DB34T10342009動(dòng)物組織中呋喃唑酮和磺胺類藥物的殘留測(cè)定高效液相色譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了動(dòng)物組織中呋喃唑酮和磺胺類藥物殘留量的高效液相色譜測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬、牛、羊、雞等動(dòng)物肌肉、肝臟、腎臟組織中呋喃唑酮、磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉等藥物殘留量的測(cè)定。本方法的檢出限為：呋喃唑酮0.5μg/kg，磺胺類藥物1.0μg/kg；定量限為：呋喃唑酮1.5μg/kg，磺胺類藥物3.0μg/kg。原理：試樣中的呋喃唑酮和磺胺類藥物經(jīng)乙腈提取，正己烷去脂，MCX固相萃取柱凈化，采用高效液相色譜紫外檢測(cè)器測(cè)定，外標(biāo)法定量。試劑和材料：除另有規(guī)定外，所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。乙腈：色譜純；甲醇：色譜純；正己烷；甲酸；乙酸銨；氨水；無水硫酸鈉：650℃灼燒4h，冷卻后置于干燥器中備用。標(biāo)準(zhǔn)品：呋喃唑酮（Furazolidone，CAS號(hào)67458）純度≥98.0%；磺胺嘧啶（Sulfadiazine，CAS號(hào)68359）純度≥99.0%；磺胺二甲嘧啶（Sulfamethazine，CAS號(hào)57681）純度≥99.0%；磺胺甲噁唑（Sulfamethoxazole，CAS號(hào)723466）純度≥99.0%；磺胺間甲氧嘧啶（Sulfamonomethoxine，CAS號(hào)1220839）純度≥98.0%；磺胺喹噁啉（Sulfaquinoxaline，CAS號(hào)59405）純度≥98.0%。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別準(zhǔn)確稱取各標(biāo)準(zhǔn)品10.0mg（精確至0.1mg），用乙腈溶解并定容至100mL，配制成100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于18℃避光保存，有效期3個(gè)月?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)中間液：準(zhǔn)確吸取各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.0mL于100mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成1.0μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，于4℃避光保存，有效期1個(gè)月。MCX固相萃取柱：60mg，3mL，或相當(dāng)者；0.22μm有機(jī)濾膜。儀器和設(shè)備：高效液相色譜儀：配有紫外檢測(cè)器；分析天平：感量0.1mg和0.01g；均質(zhì)器：轉(zhuǎn)速不低于10000r/min；離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于4000r/min；氮吹儀；渦旋混合器；固相萃取裝置；pH計(jì)；超聲波清洗器。測(cè)定步驟：準(zhǔn)確稱取5.00g（精確至0.01g）均質(zhì)樣品于50mL聚丙烯離心管中，加入10mL乙腈，均質(zhì)1min，超聲提取10min，以4000r/min離心5min。將上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管中，殘?jiān)儆?0mL乙腈重復(fù)提取一次，合并上清液。加入5mL正己烷，渦旋混合1min，以4000r/min離心5min，棄去上層正己烷層。將下層乙腈相轉(zhuǎn)移至潔凈離心管中，加入2g無水硫酸鈉脫水，以4000r/min離心5min。取5mL上清液過MCX固相萃取柱（使用前用3mL甲醇和3mL水活化），依次用3mL水和3mL甲醇洗滌，抽干。用5mL含5%氨水的甲醇溶液洗脫，收集洗脫液。洗脫液在40℃水浴中氮吹至近干，用1.0mL乙腈溶解殘?jiān)?，過0.22μm有機(jī)濾膜，供高效液相色譜測(cè)定。色譜條件：色譜柱：C18柱，250mm×4.6mm，5μm，或相當(dāng)者；流動(dòng)相：A相為0.1%甲酸水溶液，B相為乙腈；梯度洗脫程序：0min時(shí)A相95%，B相5%；10min時(shí)A相70%，B相30%；20min時(shí)A相50%，B相50%；25min時(shí)A相95%，B相5%；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm；進(jìn)樣量：20μL。結(jié)果計(jì)算：試樣中各藥物殘留量按式（1）計(jì)算：X=(A×c×V)/(As×m)式中：X——試樣中藥物殘留量，單位為微克每千克（μg/kg）；A——試樣溶液中藥物的峰面積；c——標(biāo)準(zhǔn)工作液中藥物的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；V——試樣溶液最終定容體積，單位為毫升（mL）；As——標(biāo)準(zhǔn)工作液中藥物的峰面積；m——試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。精密度：在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)