ICS65.120

CCSB46

34

安徽省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB34/T1363—2022

代替DB34/T1363-2011

飼料中喹烯酮的測(cè)定高效液相色譜法

Determinationofquinocetoneinfeedcontent—Highperformanceliquid

chromatographymethod

2022-06-29發(fā)布2022-07-29實(shí)施

安徽省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB34/T1363—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件代替DB34/T1363-2011《飼料中喹烯酮的測(cè)定-高效液相色譜法》，除編輯性修改外主要技

術(shù)變化如下：

a)增加方法檢出限、定量限；

b)修改了原理（見第4章）；

c)修改了試劑和材料內(nèi)容（見第5章）；

d)增加了儀器設(shè)備（見第6章）；

e)更改了樣品制備（見第7章）；

f)修改“色譜條件”（見第8章）；

g)修改了結(jié)果計(jì)算與表述（見第8.4章）。

請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。

本文件由安徽省獸藥飼料監(jiān)察所提出。

本文件由安徽省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳歸口。

本文件起草單位：安徽省獸藥飼料監(jiān)察所、安徽華測(cè)檢測(cè)技術(shù)有限公司、阜陽市農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法

監(jiān)督支隊(duì)、蕭縣畜牧獸醫(yī)水產(chǎn)服務(wù)中心、岳西縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局、淮北市畜牧中心，安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)、安徽省

農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所。

本文件起草人：劉發(fā)全、謝軍池、縱豐學(xué)、朱明齊、王文風(fēng)、袁琪、束玲玲、許曉靖、李佳慶、吳

敏、吳昊、許世富、邵穎、潘孝成、宋亞偉。

——2011年首次發(fā)布為DB34/T1363-2011，2022年第一次修訂。

I

DB34/T1363—2022

飼料中喹烯酮的測(cè)定高效液相色譜法

1范圍

本文件規(guī)定了飼料中喹烯酮含量的高效液相色譜測(cè)定方法。

本文件適用于配合飼料、濃縮飼料和預(yù)混合飼料中喹烯酮含量的測(cè)定。

本方法檢出限為0.5mg/kg，定量限為1.0mg/kg。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T20195動(dòng)物飼料試樣的制備

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4原理

試樣中的喹烯酮用乙腈甲醇磷酸溶液超聲提取，經(jīng)離心、過濾后，高效液相色譜分離，紫外檢測(cè)器

測(cè)定，外標(biāo)法定量。

5試劑和材料

除特殊說明外，本方法所用試劑均為分析純，水為符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。

甲醇：色譜純。

乙腈：色譜純。

二甲基甲酰胺。

磷酸。

0.025mol/L磷酸溶液：稱取85％的磷酸（5.5）2.88g，加水稀釋至1000mL。

流動(dòng)相：乙腈-甲醇-（0.025mol/L）磷酸溶液，按體積比25：20：55（v/v）。

標(biāo)準(zhǔn)品：喹烯酮標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)：81810-66-4），純度≥98.0％。

喹烯酮標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備如下：

a)標(biāo)準(zhǔn)溶液儲(chǔ)備液（0.5mg/mL）：取喹烯酮標(biāo)準(zhǔn)品50mg，精密稱定，用10mL二甲基甲酰胺

溶解后，加入甲醇定容至100mL棕色容量瓶，配制成濃度為0.5mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于

4℃冰箱中保存，有效期二個(gè)月。

1

DB34/T1363—2022

b)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別吸取儲(chǔ)備液（5.9-a））1mL、2mL、5mL、10mL、20mL于100mL棕

色容量瓶，用流動(dòng)相溶液（5.7）定容，標(biāo)準(zhǔn)工作溶液系列濃度分別為5μg/mL、10μg/mL、

25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL。

6儀器和設(shè)備

高效液相色譜儀：配紫外檢測(cè)器。

分析天平：感量0.1g、0.1mg、0.01mg。

離心機(jī)：≥8000r/min。

超聲波儀。

分析篩：孔徑0.42mm。

粉碎機(jī)。

微孔濾膜：孔徑0.45μm有機(jī)濾膜。

7試樣的制備

按GB/T20195的規(guī)定制備，磨碎，全部通過分析篩（6.5），混勻，裝入磨口瓶中備用。

8分析步驟

試樣的提取

稱取試樣適量（配合飼料5.0g、濃縮飼料3.0g、預(yù)混合飼料1.0g），精確至0.1g，置于

100mL具塞錐形瓶中，準(zhǔn)確加入流動(dòng)相50mL，超聲提取30min，移取10mL至離心管，以8000

r/min離心10min，取離心上清液過0.45μm有機(jī)濾膜，濾液供高效液相色譜儀測(cè)定，同時(shí)進(jìn)行平

行試驗(yàn)。

參考色譜條件

色譜柱：色譜柱：C18柱（250mm×4.6mm，5μm）或相當(dāng)者；

檢測(cè)波長(zhǎng)：260nm；

流動(dòng)相：乙腈-甲醇-（0.025mol/L）磷酸溶液，按體積比25：20：55（v/v）；

流速：1.0mL/min；

柱溫：25℃；

進(jìn)樣體積：10μL。

測(cè)定

喹烯酮標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和試樣溶液分別進(jìn)樣，得到色譜峰面積響應(yīng)值，在線性范圍內(nèi)，用外標(biāo)法測(cè)定，

以保留時(shí)間定性，峰面積定量。喹烯酮標(biāo)準(zhǔn)工作溶液色譜圖參見附錄A中圖A.1。

結(jié)果的計(jì)算與表述

8.4.1計(jì)算公式

結(jié)果按式（1）計(jì)算：

式中：

2

DB34/T1363—2022

?×?×1000

?=··········································································(1)

?×1000

式中：

X——試樣中喹烯酮含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；

C——試液色譜峰對(duì)應(yīng)的喹烯酮濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；

m——試樣質(zhì)量，單位為克（g）；

f——稀釋倍數(shù)。

8.4.2結(jié)果表示

測(cè)定結(jié)果用兩次平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，測(cè)定結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

9精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的10％。

3

DB34/T1363—2022

附錄A

（資料性）

喹烯酮標(biāo)準(zhǔn)溶液的圖譜

圖譜見圖A.1。

mAU

4.815-QXT

70

60

50

40

30

20

10

0