*第七章

高效液相色譜分析法7.4.1

影響分離的因素7.4.2分離類型的選擇7.4.3液相色譜的應用7.4.4制備型液相色譜第四節(jié)

影響分離的因素與操作條件的選擇Highperformanceliquidchromatograph,HPLC

Factorsinfluencedseparationandchoiceofoperationcondition*7.4.1

影響分離的因素1.影響分離的因素與提高柱效的途徑液體的擴散系數(shù)僅為氣體的萬分之一，則在高效液相色譜中,速率方程中的分子擴散項B/u較小，可忽略不計，即：

H=A+Cu

液體的黏度比氣體大100倍，密度為氣體的1000倍，故降低傳質阻力是提高柱效主要途徑。粒度較大時的LC曲線。*由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。液相色譜中，不可能通過增加柱溫來改善傳質。分離過程需要保持恒溫。2.流速流速是調整分離度和出峰時間的重要可選擇參數(shù)。*

3.固定相及分離柱

氣相色譜中的固定液原則上都可以用于液相色譜，其選用原則與氣相色譜一樣。但在高效液相色譜中，分離柱的制備是一項技術要求非常高的工作，一般很少自行制備。

4.改變淋洗液組成、極性是改善分離的最直接的因素。*7.4.2分離類型選擇*7.4.2分離類型選擇*例1.色譜方法選擇實例——a,b,g,d生物酚分析實例條件一：

固定相：C18反相柱流動相：95%甲醇-水條件二：

固定相：硅膠正相柱流動相：正己烷2025/11/164.流動相選擇溶劑的溶劑強度參數(shù)和極性是溶劑選擇的重要依據(jù)。液固色譜流動相選擇常采用薄層色譜技術進行初步探索。吸附劑含水量是控制吸附劑活性，影響溶質保留的重要因素。反相色譜流動相條件優(yōu)化（1）流動相選擇改變流動相溶劑性質和組成，這是調節(jié)k和選擇性α最簡便、有效的方法。如：采用正相液-液分配分離時：首先選擇中等極性溶劑，若組分的保留時間太短，降低溶劑極性，反之增加。也可在低極性溶劑中，逐漸增加其中的極性溶劑，使保留時間縮短。反相色譜流動相條件優(yōu)化（1）流動相選擇

Xe：接受質子能力；Xd：給予質子能力和靜電力；Xn：偶極矩。I組的Xe值較大，屬質子受體溶劑；VII組的Xd值較大，屬質子給于體溶劑；V組的Xn值較大，屬偶極作用力溶劑。同組溶劑在分離中具有相似的選擇性，不同組差別較大。反相色譜流動相條件優(yōu)化（2）流動相pH值流動相緩沖溶液pH值對離子性溶質保留有顯著影響，pH值變化可導致k值10倍左右變化，視溶質離子化基團多少而異。

（3）衍生化技術通過樣品組分柱前衍生化可達到兩個目的:一是降低溶質極性，提高疏水性;二是向溶質中引進檢測響應，主要是紫外吸收、熒光激發(fā)基團，以提高檢測靈敏度或高選擇性檢測響應。溶質柱后衍生化則只有利于提高檢測靈敏度。2025/11/164.選擇流動相時應注意的幾個問題（1）盡量使用高純度試劑作流動相，防止微量雜質長期累積，損壞色譜柱和使檢測器噪聲增加。（2）避免流動相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。如使固定液溶解流失，酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等。（3）試樣在流動相中應有適宜的溶解度，防止產(chǎn)生沉淀并在柱中沉積。（4）流動相同時還應滿足檢測器的要求。當使用紫外檢測器時，流動相不應有紫外吸收。*7.4.3HPLC的應用

1.環(huán)境中有機氯農(nóng)藥殘留量分析可對水果、蔬菜中的農(nóng)藥殘留量進行分析。固定相：薄殼型硅膠(37～50m)流動相：正己烷流速：1.5mL/min色譜柱：50cm2.5mm(內徑)檢測器：示差折光檢測器*2.稠環(huán)芳烴的分析

稠環(huán)芳烴多為致癌物質。

固定相：十八烷基硅烷化鍵合相流動相：20%甲醇-水～100%甲醇線性梯度淋洗，2%/min

流速：1mL/min

柱溫：50oC柱壓：70104Pa

檢測器：紫外檢測器*3.血漿分析*7.4.4制備型液相色譜

獲得高純物質（色譜純）的有效方法。半制備柱（內徑8mm，長度15～30cm），一次制備量0.1～１mg。1.色譜柱的柱容量（柱負荷）

對分析柱：不影響柱效時的最大進樣量；對制備柱：不影響收集物純度時的最大進樣量；超載：進樣量超過柱容量。柱效迅速下降，峰變寬。

超載可提高制備效率，以柱效下降一半或容量因子k降低10%為宜。*2.液相制備色譜的方法（1）主峰可獲得良好分離；使用制備柱，超載提高效率。（2）兩主成分之間的小組分；超載，分離切分使待分離組分成為主成分（富集）后，再次分離制備。

*3.制備型液相色譜

制備型液相色譜：結構與分析型一樣，但泵流量大，進樣量大，采用制備柱，柱后有餾分收集器。

制備柱：內徑20～50mm，柱長50cm。*請選擇內容結束7.1高效液相色譜的特點與儀器

7.2基本原理與主要分離類型

7.3固定相與流動相7.4影響分離的因素與操作條件選擇

7.5離子色譜法*第七章

高效液相色譜分析法7.5.1離子色譜法原理7.5.2離子色譜連續(xù)抑制裝置7.5.3

離子色譜的應用第五節(jié)

離子色譜法HighperformanceliquidchromatographIonchromatograph,IC*離子色譜儀*7.5.1離子色譜法基本原理(IonChromatography，簡稱IC)以無機、特別是無機陰離子混合物為主要分析對象，在20世紀70年代出現(xiàn)、80年代迅速發(fā)展。

傳統(tǒng)離子交換色譜存在著兩個難于解決的問題：(1)需要高濃度淋洗液洗脫且洗脫時間很長；(2)洗脫后的組分缺乏靈敏、快速的在線檢測方法。（動畫）*1.離子色譜法原理離子交換原理。與傳統(tǒng)離子交換的不同點：采用交換容量非常低的特制離子交換樹脂為固定相；細顆粒柱填料，采用高壓輸液泵，高柱效；低濃度淋洗液或本底電導抑制（在分離柱后，采用抑制柱來消除淋洗液的高本底電導）；在線電導檢測器，對離子高靈敏；快速分離分析微量無機離子混合物；各種抑制裝置及無抑制方法的出現(xiàn)，發(fā)展迅速。*2.離子色譜具有以下優(yōu)點（1）分析速度快

數(shù)分鐘內完成一個試樣的分析。（2）分離能力高

在適宜的條件下，可使常見的各種陰離子混合物分離；例：使用雙柱法，在十幾分鐘內可使七種陰離子完全分離。（3）分離混合陰離子的有效方法（4）耐腐蝕儀器流路采用全塑件，玻璃柱。*7.5.2離子色譜裝置類型抑制型：抑制柱型、連續(xù)抑制型

分離柱中離子交換樹脂的交換容量通常在0.01～0.05mmol/g干樹脂。**離子色譜連續(xù)抑制裝置圖*離子色譜連續(xù)抑制原理圖*7.5.2離子色譜裝置類型非抑制型:

當進一步降低分離柱中樹脂的交換容量(0.007～0.07mmol/g干樹脂),使用低濃度、低電離度的有機弱酸及弱酸鹽作淋洗液，如苯甲酸、苯甲酸鹽等。檢測器可直接與分離柱相連，不需抑制柱。*7.5.3離子色譜的應用雙柱陰離子分析:

薄殼型陰離子交換樹脂分離柱(3×250mm)。流動相：0.003mol·L-1NaHCO3/0.0024mol·L-1Na2CO3，流量138mL/h。七種陰離子在20分鐘內基本上得到完全分離，各組分含量在3～50μg/g。*單柱無抑制陰離子分析:

淋洗液通常采用pH4～9的有機酸鹽緩沖溶液。常用的有：苯甲酸鹽水溶液：適用于分離一、二價陰離子，濃度為0.5～5×10-3mol·L-1；鄰苯二甲酸鹽水溶液：分離能力比苯甲酸鹽強，可用于二價陰離子及強保留離子的分離，調整pH為3～4，也可以分離乙酸、甲酸和琥珀酸等混合物；檸檬酸鹽水溶液：較強的淋洗液，電荷為3，可在分析強保留離子時使用。

*雙柱陽離子分析１：兩種基本的淋洗液：0.005mol·.L-1HCl用于淋洗一價陽離子；0.0015mol·L-1HCl和0.0015mol·L-1間苯二胺混合溶液用于淋洗堿土金屬。分離效果分別如圖所示。*單柱陽離子分析２：

分離堿金屬和氨離子時，淋洗液場采用2mmol·L-1

的鹽酸、硝酸及高氯酸等。堿土金屬的分離采用間苯二胺和乙二胺的硝酸鹽為淋洗液。使用含有配位劑的淋洗液可以大大提高分離的選擇性，如在乙二胺的硝酸鹽溶液中加入酒石酸根或羥基丁酸根，可分離過渡金屬離子。*有機酸分