病理科肝癌組織檢測流程演講人：日期:目錄CATALOGUE02組織處理流程03切片制作與染色04顯微鏡檢查階段05診斷與報告生成06質量控制與存檔01樣本接收與準備01樣本接收與準備PART樣本登記與編號唯一標識管理采用條形碼或二維碼系統(tǒng)對樣本進行唯一標識登記，確保樣本信息與患者數(shù)據精準匹配，避免混淆或丟失風險。雙人核對機制電子化存檔由兩名專業(yè)人員獨立核對樣本標簽與申請單信息，包括患者姓名、樣本類型及臨床診斷，確保數(shù)據錄入準確性。將樣本信息錄入病理信息系統(tǒng)（LIS），同步生成電子檔案，便于后續(xù)追蹤和審計。樣本固定處理標準化固定液選擇優(yōu)先使用10%中性緩沖福爾馬林固定液，保持組織形態(tài)穩(wěn)定性，避免過度收縮或膨脹影響后續(xù)切片質量。固定時間控制根據組織厚度調整固定時長，通常為6-24小時，確保核心區(qū)域充分滲透固定，避免固定不足或過度導致的抗原丟失。溫度與環(huán)境監(jiān)控固定過程需在室溫（20-25℃）下進行，避免高溫或低溫影響固定效果，同時記錄環(huán)境參數(shù)備查。初步評估與記錄肉眼觀察記錄詳細描述樣本大小、顏色、質地及有無壞死、出血等異常，拍攝宏觀照片存檔，為后續(xù)診斷提供參考依據。質量控制清單填寫樣本接收質量評估表，記錄固定狀態(tài)、完整性及是否符合檢測要求，不合格樣本需及時反饋臨床科室。判斷樣本是否包含腫瘤組織、癌旁組織及手術切緣，標注需重點關注的區(qū)域，指導后續(xù)取材步驟。組織代表性評估02組織處理流程PART脫水與透明化組織樣本需依次經過不同濃度的酒精（如70%、80%、95%及無水乙醇）進行梯度脫水，逐步去除組織內水分，確保后續(xù)試劑滲透效果。梯度酒精脫水二甲苯透明化處理質量控制要點脫水后的組織需浸泡于二甲苯等透明劑中，置換酒精并溶解脂類物質，使組織呈現(xiàn)透明狀態(tài)，便于石蠟充分浸潤。脫水時間需根據組織大小和類型調整，避免過度脫水導致組織脆化或透明化不足影響切片質量。石蠟浸漬浸蠟后的組織置于包埋模具中，注入液態(tài)石蠟并冷卻固化，形成規(guī)則蠟塊，確保切片時組織完整性。包埋模具定型溫度與時間控制浸蠟溫度需嚴格控制在略高于石蠟熔點范圍，時間根據組織厚度調整，避免滲透不均或熱損傷。透明化后的組織需置于熔融石蠟中浸漬，石蠟滲透至組織內部，填充細胞間隙，為后續(xù)包埋提供支撐結構。浸蠟與包埋冷凍切片制備新鮮組織樣本經OCT包埋后，立即置于液氮或低溫冷凍機中快速冷凍，防止冰晶形成破壞細胞結構。冷凍切片機需調整至適宜厚度（通常5-10微米），刀片角度和速度需優(yōu)化以減少組織皺褶或撕裂。使用防卷板輔助展平切片，并精準貼附于載玻片，避免氣泡或折疊影響染色觀察。快速冷凍固定切片厚度調控防卷板與貼片技術03切片制作與染色PART石蠟切片技術組織固定與脫水處理防脫片處理石蠟包埋與切片采用中性緩沖福爾馬林固定組織，確保細胞結構完整性，隨后通過梯度乙醇脫水去除水分，為石蠟包埋做準備。將脫水后的組織浸入液態(tài)石蠟中固化，使用切片機切取3-5微米厚度的連續(xù)切片，確保切片平整無皺褶。切片貼附于經多聚賴氨酸處理的載玻片上，通過烘烤增強附著力，避免后續(xù)染色過程中組織脫落。HE染色標準化蘇木精染色步驟切片經脫蠟后，使用蘇木精染液核染，鹽酸乙醇分化去除非特異性著色，氨水返藍以增強核染色對比度。伊紅染色與脫水每批次染色需設置陽性對照組織，核質分界清晰、染色均勻為合格標準，避免過染或欠染影響診斷。伊紅染液對細胞質進行對比染色，梯度乙醇脫水去除多余染液，二甲苯透明后中性樹膠封片。質控標準用于顯示肝組織纖維化程度，區(qū)分肝細胞癌與膽管細胞癌，銀氨溶液染色后纖維呈黑色網狀結構。特殊染色應用網狀纖維染色（如Gomori法）阿爾辛藍-過碘酸雪夫染色可鑒別肝癌細胞內的黏液成分，輔助判斷腫瘤分化程度及亞型分類。黏液染色（如PAS/AB法）檢測肝組織內鐵沉積情況，用于遺傳性血色素沉著癥或繼發(fā)性鐵過載相關肝癌的輔助診斷。鐵染色（普魯士藍反應）04顯微鏡檢查階段PART初步篩查方法低倍鏡快速掃描通過低倍鏡（4×或10×物鏡）對組織切片進行整體觀察，初步識別肝小葉結構是否完整、是否存在異常增生區(qū)域或占位性病變。背景基質評估檢查肝竇擴張、纖維間隔形成或炎性浸潤等非特異性改變，輔助判斷病變性質是否為腫瘤性增生。染色對比分析采用常規(guī)HE染色（蘇木精-伊紅染色）評估細胞核與胞質的染色差異，觀察肝細胞排列是否紊亂、是否存在核分裂象增多等早期惡性征象。細節(jié)觀察要點細胞核異型性間質反應性變化高倍鏡（40×物鏡）下重點觀察肝細胞核大小、形態(tài)是否一致，核質比是否增高，核膜是否增厚或出現(xiàn)核仁明顯等惡性特征。組織結構破壞分析肝板是否增厚或斷裂，是否存在假腺管樣排列或菊形團結構，這些改變可能提示肝細胞癌或膽管細胞癌分化傾向。注意腫瘤周邊是否存在淋巴細胞浸潤、纖維組織增生或血管侵犯現(xiàn)象，這些細節(jié)對腫瘤分期和預后評估至關重要。典型惡性征象如發(fā)現(xiàn)梁索狀排列的嗜酸性細胞群可能提示肝細胞癌，而腺樣結構伴黏液分泌則需考慮膽管細胞癌可能。特殊亞型標志微血管侵犯證據在腫瘤邊緣尋找血管內癌栓或衛(wèi)星結節(jié)，此類發(fā)現(xiàn)將直接影響臨床治療方案選擇和預后判斷。包括病理性核分裂象、細胞內膽汁淤積、透明細胞變或脂肪變性等肝癌常見病理學表現(xiàn)，需結合免疫組化進一步驗證。異常特征識別05診斷與報告生成PART組織學特征分析依據國際公認的肝癌病理診斷標準，重點觀察腫瘤細胞的異型性、排列方式及間質反應，結合免疫組化標記（如HepPar-1、Glypican-3）輔助鑒別診斷。診斷標準應用分級與分期評估采用Edmondson-Steiner分級系統(tǒng)評估腫瘤分化程度，同時結合TNM分期標準描述腫瘤浸潤范圍、淋巴結轉移及遠處轉移情況，為臨床治療提供依據。分子病理學整合針對特定病例（如晚期或復發(fā)性肝癌），檢測關鍵基因突變（如TP53、CTNNB1）或融合基因，指導靶向治療或免疫治療選擇。報告撰寫規(guī)范報告需包含標本類型、大體描述、鏡下特征、診斷結論及備注，其中診斷結論需明確腫瘤類型、分級、分期及切緣狀態(tài)，避免模糊性表述。結構化內容要求嚴格使用WHO分類術語（如肝細胞癌、膽管細胞癌等），避免非專業(yè)詞匯，確保報告在不同醫(yī)療機構間的可讀性和可比性。術語標準化若進行特殊染色、免疫組化或分子檢測，需在報告中單獨列出檢測方法、結果及臨床意義，并附參考文獻或指南依據。輔助檢測結果整合結果復核流程結果復核流程初級病理醫(yī)師初診由具備資質的病理醫(yī)師完成初步診斷，標注不確定或疑難病例，提交上級醫(yī)師復核。高級醫(yī)師雙盲復核副高級以上病理醫(yī)師獨立復核初診結果，重點關注高惡性度或交界性病變，必要時組織多學科會診（MDT）討論。報告終審與簽發(fā)經復核無誤后，由科室主任或授權簽發(fā)人電子簽名，系統(tǒng)自動記錄修改痕跡，確保報告可追溯性。06質量控制與存檔PART內部質控措施設備校準與維護制定并嚴格執(zhí)行肝癌組織檢測的標準化操作手冊，確保從樣本接收到報告發(fā)放的每個環(huán)節(jié)均有明確規(guī)范，減少人為誤差。定期組織技術人員培訓，強化操作一致性。試劑批次驗證設備校準與維護對病理切片機、染色機、顯微鏡等關鍵設備實施每日開機校準和周期性深度維護，記錄運行參數(shù)偏差并及時調整，確保設備處于最佳工作狀態(tài)。每批次新到貨的抗體、染色試劑需通過陽性/陰性對照測試，驗證其敏感性和特異性，建立試劑使用檔案追蹤性能波動。外部質控參與實驗室間比對定期參加國家級或國際權威機構組織的肝癌檢測能力驗證項目，橫向比較免疫組化染色強度、分子檢測靈敏度等關鍵指標，識別技術短板。第三方盲樣考核引入第三方機構提供的模擬肝癌組織樣本進行盲測，評估實驗室在突變檢測、病理分級等復雜項目中的準確率，形成改進報告。認證體系合規(guī)嚴格遵循CAP、ISO15189等認證體系要求，定期接受外部評審，確保實驗室質量管理體系與國際標準同步更新。數(shù)字化病理歸檔采用高分辨率掃描系統(tǒng)將肝癌組織切片轉化為數(shù)字圖像，存儲于加密服務器并建立