit回歸計算95%檢出率對應(yīng)濃度；同時驗證內(nèi)標(biāo)回收率；檢測限濃度需滿足CV<5%，并與室間質(zhì)評樣本比對一致。六、案例分析題（每題10分，共30分）86.某實驗室一批次96份樣本，陰性對照出現(xiàn)Ct=36.5的微弱曲線，陽性對照及樣本結(jié)果正常。分析可能原因并提出處理方案。答案：原因：1.陰性對照加樣時氣溶膠污染；2.試劑污染；3.熒光閾值設(shè)置過低。處理：立即復(fù)測該批次；更換新批號試劑；提高閾值至基線噪聲上方2SD；若復(fù)測陰性對照仍陽性，則整批結(jié)果無效，全面清潔并更換實驗臺墊。87.某患者三天內(nèi)三次采樣，Ct值分別為39.2、38.1、陰性，內(nèi)標(biāo)均正常。如何報告并解釋？答案：報告“可疑，建議臨床結(jié)合癥狀與影像學(xué)”。解釋：病毒載量接近檢測限，可能存在采樣差異或病毒清除；需間隔24h再次采樣，若仍高于38，按方案報可疑；若轉(zhuǎn)陰，提示恢復(fù)期低載量。88.實驗室新引入一款快速提取試劑，內(nèi)標(biāo)Ct值普遍延后2.5循環(huán)，但陽性對照正常。請評估該試劑是否可用。