目標要求了解血液生化樣品制備原理；掌握血液生化樣品制備方法。掌握離心機使用方法和注意事項第1頁一、血液生化樣品制備采血

測定用血液，多由靜脈采集。普通在飼喂前空腹采取，所以時血液中化學成份含量比較穩(wěn)定。采血時所用針頭、注射器、盛血容器要清潔干燥；接血時應讓血液沿著容器壁慢慢注入，以防溶血和產生泡沫。第2頁血清制備血清：全血不加抗凝劑自然凝固后析出淡黃色液體。血清制備：由靜脈采集血液，注入清潔干燥試管或離心管中。將試管放成斜面，讓其自然凝固，普通經(jīng)3h血塊自然收縮而析出血清；也可將血樣放入37℃恒溫箱內，促使血塊收縮，能較快析出血清。為了縮短時間，也可用離心機分離(未凝或凝固后均可離心)，分離出血清，用滴管移人另一試管中供測定用，如不及時使用，應貯于冰箱中。分離出血清不應溶血。第3頁全血及血漿制備全血：采血前加入抗凝劑，包含了血漿和血纖蛋白。血漿：全血離心后除去血纖蛋白液體。抗凝劑：凡是能抑制血液凝固反應化合物稱為抗凝劑。第4頁慣用抗凝劑使用方法1、草酸鉀(鈉)。其優(yōu)點是溶解度大，與血液混合后，快速與血中鈣離子結合，形成不溶草酸鈣，使血液不再凝固。配制方法：通常先配成10％草酸鉀或草酸鈉溶液，然后吸收此液0.1ml于試管中，轉動試管，使其鋪散在試管壁上，置80℃干燥箱內烘干，管壁呈白色粉末狀，加塞備用。每管含草酸鉀或草酸鈉10mg，可抗凝血液5ml。應用范圍：適合用于非蛋白氮、血糖等各種測定項目，但不適合用于鉀、鈉和鈣測定；另外草酸鹽能抑制乳酸脫氫酶、酸性磷酸酶和淀粉酶，故使用時給予注意。第5頁草酸鉀一氟化鈉混合劑。血液內一些化學成份(如血糖)離開機體后仍易被酶作用而影響測定結果。如用混合劑可抑制酶作用(氟化鈉有抑制糖酵解作用)，因而能預防血糖等化學物質分解。配制方法：稱取草酸鉀6g，氟化鈉3g，加蒸餾水至lOOml，分裝在試管內，每管0.25ml。80℃烘干后加塞備用。每管含混合劑22.5mg，可抗凝血液5ml。應用范圍：最適合用于血糖測定，而不適合用于脲酶法尿素氮測定(因氟化鈉能抑制脲酶活性)。第6頁肝素是一個很好抗凝劑，因它對血中有機成份和無機成份測定均無影響，其主要作用是抑制凝血酶原轉變?yōu)槟?，使纖維蛋白原不能轉化為纖維蛋白而凝血。配制方法：常將肝素配成lmg／ml水溶液，每管裝0．1ml，再橫放蒸干(不宜超出50℃)備用。每管可抗凝血液5～lOml。市售肝素大多數(shù)為鈉鹽，可按10mg／ml配制成水溶液。每管裝0.1ml，按上法烘干，可使5～lOml血液不凝固。應用范圍：適合用于血液有機物測定；不適合用于凝血酶原測定。第7頁乙二胺四乙酸二鈉鹽(簡稱EDTANa2)EDTANa2對血液中鈣離子有很大親和力，能使鈣離子絡合而使血液不凝固。配制方法：常配成40mg／mlEDTANa2水溶液，每管分裝0.1ml，在80℃干燥箱內烘干備用。每管可抗凝血液5ml。應用范圍：適合用于各種生化分析，但不適合用于血漿中含氮物質、鈣及鈉測定。第8頁血漿制備血漿制備由靜脈采集血液，放人裝有抗凝劑試管或離心管中，輕輕搖動，使血液與抗凝劑充分混合，以防小血塊形成?？鼓伸o置或離心沉淀分離(r／min,10min)，以使血細胞下沉，上清液即為血漿。血漿與血清成份基本相同，只是血清不含纖維蛋白原。

第9頁無蛋白血濾液制備

多生化分析要防止蛋白質干擾，經(jīng)常先將其中蛋白質除去；分析血液中許多成份時，也經(jīng)常需要除去蛋白質，制成無蛋白質血濾液。制備無蛋白血濾液方法很多，可依據(jù)不一樣需要加以選擇。現(xiàn)將生化慣用無蛋白血濾液制備方法介紹以下：

第10頁鎢酸法

原理：血液中蛋白質在pH小于其等電點時，可用鎢酸來沉淀。鎢酸鈉與硫酸混合產生鎢酸和硫酸鈉，游離鎢酸被，蛋白質吸附，形成不溶性鎢酸蛋白而沉淀，經(jīng)過濾或離心，除去沉淀即得無蛋白血濾液。試劑：①10%鎢酸鈉溶液；②0.333mol／L硫酸溶液。儀器與器材：錐形瓶、吸管、奧氏吸管、濾紙、漏斗或離心管及離心機。第11頁方法與步驟：①取50ml錐形瓶1只，加入蒸餾水7份；②用奧氏吸管吸收抗凝血l份，擦去管壁外血液，將吸管插人錐形瓶中水底部，遲緩地放出血液。放完血液后，將吸管提升吸收上清液再吹人，重復洗管3次。充分混合，使紅細胞完全溶解；③加入0.333mol／L硫酸溶液1份，隨加隨搖，充分混勻。此時血液由鮮紅變成棕色，靜置5～10min，使其酸化完全；④加入10％鎢酸鈉溶液1份，邊加邊搖，血液由透明變成凝塊狀。當振搖到不再產生泡沫為止；⑤放置數(shù)分鐘后用定量濾紙過濾或離心除去沉淀，即得完全澄清無蛋白血濾液，供測定用。用此法制得無蛋白血濾液為10倍稀釋血濾液。即每毫升血濾液相當于全血0.ml，適合用于葡萄糖、非蛋白氮、尿素氮、肌酸酐和氯化物等測定。第12頁三氯醋酸法

原理：三氯醋酸是一個有機強酸，可使血液中蛋白質變性而形成不溶蛋白質鹽沉淀。其上清液即為無蛋白血濾液。此液呈酸性，慣用來測定無機磷等。試劑：10％三氯醋酸溶液。儀器與器材：錐形瓶、刻度吸管和奧氏吸管、濾紙、漏斗或離心管和離心機。第13頁方法與步驟：①取9份10％三氯醋酸放人錐形瓶中；②加入抗凝血1份，邊加邊搖，靜置5min；③過濾或離心，即得完全澄清無蛋白血濾液，此液亦為10倍稀釋之血濾液。附注(1)等無蛋白血濾液時，各液加妥后，搖勻不應有泡沫，不然表明蛋白質沉淀不完全。(2)所得無蛋白血濾液均應是五色透明液體，如呈粉紅色則說明蛋白質沉淀不完全。

第14頁二、離心機使用方法第15頁離心分離技術是依據(jù)物體在一個實用離心場所中狀態(tài)而發(fā)展起來新技術。不一樣密度、大小或形狀物質在不一樣速度離心場所中沉降，所