昆蟲行為轉(zhuǎn)錄組研究方案一、研究概述

昆蟲行為轉(zhuǎn)錄組研究旨在通過高通量測(cè)序技術(shù)解析特定行為（如覓食、繁殖、遷徙等）相關(guān)的基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制。本研究方案涵蓋實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、樣本采集、數(shù)據(jù)分析和功能驗(yàn)證等關(guān)鍵環(huán)節(jié)，以期為昆蟲行為學(xué)、遺傳學(xué)和生態(tài)學(xué)提供分子生物學(xué)層面的理論支持。

二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

（一）研究目標(biāo)

1.解析目標(biāo)行為（如社會(huì)性行為）的關(guān)鍵基因集

2.闡明行為調(diào)控相關(guān)信號(hào)通路和代謝網(wǎng)絡(luò)

3.評(píng)估環(huán)境因素對(duì)行為轉(zhuǎn)錄組的影響

（二）實(shí)驗(yàn)對(duì)象選擇

1.目標(biāo)昆蟲種類：選擇具有典型行為特征且易于培養(yǎng)的物種（如果蠅Drosophilamelanogaster或蜜蜂Apismellifera）

2.實(shí)驗(yàn)分組：

(1)行為處理組：模擬特定行為（如群體互動(dòng)、信息素暴露）

(2)對(duì)照組：未受行為刺激的靜息狀態(tài)樣本

(3)環(huán)境對(duì)照組：不同溫度/濕度條件下的樣本

三、樣本采集與處理

（一）樣本采集流程

1.行為誘導(dǎo)：

(1)社會(huì)行為：設(shè)置群體密度梯度實(shí)驗(yàn)（密度范圍：5-50只/平方厘米）

(2)信息素刺激：使用濃度梯度（0.1-100ng/μL）進(jìn)行暴露實(shí)驗(yàn)

2.樣本采集：

(1)快速麻醉后置于液氮中速凍

(2)分部位取樣（腦、卵巢、肌肉等關(guān)鍵組織）

(3)樣本分裝：每份≤50毫克，標(biāo)記行為狀態(tài)和時(shí)間點(diǎn)

（二）RNA提取與質(zhì)量檢測(cè)

1.提取方法：采用TRIzol法或試劑盒法（如RNeasyMiniKit）

2.質(zhì)量控制：

(1)OD260/280比值：1.8-2.0

(2)RIN值：≥7.0（使用AgilentBioanalyzer檢測(cè)）

四、轉(zhuǎn)錄組測(cè)序與分析

（一）文庫構(gòu)建

1.mRNA富集：基于Oligo(dT)磁珠分離

2.文庫指標(biāo)：

(1)理想片段長(zhǎng)度：200-300bp

(2)平衡度：雙端測(cè)序比例≥70%

（二）數(shù)據(jù)分析流程

1.數(shù)據(jù)預(yù)處理：

(1)去除接頭序列和低質(zhì)量讀長(zhǎng)

(2)對(duì)齊參考基因組（如果蠅基因組DM6）

2.差異表達(dá)分析：

(1)FPKM值計(jì)算

(2)DESeq2包進(jìn)行p值校正（FDR<0.05）

3.功能注釋：

(1)BLAST比對(duì)KEGG數(shù)據(jù)庫

(2)GO富集分析（如GO:0009987行為調(diào)控）

五、實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

（一）qRT-PCR驗(yàn)證

1.引物設(shè)計(jì)：選擇差異倍數(shù)>2且p<0.01的基因

2.實(shí)驗(yàn)條件：

(1)熒光染料：SYBRGreenI

(2)火山圖繪制：ΔΔCt法計(jì)算表達(dá)倍數(shù)

（二）基因功能驗(yàn)證

1.RNA干擾：構(gòu)建gRNA表達(dá)載體（如CRISPR/Cas9系統(tǒng)）

2.表型觀察：記錄行為變化（如攻擊性/協(xié)作性評(píng)分）

六、預(yù)期成果

1.獲得至少50個(gè)行為特異性表達(dá)基因

2.構(gòu)建核心行為調(diào)控網(wǎng)絡(luò)圖

3.驗(yàn)證至少3個(gè)關(guān)鍵基因的功能關(guān)聯(lián)性

七、注意事項(xiàng)

1.樣本采集需在無菌條件下操作

2.測(cè)序數(shù)據(jù)需進(jìn)行多重重復(fù)驗(yàn)證

3.基因命名采用標(biāo)準(zhǔn)基因ID（如FBgn）

一、研究概述

昆蟲行為轉(zhuǎn)錄組研究旨在通過高通量測(cè)序技術(shù)解析特定行為（如覓食、繁殖、遷徙等）相關(guān)的基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制。本研究方案涵蓋實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、樣本采集、數(shù)據(jù)分析和功能驗(yàn)證等關(guān)鍵環(huán)節(jié)，以期為昆蟲行為學(xué)、遺傳學(xué)和生態(tài)學(xué)提供分子生物學(xué)層面的理論支持。通過系統(tǒng)性地比較不同行為狀態(tài)下昆蟲組織的基因表達(dá)譜，可以識(shí)別與行為直接相關(guān)的候選基因、信號(hào)通路和代謝網(wǎng)絡(luò)，進(jìn)而深入理解行為的分子基礎(chǔ)和進(jìn)化機(jī)制。本研究的實(shí)施將依賴于現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)，特別是高通量RNA測(cè)序（RNA-Seq），并結(jié)合生物信息學(xué)分析方法，最終目標(biāo)是建立行為-基因-環(huán)境的關(guān)聯(lián)模型。

二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

（一）研究目標(biāo)

1.解析目標(biāo)行為（如社會(huì)性行為）的關(guān)鍵基因集：通過轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，篩選在特定行為處理組與對(duì)照組之間顯著差異表達(dá)的基因，重點(diǎn)關(guān)注上調(diào)或下調(diào)倍數(shù)大于2且統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性（p值或FDR）小于0.05的基因，構(gòu)建行為特異性表達(dá)基因庫。

2.闡明行為調(diào)控相關(guān)信號(hào)通路和代謝網(wǎng)絡(luò)：利用KEGG、Reactome等公共數(shù)據(jù)庫，對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行通路富集分析，識(shí)別與行為相關(guān)的核心信號(hào)通路（如神經(jīng)遞質(zhì)信號(hào)通路、激素信號(hào)通路）和代謝途徑（如能量代謝、神經(jīng)遞質(zhì)合成通路），繪制行為調(diào)控網(wǎng)絡(luò)圖。

3.評(píng)估環(huán)境因素對(duì)行為轉(zhuǎn)錄組的影響：比較不同環(huán)境條件（如溫度梯度10-30°C，濕度梯度40%-80%）下昆蟲樣本的轉(zhuǎn)錄組差異，分析環(huán)境因子對(duì)行為相關(guān)基因表達(dá)模式的調(diào)節(jié)作用，探究環(huán)境適應(yīng)的分子機(jī)制。

（二）實(shí)驗(yàn)對(duì)象選擇

1.目標(biāo)昆蟲種類：選擇具有典型行為特征且易于培養(yǎng)、遺傳背景清晰、基因組信息完善的物種。例如，果蠅Drosophilamelanogaster（模式生物，基因組注釋完善，行為研究深入）或蜜蜂Apismellifera（社會(huì)性昆蟲，行為復(fù)雜多樣）。選擇依據(jù)應(yīng)包括物種的可操作性、研究相關(guān)性的文獻(xiàn)積累以及實(shí)驗(yàn)資源的可獲得性。

2.實(shí)驗(yàn)分組：

(1)行為處理組：設(shè)計(jì)能夠有效誘導(dǎo)目標(biāo)行為的實(shí)驗(yàn)范式。例如：

-社會(huì)性行為：設(shè)置不同密度梯度的群體培養(yǎng)皿（如5只/平方厘米、20只/平方厘米、50只/平方厘米），收集特定時(shí)間點(diǎn)（如處理后1小時(shí)、6小時(shí)、24小時(shí)）的腦或特定社會(huì)相關(guān)組織；或構(gòu)建同源/異源群體混合實(shí)驗(yàn)，觀察排斥/融合反應(yīng)。

-信息素刺激：使用已知行為效應(yīng)的昆蟲信息素（如性信息素、聚集信息素），設(shè)置梯度濃度系列（如0.1ng/μL、1ng/μL、10ng/μL、100ng/μL），暴露時(shí)間設(shè)定為1小時(shí)或6小時(shí)，收集處理后的樣本。

-覓食行為：針對(duì)特定食物源（如糖水、酵母提取物）進(jìn)行剝奪-供給實(shí)驗(yàn)，比較饑餓組和供給組頭部組織的表達(dá)差異。

(2)對(duì)照組：設(shè)立必要的生物學(xué)和操作對(duì)照組，以排除非行為因素的干擾：

-生物學(xué)重復(fù)：每個(gè)處理組設(shè)置至少3個(gè)生物學(xué)重復(fù)，確保結(jié)果的可靠性。

-時(shí)間對(duì)照：在行為處理開始時(shí)即采集樣本，作為0時(shí)點(diǎn)對(duì)照，用于監(jiān)測(cè)基因表達(dá)的時(shí)間動(dòng)態(tài)。

-載體對(duì)照：在基因功能驗(yàn)證的RNA干擾實(shí)驗(yàn)中，使用不含gRNA的載體作為陰性對(duì)照。

-靜息對(duì)照組：選取未接受任何特定行為刺激、處于常規(guī)飼養(yǎng)環(huán)境下的昆蟲組織作為總體表達(dá)水平的參照。

(3)環(huán)境對(duì)照組：為了研究環(huán)境因素本身的影響，可額外設(shè)置僅在環(huán)境條件（溫度、濕度）改變但無行為刺激的組別，與行為處理組進(jìn)行對(duì)比，區(qū)分行為誘導(dǎo)效應(yīng)與環(huán)境效應(yīng)。

三、樣本采集與處理

（一）樣本采集流程

1.行為誘導(dǎo)：

(1)社會(huì)行為：對(duì)于果蠅，可在直徑90mm的培養(yǎng)皿中設(shè)置不同密度的同源群體（如野生型或特定品系）；對(duì)于蜜蜂，可在標(biāo)準(zhǔn)化巢框中設(shè)置不同規(guī)模的蜂群。行為觀察需在恒定的光照和溫濕度條件下進(jìn)行，使用行為學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)記錄攻擊頻率、清潔行為等指標(biāo)，確保持續(xù)刺激效果。

(2)信息素刺激：采用頂空捕集法或直接點(diǎn)滴法施加信息素。頂空法需使用密閉容器，通過更換含有不同濃度信息素的濾紙條進(jìn)行梯度設(shè)置；點(diǎn)滴法需精確控制信息素溶液的體積。刺激后需確保持素能在樣本采集前達(dá)到穩(wěn)定濃度。

2.樣本采集：在行為誘導(dǎo)結(jié)束后，迅速進(jìn)行樣本采集以捕捉動(dòng)態(tài)變化的基因表達(dá)：

(1)快速麻醉：將昆蟲置于盛有少量雪片（干冰+乙醇）的密閉容器中短暫麻醉，避免劇烈運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致的生理應(yīng)激。麻醉時(shí)間嚴(yán)格控制在1分鐘以內(nèi)。

(2)組織分離：根據(jù)研究需求，精確分離目標(biāo)組織。例如，果蠅腦部分離需在解剖鏡下進(jìn)行，沿頭部中線縱向切開，剝離頭部外殼，取出整個(gè)腦組織；對(duì)于蜜蜂，需分離頭部（包括腦、觸角、復(fù)眼）和卵巢。操作過程中使用無RNase的解剖針和吸水紙。

(3)樣本分裝：將每個(gè)昆蟲個(gè)體的特定組織放入預(yù)冷的RNA提取管中，每個(gè)管子包含1-50毫克的組織樣本（根據(jù)后續(xù)提取試劑盒要求），立即標(biāo)記清晰的實(shí)驗(yàn)標(biāo)識(shí)（組別、時(shí)間點(diǎn)、重復(fù)編號(hào)）?？焖俎D(zhuǎn)移至液氮中速凍，或直接投入-80°C冰箱冷凍保存。

（二）RNA提取與質(zhì)量檢測(cè)

1.提取方法：

(1)TRIzol法：適用于少量組織或混合組織的快速提取。操作步驟包括：加入TRIzol試劑，裂解組織；加入氯仿，混合后靜置，離心分離有機(jī)相；將水相轉(zhuǎn)移至新的離心管，加入異丙醇，-20°C沉淀RNA；洗滌RNA沉淀，干燥后用DEPC水溶解。

(2)試劑盒法（如RNeasyMini/MidKit）：適用于標(biāo)準(zhǔn)化流程操作。操作步驟包括：使用裂解緩沖液（含DTT）裂解組織并homogenize；加入苯酚-氯仿，去除蛋白質(zhì)；使用離心柱純化RNA；使用無RNase水洗脫RNA。選擇哪種方法取決于樣本量、純度和后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。

2.質(zhì)量控制：

(1)OD260/280比值：使用分光光度計(jì)（如NanoDrop）測(cè)定RNA樣品的吸光度。理想OD260/280比值應(yīng)在1.8-2.0之間，表明RNA純度良好，無蛋白質(zhì)或酚類污染物。OD260/230比值也建議檢測(cè)（應(yīng)>2.0），以評(píng)估鹽分和酚類污染。

(2)RIN值（RNAIntegrityNumber）：使用AgilentBioanalyzer和對(duì)應(yīng)的RNATapeStation試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。RIN值范圍0-10，數(shù)值越高表示RNA質(zhì)量越好。對(duì)于轉(zhuǎn)錄組研究，通常要求RIN值≥7.0，表明RNA片段完整，適合進(jìn)行高通量測(cè)序。需檢查RNA降解曲線，確保不存在明顯的降解峰。

(3)理化指標(biāo)：通過1%瓊脂糖凝膠電泳觀察RNA條帶，應(yīng)能看到清晰的18S和28SrRNA條帶，且主條帶銳利，表明RNA完整性良好。同時(shí)記錄RNA濃度（通常以ng/μL表示）。

四、轉(zhuǎn)錄組測(cè)序與分析

（一）文庫構(gòu)建

1.mRNA富集：使用Oligo(dT)磁珠或反轉(zhuǎn)錄試劑盒（如SMARTer?RNAKit）從總RNA中特異性富集poly(A)+mRNA。

(1)Oligo(dT)磁珠法：將含Oligo(dT)的磁珠與poly(A)+mRNA混合，mRNA會(huì)結(jié)合到磁珠上。通過磁力分離，去除未結(jié)合的RNA和其他雜質(zhì)。洗滌磁珠后，即可用于后續(xù)的cDNA合成。

(2)SMARTer?反轉(zhuǎn)錄法：利用SMART（SwitchingMechanismat5'endofRNATemplate）技術(shù)，在mRNA5'端添加一個(gè)可選擇的RNA引物結(jié)合位點(diǎn)，并延長(zhǎng)形成一個(gè)長(zhǎng)鏈cDNA，便于后續(xù)的片段化。

2.文庫指標(biāo)：根據(jù)目標(biāo)物種和測(cè)序平臺(tái)要求，優(yōu)化文庫構(gòu)建參數(shù)。

(1)理想片段長(zhǎng)度：對(duì)于Illumina平臺(tái)，通常構(gòu)建插入片段長(zhǎng)度（InsertSize）在200-300bp左右的文庫?？赏ㄟ^調(diào)整反轉(zhuǎn)錄酶濃度、片段化方法（如隨機(jī)打斷或超聲處理）來控制片段大小。

(2)平衡度：確保文庫中雙端測(cè)序讀長(zhǎng)（Paired-endReads）能夠良好對(duì)齊，且兩端讀長(zhǎng)對(duì)齊質(zhì)量相似。理想情況下，雙端對(duì)齊率應(yīng)≥70%，且兩端對(duì)齊長(zhǎng)度的差異較小?？赏ㄟ^評(píng)估文庫的插入特異性（如通過Bowtie等軟件對(duì)齊到模擬基因組或僅對(duì)齊第一端讀長(zhǎng)）來衡量平衡度。

3.文庫定量與檢測(cè)試驗(yàn)：

(1)定量：使用Qubit熒光計(jì)或KAPALibraryQuantificationKit精確定量cDNA文庫濃度。

(2)檢測(cè)：使用AgilentBioanalyzer和D1000TapeStation檢測(cè)文庫的片段大小分布和濃度，確保符合測(cè)序平臺(tái)的要求。

（二）數(shù)據(jù)分析流程

1.數(shù)據(jù)預(yù)處理：

(1)去除接頭序列和低質(zhì)量讀長(zhǎng)：使用Trimmomatic或Cutadapt等工具，去除測(cè)序接頭、引物序列，并根據(jù)質(zhì)量閾值（如Q值<20）剔除低質(zhì)量讀長(zhǎng)（如3'端讀長(zhǎng)質(zhì)量低于指定值）。對(duì)于雙端測(cè)序，還需檢查配對(duì)讀長(zhǎng)之間的距離是否符合預(yù)期（如IlluminaHiSeq通常為150-200bp），剔除異常距離的讀長(zhǎng)。

(2)對(duì)齊參考基因組：將預(yù)處理后的讀長(zhǎng)比對(duì)到目標(biāo)物種的參考基因組（如果蠅DM6基因組）或轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫（如EnsemblmRNA）。常用工具包括Hisat2或STAR。比對(duì)時(shí)需指定合適的參數(shù)（如splicedalignment參數(shù)），并去除無法對(duì)齊或?qū)R到非目標(biāo)區(qū)域（如基因組注釋外）的讀長(zhǎng)。生成比對(duì)文件（如SAM/BAM格式）。

2.差異表達(dá)分析：

(1)FPKM/TPM計(jì)算：使用featureCounts或HTSeq-count等工具統(tǒng)計(jì)每個(gè)基因在不同樣本中的讀長(zhǎng)數(shù)量。隨后計(jì)算FPKM（FragmentsPerKilobaseoftranscriptperMillionfragmentsmapped）或TPM（TranscriptsPerMillion）值，以標(biāo)準(zhǔn)化基因表達(dá)量，消除樣本大小和基因長(zhǎng)度差異的影響。

(2)差異表達(dá)基因篩選：使用DESeq2或edgeR等R語言包進(jìn)行差異表達(dá)分析。模型中需指定樣本分組和設(shè)計(jì)矩陣。計(jì)算基因表達(dá)差異的倍數(shù)變化（FoldChange,FC）和統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性（如p值或FDR，通常設(shè)為0.05）。篩選出在特定組別（如行為處理組vs對(duì)照組）中表達(dá)顯著變化的基因（如|FC|>2,FDR<0.05）。

3.功能注釋與分析：

(1)基因ID映射與注釋：將篩選出的差異表達(dá)基因ID映射到通用基因標(biāo)識(shí)符（如GeneSymbol、EnsemblID），并利用BioMart或ENSEMBL等數(shù)據(jù)庫進(jìn)行功能注釋，獲取基因的基本信息。

(2)GO富集分析：使用GOseq或g:Profiler等工具，對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行GO（GeneOntology）術(shù)語富集分析，包括生物過程（BP）、細(xì)胞組分（CC）和分子功能（MF）三個(gè)方面。評(píng)估顯著富集的GO術(shù)語，以揭示差異表達(dá)基因在生物學(xué)功能上的共性。例如，可能發(fā)現(xiàn)一組基因顯著富集在“行為調(diào)控”或“神經(jīng)元活性”等BP術(shù)語中。

(3)KEGG通路富集分析：使用KEGGMapper或KOBAS等工具，對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行KEGG（KyotoEncyclopediaofGenesandGenomes）通路富集分析，識(shí)別這些基因參與的信號(hào)通路和代謝網(wǎng)絡(luò)。例如，可能發(fā)現(xiàn)一組基因富集在“神經(jīng)遞質(zhì)受體”通路或“能量代謝”通路中。

(4)通路網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建：整合GO和KEGG分析結(jié)果，構(gòu)建行為調(diào)控相關(guān)的基因-功能-通路網(wǎng)絡(luò)圖，可視化展示基因表達(dá)變化背后的生物學(xué)機(jī)制。

五、實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

（一）qRT-PCR驗(yàn)證

1.引物設(shè)計(jì)：從差異表達(dá)基因列表中，選擇表達(dá)變化顯著（|FC|>4）、統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著（FDR<0.01）且無明顯引物二聚體或非特異性結(jié)合的基因（通常選擇3-5個(gè)）。使用Primer-BLAST在線工具設(shè)計(jì)特異性引物，確保引物位于不同的外顯子上（如果可能），以檢測(cè)RNA剪接異構(gòu)體。引物設(shè)計(jì)完成后，通過Geneious或Primer3軟件評(píng)估引物特異性（Tm值通常在55-65°C）。

2.實(shí)驗(yàn)條件：

(1)cDNA合成：使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒（如PrimeScriptRTReagentKit）將總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，反應(yīng)體系需包含RNA模板、反轉(zhuǎn)錄酶、dNTPs、隨機(jī)引物等。設(shè)置無模板對(duì)照（NTC）以檢測(cè)基因組DNA污染。每個(gè)樣本進(jìn)行3個(gè)技術(shù)重復(fù)。

(2)qPCR反應(yīng)：使用SYBRGreenI熒光染料法或TaqMan探針法在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（如ABIQuantStudio系列）上進(jìn)行。反應(yīng)體系包含cDNA模板、上下游引物（或探針）、SYBRGreenMasterMix（或TaqManMasterMix）。設(shè)置合適的循環(huán)參數(shù)（如預(yù)變性、變性、退火/延伸）。使用β-actin或GAPDH等內(nèi)參基因進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。

(3)數(shù)據(jù)分析：采用2^-ΔΔCt法計(jì)算目的基因相對(duì)于內(nèi)參基因在不同處理組間的相對(duì)表達(dá)倍數(shù)。使用GraphPadPrism或Excel繪制箱線圖展示結(jié)果，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)（如t檢驗(yàn)或ANOVA）。

（二）基因功能驗(yàn)證

1.RNA干擾（RNAi）：針對(duì)qRT-PCR驗(yàn)證中確認(rèn)的關(guān)鍵差異表達(dá)基因，設(shè)計(jì)并構(gòu)建gRNA表達(dá)載體（如基于CRISPR/Cas9系統(tǒng)的sgRNA表達(dá)盒）。通過顯微注射或基因槍等方法將gRNA表達(dá)載體導(dǎo)入昆蟲胚胎或幼蟲中（根據(jù)物種選擇合適的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)）。

(1)gRNA設(shè)計(jì)：使用CRISPRonline或CHOPCHOP等在線工具設(shè)計(jì)高效的gRNA序列，避免脫靶效應(yīng)。合成gRNA表達(dá)質(zhì)粒。

(2)載體轉(zhuǎn)染：選擇合適的轉(zhuǎn)染方法（如電穿孔、脂質(zhì)體介導(dǎo)），將gRNA表達(dá)質(zhì)粒導(dǎo)入昆蟲細(xì)胞或胚胎。

2.表型觀察與行為學(xué)分析：

(1)轉(zhuǎn)基因驗(yàn)證：通過PCR或測(cè)序檢測(cè)gRNA在目標(biāo)昆蟲中的成功導(dǎo)入和切割效率。

(2)行為表型：在轉(zhuǎn)染gRNA的昆蟲個(gè)體中，觀察并記錄目標(biāo)行為的改變。例如，對(duì)于攻擊性相關(guān)的基因，可以測(cè)量同籠飼養(yǎng)時(shí)的攻擊次數(shù)、攻擊持續(xù)時(shí)間；對(duì)于社會(huì)性相關(guān)的基因，可以觀察群體中的合作行為頻率、信息素反應(yīng)閾值等。

(3)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)：使用非參數(shù)檢驗(yàn)（如Mann-WhitneyU檢驗(yàn)）或參數(shù)檢驗(yàn)（如t檢驗(yàn)）比較RNAi處理組與對(duì)照（如空載體對(duì)照組）在行為指標(biāo)上的差異。

六、預(yù)期成果

1.獲得至少50個(gè)行為特異性表達(dá)基因：通過轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和差異表達(dá)分析，篩選出在目標(biāo)行為處理組中相對(duì)于