DB41河南省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布IDB41/T1103—2015本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由河南省林業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：鄭州大學(xué)、河南省綠洲園林有限公司。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：史屹峰、黃進(jìn)勇、張建波、劉彬、趙志營(yíng)、王景玉、李嬌。本標(biāo)準(zhǔn)參加起草人：崔青艷、韓玉霞、喬林、張獻(xiàn)計(jì)、王俊、復(fù)鵬、田小娟、李幸紅、岳彩鵬、朱世新。DB41/T1103—20151太行菊組織培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了太行菊組織培養(yǎng)的術(shù)語(yǔ)和定義、培養(yǎng)基的配制、組織培養(yǎng)、煉苗移栽。本標(biāo)準(zhǔn)適用于太行菊組織培養(yǎng)。2術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。2.1太行菊太行菊(Opisthopapustaihangensis)，菊科菊蒿亞族太行菊屬多年生宿根草本植物，中國(guó)太行山區(qū)特有珍稀物種。3培養(yǎng)基的配制3.1培養(yǎng)基選擇選擇MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基（MS培養(yǎng)基參見(jiàn)附錄A）。3.2母液與激素的配制3.2.1大量元素母液的配制大量元素母液按50倍配制。使用時(shí)再稀釋50倍，配好的母液放置于棕色瓶保存于4℃冰箱中備用。3.2.2微量元素母液的配制微量元素母液按100倍配制。使用時(shí)再稀釋100倍，配好的母液放置于棕色瓶保存于4℃冰箱中備3.2.3有機(jī)母液的配制有機(jī)母液按100倍配制。使用時(shí)再稀釋100倍，配好的母液放置于棕色瓶保存于4℃冰箱中備用。3.2.4鐵鹽母液的配制分別溶解FeSO4·7H2O和Na2-EDTA，加熱并不斷攪拌，使完全溶解，冷卻后，將2種溶液混合，再用蒸溜水加至所需容積，按100倍配制。使用時(shí)再稀釋100倍，配好的母液放置于棕色瓶保存于4℃冰箱中備用。3.2.56-芐氨基腺嘌呤配制稱(chēng)取100mg6-芐氨基腺嘌呤（6-BA），用少量0.1mol/LHCL加熱溶解，再用蒸餾水定容至100mL,DB41/T1103—20152濃度為1.0mg/L。3.2.6萘乙酸配制稱(chēng)取10mg萘乙酸（NAA），用1mL無(wú)水乙醇溶解，再用蒸餾水定容至100mL，濃度為0.1mg/L。3.3培養(yǎng)基配方3.3.11/2MS基本培養(yǎng)基：1/2MS+30g/L白砂糖+10g/L瓊脂條；3.3.2叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+0.1mg/LNAA+1.0mg/L6-BA+30g/L白砂糖+10g/L瓊脂條；3.3.3生根培養(yǎng)基：1/2MS+0.2mg/LNAA+30g/L白砂糖+10g/L瓊脂條；3.3.4無(wú)激素基本培養(yǎng)基：MS+30g/L白砂糖+10g/L瓊脂條。3.4配制以配制10L培養(yǎng)基為例，按順序進(jìn)行如下操作：a)MS為基本培養(yǎng)基，取少量蒸餾水倒入容器內(nèi)，除了大量元素母液取200mL外，其余母液均取100mL倒入容器內(nèi)；1/2MS為基本培養(yǎng)基時(shí)；取少量蒸餾水倒入容器內(nèi)，除了大量元素母液取100mL外，其余母液均取50mL倒入容器內(nèi)；b)稱(chēng)取300g蔗糖倒入容器，攪拌溶解；c)加蒸餾水定容至10L；d)按照培養(yǎng)基配方，加入NAA和6-BA。叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基加10mLNAA和100mL6-BA；生根培養(yǎng)基加20mLNAA；e)稱(chēng)取100g瓊脂條，倒入上面配好的溶液中，放在電爐上加熱至沸騰，直到瓊脂條熔化；f)稍微冷卻后，用精密試紙或酸度計(jì)調(diào)整pH至5.7～5.8，分裝；g)對(duì)分裝好的培養(yǎng)基用高溫高壓蒸汽消毒，壓力1.1kg/cm2、溫度121℃條件下保持25min，待滅菌完成好，壓力為0的時(shí)候取出培養(yǎng)基，平放在地面上冷卻凝固。4組織培養(yǎng)4.1培養(yǎng)材料及消毒4.1.1培養(yǎng)材料的選擇和確定10月底至11月初，采集當(dāng)年飽滿(mǎn)太行菊的種子作為培養(yǎng)材料，存放于4℃冰箱。4.1.2消毒滅菌將種子用自來(lái)水沖洗2h后，在超凈工作臺(tái)內(nèi)用75%酒精漂洗15s，后用2%的次氯酸鈉浸泡8min（加2滴聚山梨酯），蒸餾水沖洗2～3次。4.2無(wú)菌播種用無(wú)菌濾紙把種子表面附著的水分吸干凈，然后在在超凈工作臺(tái)內(nèi)用鑷子將種子接種到1/2MS培養(yǎng)基上，置入溫度為20℃~25℃光照培養(yǎng)室內(nèi)誘導(dǎo)種子萌發(fā)，待種子發(fā)芽長(zhǎng)出2片真葉，進(jìn)行光照處理，光照強(qiáng)度2500lx，光照時(shí)間14h/d，培養(yǎng)30d～35d。4.3誘導(dǎo)及分化DB41/T1103—20153切除長(zhǎng)出來(lái)的無(wú)菌幼苗根部部分，把得到的無(wú)菌苗莖接種到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，放到光照培養(yǎng)室培養(yǎng)30d。4.4增殖繼代培養(yǎng)將誘導(dǎo)出來(lái)的叢生芽分割成含2～3個(gè)小芽的芽叢，切去死葉和基部黃褐色疏松組織，繼續(xù)接種到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，放置于光照培養(yǎng)室進(jìn)行增殖繼代培養(yǎng)，30d為一個(gè)周期，如此循環(huán)。4.5培養(yǎng)環(huán)境溫度為25℃±1℃,光照時(shí)間14h/d，光照強(qiáng)度2500lx,相對(duì)濕度70%～80%。4.6生根培養(yǎng)4.6.1生根苗的選擇從組培苗中切取生長(zhǎng)健壯、葉色正常、葉片舒展的無(wú)根苗。4.6.2誘導(dǎo)生根在超凈工作臺(tái)內(nèi)，將無(wú)根苗上長(zhǎng)至4cm以上的再生芽從基部切下，接種到生根培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)根原基的形成，黑暗培養(yǎng)3d～5d。后將其接種到無(wú)激素MS培養(yǎng)基誘導(dǎo)根的伸長(zhǎng)，光照培養(yǎng)20d～25d。5煉苗移栽5.1煉苗待根長(zhǎng)至3cm時(shí)開(kāi)始煉苗，將培養(yǎng)瓶放置溫室自然散射光下，溫度控制在25℃±1℃,閉口煉苗2d~3d，再打開(kāi)瓶蓋，加入3mL800倍多菌靈溶液，煉苗3d～5d。5.2移栽用鑷子將生根苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗去基部培養(yǎng)基，在800倍多菌靈溶液中浸泡30min后移栽到基質(zhì)中?；|(zhì)采用草炭土、蛭石、珍珠巖比例為3:1:1。溫度25℃±1℃,前3d～4d相對(duì)濕度保持在80%～90%，后逐漸降低濕度，每天葉面噴水2～3次，當(dāng)