生物技術(shù)考試重點(diǎn)復(fù)習(xí)資料一、細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)（一）細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的核心差異（有無(wú)核膜包被的細(xì)胞核、細(xì)胞器類(lèi)型）是高頻考點(diǎn)。需掌握線粒體（氧化磷酸化）、葉綠體（光合磷酸化）的能量轉(zhuǎn)換功能，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（蛋白加工與脂質(zhì)合成）、高爾基體（蛋白分選與糖基化修飾）的分工協(xié)作，以及溶酶體的水解酶作用機(jī)制。（二）細(xì)胞代謝糖酵解、三羧酸循環(huán)、氧化磷酸化的關(guān)鍵酶（如己糖激酶、檸檬酸合酶）與能量產(chǎn)出（ATP、NADH/FADH?的生成邏輯）需精準(zhǔn)記憶。光合作用的光反應(yīng)（類(lèi)囊體膜，ATP/NADPH生成）與暗反應(yīng)（葉綠體基質(zhì)，卡爾文循環(huán)）的物質(zhì)與能量轉(zhuǎn)化邏輯是核心，尤其RuBP羧化酶的催化特性。（三）細(xì)胞分裂與分化有絲分裂各時(shí)期（前、中、后、末）的染色體行為（凝聚、排列、分離、解聚）和細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化（紡錘體形成、核膜重建）需結(jié)合圖像理解。細(xì)胞分化的本質(zhì)是基因選擇性表達(dá)，干細(xì)胞（胚胎干細(xì)胞、成體干細(xì)胞）的全能性/多能性/單能性差異是?？家c(diǎn)。二、分子生物學(xué)核心技術(shù)（一）PCR技術(shù)原理基于DNA半保留復(fù)制，三個(gè)關(guān)鍵步驟的溫度與作用：變性（94-96℃，雙鏈解旋）；退火（50-65℃，引物結(jié)合模板）；延伸（72℃，Taq酶催化子鏈合成）。應(yīng)用場(chǎng)景包括基因克隆、疾病診斷（如新冠核酸檢測(cè)）、法醫(yī)學(xué)鑒定，需區(qū)分實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）的定量原理（Ct值與起始模板量的負(fù)相關(guān)）。（二）核酸電泳技術(shù)瓊脂糖凝膠（分離大片段DNA，如基因組、質(zhì)粒）與聚丙烯酰胺凝膠（分離小片段，如引物、短鏈RNA）的適用范圍。核酸帶負(fù)電向正極遷移，遷移率與分子大小（對(duì)數(shù)負(fù)相關(guān)）、構(gòu)象（超螺旋質(zhì)粒遷移最快）、凝膠濃度（濃度越高，篩分小片段能力越強(qiáng)）的關(guān)系需清晰。（三）分子雜交技術(shù)Southern雜交（DNA-DNA）、Northern雜交（RNA-DNA）、Western雜交（蛋白-抗體，注意與前兩者的探針類(lèi)型差異：核酸探針vs抗體探針）的實(shí)驗(yàn)流程（電泳→轉(zhuǎn)膜→雜交→顯影）與應(yīng)用（基因拷貝數(shù)分析、mRNA表達(dá)量檢測(cè)、蛋白鑒定）。三、基因工程原理與操作（一）工具酶與載體限制性內(nèi)切酶：識(shí)別回文序列，產(chǎn)生粘性末端（如EcoRI）或平末端（如SmaI），需區(qū)分同裂酶（同識(shí)別序列）與同尾酶（同粘性末端）。DNA連接酶：T4連接酶可連接粘性/平末端，E.coli連接酶僅連粘性末端，ATP或NAD?為能量來(lái)源。載體：質(zhì)粒（小型、自主復(fù)制、多克隆位點(diǎn)）、噬菌體（λ噬菌體載體容量大）、病毒載體（基因治療用，如腺病毒）的特征，載體需具備的元件（復(fù)制原點(diǎn)、篩選標(biāo)記、多克隆位點(diǎn)、啟動(dòng)子/終止子）。（二）基因工程操作流程“切（酶切）→連（連接）→轉(zhuǎn)（轉(zhuǎn)化/轉(zhuǎn)染）→篩（篩選）→表（表達(dá)）”的邏輯鏈。轉(zhuǎn)化方法（CaCl?法使細(xì)菌感受態(tài)，電穿孔法適用于難轉(zhuǎn)化細(xì)胞），篩選策略（抗生素抗性、藍(lán)白斑篩選、PCR鑒定），原核表達(dá)（如pET載體，T7啟動(dòng)子）與真核表達(dá)（如哺乳動(dòng)物細(xì)胞，CMV啟動(dòng)子）的差異（翻譯后修飾、蛋白活性）。四、蛋白質(zhì)工程技術(shù)（一）蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系一級(jí)結(jié)構(gòu)（氨基酸序列）決定高級(jí)結(jié)構(gòu)（二級(jí)α-螺旋/β-折疊，三級(jí)結(jié)構(gòu)域，四級(jí)亞基聚合），需結(jié)合肌紅蛋白（單鏈，氧結(jié)合）與血紅蛋白（四聚體，別構(gòu)效應(yīng)）的例子理解。結(jié)構(gòu)生物學(xué)技術(shù)（X-射線晶體學(xué)、冷凍電鏡、NMR）的適用對(duì)象（晶體蛋白、大分子復(fù)合物、膜蛋白）。（二）蛋白質(zhì)改造策略理性設(shè)計(jì)：基于結(jié)構(gòu)分析定點(diǎn)突變（如酶活性中心改造），需掌握PCR介導(dǎo)的定點(diǎn)突變方法（重疊延伸PCR）。非理性設(shè)計(jì)：定向進(jìn)化（易錯(cuò)PCR、DNA改組），通過(guò)隨機(jī)突變與高通量篩選獲得目標(biāo)蛋白，典型案例如Taq酶的熱穩(wěn)定性優(yōu)化。融合蛋白設(shè)計(jì)：如GST-融合（親和純化）、GFP-融合（亞細(xì)胞定位）的應(yīng)用邏輯。五、發(fā)酵工程與生物制藥（一）發(fā)酵工藝類(lèi)型分批發(fā)酵：封閉體系，培養(yǎng)基一次性加入，適用于產(chǎn)物積累與細(xì)胞生長(zhǎng)同步的情況（如酵母發(fā)酵產(chǎn)乙醇）。補(bǔ)料分批發(fā)酵：流加碳源/氮源，控制代謝副產(chǎn)物（如乙酸抑制），常用于抗生素生產(chǎn)。連續(xù)發(fā)酵：恒速流加新鮮培養(yǎng)基，排出發(fā)酵液，細(xì)胞濃度穩(wěn)定，適用于大規(guī)模生產(chǎn)（如胰島素發(fā)酵）。（二）微生物代謝調(diào)控初級(jí)代謝（菌體生長(zhǎng)相關(guān)，如糖代謝）與次級(jí)代謝（產(chǎn)物合成，如抗生素）的關(guān)系，代謝工程策略（敲除競(jìng)爭(zhēng)途徑、過(guò)表達(dá)限速酶，如提高青蒿素前體合成的工程菌構(gòu)建）。（三）生物制藥案例胰島素的基因工程生產(chǎn)（原核表達(dá)A、B鏈后體外復(fù)性），單克隆抗體的雜交瘤技術(shù)（骨髓瘤細(xì)胞+免疫B細(xì)胞，篩選分泌特異性抗體的雜交瘤），需區(qū)分人源化抗體（CDR區(qū)人源化）與全人源抗體（轉(zhuǎn)基因小鼠制備）。六、生物信息學(xué)基礎(chǔ)（一）序列分析工具BLAST（同源序列比對(duì)，區(qū)分nucleotide-nucleotideBLAST與protein-proteinBLAST），ClustalW（多序列比對(duì)，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)）的核心功能。GenBank、PDB（蛋白結(jié)構(gòu)）、KEGG（代謝通路）等數(shù)據(jù)庫(kù)的檢索邏輯。（二）基因組與轉(zhuǎn)錄組分析基因組組裝（從頭組裝vs參考基因組比對(duì)），RNA-seq的差異基因分析流程（建庫(kù)→測(cè)序→比對(duì)→差異分析），需理解FPKM/RPKM的定量原理（消除基因長(zhǎng)度與測(cè)序深度的影響）。七、生物技術(shù)倫理與法規(guī)（一）生物安全等級(jí)實(shí)驗(yàn)室生物安全柜（BSL-1至BSL-4）的適用場(chǎng)景，基因編輯（如CRISPR/Cas9）的脫靶效應(yīng)與倫理爭(zhēng)議（人類(lèi)生殖細(xì)胞編輯的禁止性規(guī)定）。（二）倫理審查原則赫爾辛基宣言（臨床試驗(yàn)倫理），貝爾蒙報(bào)告的三大原則：尊重（知情同意）、有利（風(fēng)險(xiǎn)最小化，收益最大化）、公正（受試者選擇公平）。轉(zhuǎn)基因生物安全評(píng)價(jià)（環(huán)境釋放風(fēng)險(xiǎn)、食物鏈影響）的核心指標(biāo)。復(fù)習(xí)策略建議1.概念串聯(lián)：將“基因工程載體”與“發(fā)酵工程宿主”結(jié)合，理解載體在宿主中的復(fù)制與表達(dá)邏輯。2.圖表輔助：繪制PCR步驟、細(xì)胞代謝通路、基因工程流程圖，強(qiáng)化視覺(jué)記憶。3.真題導(dǎo)向：分析歷年考題的高頻考點(diǎn)（如PCR原理、細(xì)胞分化本質(zhì)），針對(duì)性突破。